猪肺表面活性蛋白A在急性肺损伤中的变化及其意义

 【目的】通过对猪血清和支气管肺泡灌洗液(BALF)中肺表面活性蛋白A(SP-A)含量的变化及其与反映肺损伤程度的指标－肺含水量变化的关系的研究,探讨猪SP-A在急性肺损伤(ALI)和兽医临床上诊治猪呼吸系统疾病(PRD)中的意义。【方法】选择50±1日龄的18头健康大白猪建立包含对照组(NS组)和油酸组(OA组)的油酸－急性肺损伤模型;取1、3和6 h时相点,分别用ELISA技术检测血清中SP-A含量、用Western blotting技术检测BALF中SP-A含量;血清中SP-A含量、BALF中SP-A含量与肺含水量两两变量间的相关性用Kendall相关分析法进行分析。【结果】与NS组相比,OA组的肺含水量在1、6 h时相点均显著增加(P＜0.05),在3 h时相点极显著增加(P＜0.01);在OA组中,3 h时相点肺含水量高于1 h时相点、6 h时相点肺含水量低于3 h时相点,但差异均不显著;推断在OA组3个时相点中,1 h时相点处于肺损伤前期,3 h时相点肺损伤较严重,6 h时相点位于肺损伤的缓解期。与NS组相比,在OA组的肺损伤前期,血清中SP-A含量极显著增加(P＜0.01),在OA组的肺损伤较严重时期和肺损伤缓解期,血清中SP-A含量高于NS组,但是与NS组差异均不显著;而OA组中,肺损伤较严重时期血清中SP-A含量比肺损伤前期极显著降低(P＜0.01),肺损伤缓解期血清中SP-A含量比肺损伤较严重时期显著降低(P＜0.05)。在肺损伤不同时期,OA组BALF中SP-A含量都极显著低于NS组(P＜0.01);在OA组中,肺损伤较严重时期与肺损伤前期相比,BALF中SP-A含量极显著降低(P＜0.01),肺损伤缓解期与肺损伤较严重时期相比,BALF中SP-A含量极显著增加(P＜0.01)。相关分析显示：血清中SP-A含量与肺含水量之间呈极显著正相关关系(r=0.50327,P＜0.01),BALF中SP-A含量与肺含水量之间呈极显著负相关关系(r=－0.72499,P＜0.0001)。【结论】由于SP-A 的表达具有非肺组织特异性,所以把猪血清中SP-A含量作为反映肺损伤程度的指标还有待进一步的研究;但是可以把BALF中SP-A含量作为急性肺损伤中反映猪肺损伤程度及其预后检测的重要指标之一。本研究为兽医临床上通过检测血清和BALF中SP-A含量诊治猪呼吸系统疾病以及开展相关研究奠定了基础。     

猪胞内劳森氏菌GXNN株4个抗原性候选基因抗原性分析

参考GenBank上已发表的胞内劳森氏菌相关蛋白序列,设计了4对引物,分别扩增了4个抗原性候选基因（3个外膜蛋白基因和1个表面脂蛋白基因）,并将4个抗原性候选基因构建好原核表达载体后进行原核表达、SDS—PAGE电泳和Western blotting分析。SDS—PAGE电泳检测初步确定重组融合蛋白pET32a—L10902、pET32a—L11022能够进行表达,分别得到53、37kDa的条带;Western blotting分析则初步确定pET32a—L11022具有抗原性。研究结果首次验证胞内劳森氏菌外膜蛋白基因是否具有抗原性,为诊断试剂盒及基因工程疫苗的研制提供理论基础。     

核酸探针检测山东省鸡群中马立克病毒、传染性贫血病毒、网状内皮增生病病毒和呼肠孤病毒的流行状况

为对山东家禽业免疫抑制病的流行情况进行调查,从烟台、滨州、临沂、泰安、聊城、青岛大型养殖场共随机收集600只病死鸡的肝脏和脾脏病例组织样品,用斑点杂交的方法检测样品中鸡马立克病毒（Marek’s disease virus, MDV）、传染性贫血病毒（chicken anemia virus,CAV）、网状内皮增生病病毒(reticuloendotheliosis virus,REV)和呼肠孤病毒（reovirus,REOV）的感染情况。结果发现,MDV、CAV、REV、REOV的感染率分别为5.17%、8.17%、1.17%、2.5%,检出率较以前的研究报道有降低趋势,有多种双重感染和三重感染,表明山东家禽业在免疫抑制病方面总体控制较好,但不同的养殖场发病情况差异极显著,管理水平参差不齐,个别地区发病情况严重,检出率超过其他地区的总和。     

斑点杂交法检测犬瘟热病毒

N蛋白是犬瘟热病毒核衣壳的主要构成成分,又是保守性较强的免疫原性蛋白。本研究对犬瘟热病毒N基因重组质粒酶切、凝胶回收目的DNA进行DIG标记制备探针,用此探针斑点杂交检测40只疑似犬瘟热患病犬鼻液和20只病死犬脾脏、肝脏、心脏、肺脏、肾脏、血液中的犬瘟热病毒。结果显示,40只疑似犬中,有33只是阳性,阳性率是82.5%,比胶体金诊断试纸阳性检出率高。而对病死犬的不同组织检测中,脾脏中病毒检出率最高,表明斑点杂交技术在犬瘟热病毒的早期诊断和流行病学调查中有很高的应用价值。     

羊驼细胞色素C氧化酶VIc亚基基因序列的测定与分析

本研究通过克隆分析羊驼细胞色素c氧化酶VIc亚基基因的序列,对羊驼细胞色素c氧化酶的VIc亚基基因的结构和功能进行了初步探索。实验利用免疫印迹技术（Southern blotting）对已有羊驼皮肤cDNA文库进行筛选并测序,结果表明该基因大小为424bp,含一个完整的ORF,位于36～266bp,编码77个氨基酸。对该基因序列分析表明：该基因编码的蛋白质含有疏水性区域、一个跨膜区并具有信号肽。同源性分析表明,核苷酸序列同源性为76％～100％。     

甘蔗线虫病抗性基因的PCR检测研究

以38份未经线虫病常规鉴定的甘蔗种质资源为供试材料,根据番茄抗根结线虫病基因和甜菜抗胞囊线虫病基因的保守序列区域,分别设计了2条上游引物、2条下游引物,对设计的引物进行组合后,应用PCR特异扩增从中分别筛选出各1对特异引物。用抗根结线虫基因设计的特异引物进行扩增最终获得了1条大约460 bp大小的特异片段;用抗胞囊线虫基因设计的特异引物进行扩增最终获得了1条大约690 bp大小的特异片段,进一步进行了PCR-Southern杂交,确认了该2条特异引物的真实性。     

副溶血性弧菌外膜蛋白的提取与免疫鉴定

[目的]为进一步确定致病性副溶弧菌共有的特异性抗原和保护性抗原奠定基础。[方法]通过小鼠毒力试验研究5株副溶血性弧菌菌株对小鼠的致病性,比较在不同培养基和培养时间下所提取的外膜蛋白的SDS-PAGE图谱并通过Western blotting分析研究副溶血性弧菌菌株的免疫原性。[结果]5株临床分离的副溶血性弧菌菌株明显对小鼠具有不同的致病性,同时能在兔血平板上形成明显的溶血圈,为TDH阳性菌株。通过菌体免疫获得的多克隆抗体,与除副溶血性弧菌外的其他试验菌株均无交叉反应。Western blotting分析显示该多克隆抗体与5株致病性副溶血弧菌菌株可发生程度不等的阳性反应,提取的外膜蛋白具有较好的免疫原性。[结论]该研究为制备有效预防副溶血性弧菌引起的疾病的菌苗提供了理论基础。     

犬瘟热病毒H基因的序列分析与表达

以临床疑似犬瘟热病犬外周血总RNA为模板,采用RT-PCR方法扩增犬瘟热病毒(CDV)血凝素(H)基因。序列测定和分析表明该病料犬瘟热病毒H基因序列与国内其他地区分离到的毒株同源性较高(94.6%~99.2%),而与Onderstepoort株、Convac株等疫苗毒株的同源性较低(90.4%~91.2%)。分子遗传进化分析显示所有毒株可分为7个大的分支,且各分支间具有一定的地域性,其中待检病料中CDV与大多数中国分离株一样处于Ⅰ型。进一步以H全基因为模板,截短表达其3′端816 bp、459 bp两个片段,并克隆入原核表达载体pET30 a进行表达。结果显示它们分别能表达大小约为36.4 ku和22.2 ku的融合蛋白。免疫转印表明该纯化蛋白均可与犬瘟热病毒抗血清发生阳性反应,说明重组蛋白具备抗原性,可用于进一步的血清学研究。     

不同株鸡新城疫病毒结构蛋白的比较研究

对鸡新城疫病毒(NDV)B1株、La Sota株、Mukteswar株和长春强毒野毒株(C87E7)感染的鸡胚尿囊液分别进行浓缩和提纯,并作SDS-PAGE和Western印迹,进行结构蛋白及其抗原性的分析。结果,4株NDV的电泳图谱显示11-12条结构蛋白带,分子量从43000到120000不等。其中各株均有3条主要蛋白带,8～9条次要蛋白带。不同株NDV的次要蛋白带有明显的区别。Schiff氏试剂染色证明,分子量为76000、52000和50000的蛋白为糖蛋白。结构蛋白的抗原性分析表明,4株NDV蛋白带中有2条具有共同抗原性,其他蛋白带的抗原性则有差异或明显不同。     

Effect of Canine Pyometra on IGF-2, IGF-1R Proteins Expressions of Endometria

To investigate the expression of IGF-2 and IGF-1R protein in endometria of canine pyometra and analyze the possible correlation with the incidence of canine pyometra.Immunohistochemistry PV method and Western blotting were used to measure the IGF-2 and IGF-1R expression characteristic of 5 normal endometria and 19 endometria of canine pyometra.The results showed that the IGF-2 level of endometria from pyometra group was extremely significant higher than that of control group by immunohistochemistry and Western blotting (P<0.01).The positive expression rate of IGF-1R in endometria of canine pyometra compared with that in the normal endometria was extremely significant higher by immunohistochemistry and Western blotting (P<0.01).The correlation analysis of IGF-2 and IGF-1R in canine pyometra showed that the result of immunohistochemistry was low correlation (ｒ=0.423), the result of Western blotting was high correlation (ｒ=0.927).The data suggested that increased expression of IGF-2 and IGF-1R played an important role in occurrence of canine pyometra.