重组瘦蛋白对猪蛋白质代谢的影响

利用重组瘦蛋白进行动物饲养试验研究。结果表明:重组瘦蛋白对猪蛋白质代谢指标有不同程度的影响。腹腔注射0.5 mg/kg和1.0 mg/kg体重重组瘦蛋白后,血清总蛋白(TP)和球蛋白(GPs)的含量高于对照组,其中0~3周差异显著(P<0.05),而血清白蛋白(ALB)的含量只在注射后第3周有明显提高;血清天门冬氨酸转氨酶(AST)有不同程度的提高,在注射后1~3周和5~7周内明显高于对照组(P<0.05);血清碱性磷酸酶(ALP)和丙氨酸转氨酶(ALT)只有在注射0.5 mg/kg体重重组瘦蛋白后0~3周明显提高(P<0.05);注射0.1 mg/kg体重重组瘦蛋白对猪蛋白质代谢指标无明显影响(P>0.05)。     

2种植物多糖对PRRSV灭活苗免疫猪抗体及T淋巴细胞亚群的影响

将24头35日龄断奶仔猪随机分为6组,2种多糖(山药多糖和黄芪多糖)分别以高、低2个剂量(山药多糖剂量17.10、8.55mg/kg,黄芪多糖剂量为11.50、5.75mg/kg)和猪PRRSV灭活苗同时注射,于免疫后不同时间点采血,监测PRRSV抗体水平和外周血中T淋巴细胞亚群的变化.结果表明,2种多糖均能增强免疫猪的体液免疫,其中以高剂量的黄芪多糖效果较好;2种多糖均能促进猪CD3+细胞的增殖,其中以山药多糖效果较好,提示2种多糖对PRRSV灭活苗免疫效果均有较好的增强作用.     

猪白细胞介素-8荧光定量PCR检测方法的建立

用RT-PCR技术从猪肺泡巨噬细胞总RNA中扩增出猪白介素（IL）-8基因的278 bp cDNA片段,并克隆到pGEM-T Easy载体中,构建成含有猪IL-8 cDNA片段的重组质粒。通过质粒的Real-time PCR方法,建立猪IL-8 cD-NA的Real-time PCR标准曲线。该方法特异性强、灵敏度高、重复性强,可用于猪IL-8 mRNA含量的定量检测。     

猪圆环病毒2型感染对伪狂犬疫苗免疫应答的影响

为明确PCV2感染对伪狂犬(PR)疫苗免疫应答的影响,本研究采用阻断ELISA方法对单独接种猪PR疫苗组(A组)及PCV2人工感染3周后接种猪PR疫苗组(PA组)不同时相血清中的猪PR病毒gB抗体进行检测;同时对不同时相前腔静脉血进行CD4+/CD8+流式细胞术及血常规分析。结果表明,在PCV2感染后2周至5周间,A组白细胞含量均高于PA组,随后PA组白细胞恢复至与A组略高的正常水平;在整个实验中,除接种猪PR疫苗后1周(WPI)和9周(WPI)外的所有时相PA组的淋巴细胞含量均略高于A组;PCV2感染后可使记忆/激活Th细胞数量略有升高,幼稚型Th细胞含量的下降;PCV2感染后2周～7周PA组Tc细胞均高于A组,在9WPIPA组Tc细胞数量显著下降(p0.05);除9WPI外,A组的S/N值均低于PA组。结果表明,PCV2感染看降低机体产生针对PRVgB特异性抗体水平,而且在一定程度上降低了幼稚型Th细胞及Tc细胞含量。     

复方中药免疫球蛋白制剂的研制与应用

【目的】结合中药与免疫球蛋白对仔猪疾病的不同防治机理,进行复方中药免疫球蛋白制剂的制备及其初步应用研究,为猪血的综合利用与兽用免疫球蛋白类制剂的开发应用提供依据。【方法】以健康猪血为原料,从其中分离纯化免疫球蛋白;将免疫球蛋白与白头翁、三颗针、黄柏、苦参、苍术、益母草等6种中药提取物相结合,制备复方中药免疫球蛋白制剂,并对断奶仔猪进行初步应用研究。【结果】免疫球蛋白粗品、纯品中的IgG含量分别为658.33和955.33ng/mL,IgG的效价分别为1∶128与1∶64;纯品的IgG含量和效价与标准品接近,二者无显著差异(P0.05)。与中药制剂、免疫球蛋白制剂相比,复方中药免疫球蛋白制剂使断奶仔猪的头均日增质量分别提高了20.1%(P0.05)和19.3%(P0.05),料质量比分别下降了10.5%(P0.05)和8.4%(P0.05);28～42日龄,血清中的IgG含量显著高于其他试验组(P0.05)。【结论】分离纯化免疫球蛋白的方法可行;复方中药免疫球蛋白制剂能够显著提高断奶仔猪生产性能与机体免疫力。     

猪miRNA的研究进展

微小RNA(miRNA)是一类长度为18~24 nt的非编码RNA,以序列特异性方式调控着基因表达。猪作为重要的肉品动物,其各方面的基因调控已日益引起人们关注,其中小RNA因在动物生长过程中起着重要的调节作用而在近年来逐渐成为研究的热潮。目前已报道的猪miRNA仅有78个。作者对已报道的猪miRNA的研究进展特别是与肌肉和脂肪相关的miRNA进行了综述。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒N蛋白基因的克隆及原核表达

通过RT-PCR技术从细胞毒液中扩增N蛋白cDNA,克隆至原核表达载体pET-28a(+)中,所获得的重组质粒pET-28a-N经酶切鉴定正确后,将其转化入表达菌E.coliBL21plysS诱导表达,用SDS-PAGE与Western blotting对表达产物进行鉴定。结果表明,通过RT-PCR扩增获得长度为372 bp的N蛋白基因,诱导表达重组质粒pET-28a-N,经SDS-PAGE检测,IPTG终浓度为1 mmol/L时,诱导4 h蛋白表达量最高,出现分子质量约为18 ku的目的蛋白带,与N蛋白的理论值相符。经Western blotting检测,该表达产物可与PRRSV阳性血清发生特异性反应。获得的PRRSV N蛋白为建立针对该病毒抗体的间接ELISA检测方法,以及为进一步研发PRRS抗体检测试剂盒奠定了基础。     

猪圆环病毒2型甘肃兰州株全基因组序列的克隆及序列分析

参照GenBank中登录的猪圆环病毒2型(PCV2)全基因组序列,设计合成了2对特异性引物,从甘肃兰州疑似断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)病料中提取PCV2基因组DNA,分段PCR扩增全长基因组。回收PCR产物,将其插入pGEM-T Easy载体,构建了重组质粒pGEM-PCV2,转化后筛选、提取阳性重组质粒进行测序。结果表明,克隆到的PCV2全基因组长为1767 bp。应用DNAStar序列分析软件对所测PCV2序列与GenBank中登录的包括甘肃在内的国内外PCV2毒株进行同源性分析。结果显示,克隆的PCV2与ZhouKou(EU656143)毒株遗传关系较近,其核苷酸和推导的氨基酸序列同源性高达99.4%、98.6%,与已报道的GS03(EU547458)甘肃毒株遗传关系较远,可能是流行于甘肃兰州的一个变异毒株GSLZ(GenBank登录号为:FJ447482)。     

猪圆环病毒2型ORF3基因的原核表达

用原核表达系统表达猪圆环病毒2型ORF3基因,分析ORF3蛋白的抗原性。根据GenBank上公布的猪圆环病毒2型(PCV-2)核苷酸序列进行分析,针对ORF3基因设计并合成1对特异性引物,PCR扩增该基因,并将此片段克隆入原核表达载体pET-32a(+)上,命名为pET32a-ORF3,转化大肠杆菌Rosetta-blue(DE3) pLacⅠ感受态细胞,1.0 mmol/L IPTG 37 ℃诱导表达。结果表明,PCR扩增得到315 bp的片段,重组蛋白大小约为29 ku,与预期大小相符。Western blotting分析结果表明,重组蛋白能与抗His-tag的单克隆抗体反应,不与PCV-2阳性血清发生反应。猪圆环病毒2型ORF3基因能在大肠杆菌中成功表达,但与阳性血清之间没有反应原性,为进一步研究PCV-2 ORF3蛋白的功能及特性奠定基础。     

高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒GD07b株的分离鉴定及Nsp2基因同源性分析

在某集约化猪场采集疑似高致病性猪繁殖与呼吸综合征病死猪的肺、淋巴结等病料,进行检测,将RT-PCR检测结果为阳性的病料处理后接种Marc-145细胞,培养72~96 h后细胞单层出现明显的CPE。收获病毒经RT-PCR方法检测,并将此PCR产物经纯化后连同引物送相关公司进行测序,结果显示,该病毒为繁殖与呼吸综合征病毒Nsp2基因缺失株,将该病毒命名为HPPRRSV-GD07b株。将GD07b株序列与国内外19株PRRSVNsp2基因进行比较分析,结果表明,该毒株Nsp2基因与CH-1a株等4株PRRSV经典株同源性较低,为60.5%~81.6%;而与14株变异株同源性较高,为90.6%~98.9%。