解偶联蛋白mRNA研究进展

解偶联蛋白（UCPs）是机体组织特异表达的线粒体内膜蛋白质，有阻止肥胖的作用。UCPs有5种同族体，UCP1在啮齿类动物调节动物体重、维持体温有重要作用。UCP2主要存在于成年大型动物和人类，与糖尿病有关，UCP3主要存在于骨骼肌一啮齿类动物的棕色脂肪组织中，提供非颤抖的生热作用。UCP4是小鼠和非人类的灵长目动物大脑特有的线粒体UCPs同族体，可能与控制食欲有关。UCP5存在于人和小鼠的多 , 大脑和附睾特别丰富，受寒冷和绝食的影响，在UCPs转基因或基因敲出的实验动物可改善肥胖症，UCPs同族体受到多种因子调控。食物调节影响UCPs mRNA同族体在不同组织的特异表达。高等植物线粒体UCPs同族体PUMP、stUCP也有同样的解偶联作用。     

Effect of dietary supplementation of chitosan and galacto-mannan-oligosaccharide on serum parameters and the insulin-like growth factor-I mRNA expression in early-weaned piglets

The study was to determine effects of dietary supplementation of chitosan (COS) and galacto-mannan-oligosaccharids (GMOS) on some serum biochemical indices, serum growth hormone (GH) and insulin-like growth factor-I (IGF-I) levels, and hepatic and long gissimus muscle IGF-I mRNA expression in early-weaned piglets. Twenty six Duroc × Landrace × Yorkshire piglets at the age of 15 days were used. The piglets had access to creep feed during the suckling. Six piglets were sacrificed for sampling at the beginning of the study. The other 20 piglets were individually housed in metabolic cages and randomly allotted to four corn and soybean meal-based diets including the control group, the antibiotic group with 110 mg lincomycin/kg diet, the COS group containing 0.025% COS, and the GMOS group with 0.20% GMOS, respectively, in a 2-week feeding experiment. Blood urea nitrogen (BUN) level was reduced whereas serum total protein concentration was increased (P < 0.05) in responses to the COS and GMOS supplementation. Dietary supplementation of COS and GMOS also increased (P < 0.05) the serum GH and IGF-I levels along with enhanced hepatic and the muscle IGF-I mRNA abundance. Dietary supplementation of oligosaccharides such as COS and GMOS may improve growth and feed conversion efficiency by increasing plasma GH and IGF-I levels, in the early-weaned piglets.     

mRNA 差异显示法筛选黄花石蒜中加兰他敏合成相关基因

目的筛选和克隆黄花石蒜加兰他敏相关基因。方法采用mRNA 差异显示法（mRNA differential display PCR,DD-PCR）, 对7 月份黄花石蒜产加兰他敏含量最高的部位花蕊和含量最低的部位花葶进行基因表达差异的研 究,筛选其差异片段,再对差异片段进行回收、克隆、测序及序列分析和同源性比较。结果黄花石蒜花蕊和花葶中存 在明显的基因表达差异,发现差异条带44 条,经序列分析和同源性比较,确认其中2 个条带与黄花石蒜加兰他敏合成 相关,另一条可能与加兰他敏运输代谢调控有关。结论通过DD-PCR 得到的3 个同源序列为研究黄花石蒜中加兰他 敏的合成途径提供了有力依据。     

鹅MAPK14基因部分序列克隆及填饲对其mRNA丰度的影响

为研究填饲对鹅丝裂原活化蛋白激酶14(MAPK14)mRNA表达水平的影响,本实验克隆了鹅MAPK14部分编码区序列,并用荧光定量PCR方法检测了填饲对四川白鹅和朗德鹅肝组织MAPK14基因表达量的影响。结果表明:获得鹅MAPK14基因cDNA 951 bp序列,可编码316个氨基酸残基。经分析,鹅MAPK14部分核苷酸序列与原鸡MAPK14基因的同源性为94.8%,对应的氨基酸同源性为99.7%;荧光定量PCR检测发现,无论在对照组还是填饲组,四川白鹅的MAPK14表达量均高于朗德鹅,填饲能显著上调MAPK14 mRNA在2个鹅品种中的表达丰度。结果提示,填饲能够引起鹅肝组织中MAPK14表达丰度显著增加,且该影响存在显著的品种差异。     

鹅ACSL4基因克隆及其与肝脂质沉积的关系研究

本研究旨在克隆鹅长链酯酰辅酶A合成酶4(ACSL4)基因,探讨其与鹅肝脂质沉积的关系和品种间的表达差异。本实验通过RT-PCR、实时定量等技术扩增鹅ACSL4基因CDS、检测了该基因在皮脂、腹脂、肝脏等10个组织中的表达情况及填饲对其在肝脏中表达的影响,并探讨其表达量与血浆胰岛素、鹅肝脏甘油三酯(TG)、肝重等指标间的相关性。结果表明:鹅ACSL4基因CDS全长2 013 bp,编码670个氨基酸。保守结构预测发现,其蛋白质与哺乳动物一样,也存在2个保守功能区(ATP/AMP motif和FACS motif),它与鸡、人、猪、小鼠、大鼠的同源性分别为96.9%、80.4%、80.1%、78.5%、78.4%;组织表达结果显示,该基因主要于大脑、腹脂、心肌、睾丸等组织中表达,而在肝脏中表达相对较低;填饲引起ACSL4 mRNA在鹅肝脏的表达丰度极显著增加(P<0.01);且与肝脏脂质沉积相关指标呈显著正相关(P<0.05),暗示其在鹅肝脂肪变性中可能扮演着重要的角色。     

胰岛素、胰高血糖素对体外培养肝细胞DGAT2mRNA的影响

为阐明神经内分泌因子胰岛素、胰高血糖素在奶牛脂肪代谢过程中的调控作用,用荧光定量PCR方法检测胰岛素、胰高血糖素对肝细胞二酰基甘油酰基转移酶（DGAT2）mRNA丰度的影响。结果表明低浓度的胰岛素能促进脂肝细胞内DGAT2mRNA的表达;胰高血糖素抑制脂肝细胞内DGAT2mRNA表达。由此证明：胰岛素和胰高血糖素能直接调控肝细胞中的DGAT2基因mRNA的表达。     

‘短柄樱桃’花芽休眠解除过程中差异表达基因的研究

 以中国樱桃的优良品种‘短柄樱桃’（Prunus pseudocerasus Lindl.‘Duanbing’）的花芽为材料,采用mRNA 差异显示技术,分析休眠解除的过程中相关差异表达基因。共克隆获得79 个差异cDNA片段;通过半定量RT-PCR 验证,确定18 个阳性差异cDNA 片段为休眠解除相关候选基因;休眠解除过程中上调的基因片段11 个,下调的7 个。测序及同源性比对结果显示：差异表达基因主要参与糖代谢、信号转导、跨膜转运及氧化还原等反应过程。这些基因在‘短柄樱桃’休眠解除阶段可能起到直接或间接的作用。     

抗菌肽对蛋用仔公鸡生长性能、免疫指标及空肠组织相关细胞因子基因mRNA表达的影响

本试验旨在研究饲粮中添加不同水平天蚕素抗菌肽对海兰褐蛋用仔公鸡生长性能、免疫器官指数及空肠组织相关前炎性细胞因子基因mRNA相对表达水平的影响.选用336只1日龄健康海兰褐蛋用仔公鸡,随机分为7组,每组4个重复,每个重复12只鸡.7组试鸡分别饲喂基础饲粮(对照组),基础饲粮+150mg/kg金霉素(抗生素组),基础饲粮+150、200、250、300、350mg/kg抗菌肽(抗菌肽Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、V组),试验期为42d.结果表明:1)抗菌肽Ⅲ、Ⅳ、V组平均日采食量显著低于对照组(P＜0.05),平均日增重各组之间差异不显著(P＞0.05),抗菌肽Ⅳ、V组料重比较对照组显著降低(P＜0.05).2)抗菌肽V组胸腺指数显著高于其他各组(P＜0.05),法氏囊指数较对照组、抗菌肽Ⅰ组显著提高(P＜0.05),抗菌肽Ⅳ、V组之间脾脏指数差异不显著(P＞0.05),与其他各试验组相比,抗菌肽V组脾脏指数显著升高(P＜0.05).3)抗菌肽V组白细胞介素-6基因mRNA相对表达水平较其他各组显著降低(P＜0.05),抗菌肽Ⅲ、Ⅳ、V组干扰素-Υ基因mRNA相对表达水平较对照组显著降低(P＜0.05),抗菌肽Ⅳ、V组肿瘤坏死因子-α基因mRNA相对表达水平较对照组显著降低(P＜0.05).综上所述,饲粮抗菌肽可不同程度提高蛋用仔公鸡生长性能、免疫器官指数,并能有效降低前炎性细胞因子基因的mRNA相对表达水平,以添加350mg/kg抗菌肽效果为最好.     

丁酸梭菌对蛋用仔公鸡生长性能、免疫指标及空肠组织相关细胞因子基因mRNA表达的影响

本试验旨在探讨饲粮中添加丁酸梭菌对蛋用仔公鸡生长性能、免疫指标及空肠组织相关细胞因子基因mRNA表达的影响.选择240只1日龄健康海兰褐蛋用仔公鸡,随机分为6组,每组4个重复,每个重复10只鸡,各组分别在基础饲粮中添加0(对照组)、150mg/kg金霉素(抗生素组)和250、500、750、1000mg/kg丁酸梭菌,试验期为42d,分别在14、28、42日龄测定各组的生长性能,42日龄测定免疫器官指数、血清免疫指标及空肠组织相关细胞因子基因mRNA相对表达水平.结果表明:1)与对照组相比,1000mg/kg添加组在试验期内显著提高了蛋用仔公鸡平均体重和平均日增重(P＜0.05),添加各水平丁酸梭菌对全期平均日采食量和料重比的影响均不显著(P＞0.05).2)1000mg/kg添加组的脾脏指数显著高于对照组(P＜0.05),各组之间胸腺指数和法氏囊指数均差异不显著(P＞0.05).3)各丁酸梭菌添加组血清免疫球蛋白G(IgG)的含量与对照组相比均显著提高(P＜0.05),其中750mg/kg添加组、1000mg/kg添加组血清IgG的含量与抗生素组相比也显著提高(P＜0.05);1000mg/kg添加组血清免疫球蛋白A的含量最高,显著高于对照组和抗生素组(P＜0.05);各丁酸梭菌添加组血清补体3的含量与对照组相比均显著提高(P＜0.05).4)750mg/kg添加组、1000mg/kg添加组的空肠组织白细胞介素-6基因mRNA相对表达水平与对照组相比显著降低(P＜0.05),1000mg/kg添加组肿瘤坏死因子-α基因mRNA相对表达水平最低,与对照组相比差异显著(P＜0.05).结果提示,饲粮中添加适量的丁酸梭菌可在一定程度上提高蛋用仔公鸡的生长性能,促进免疫器官发育并提高免疫力,抑制炎症的发生.本试验条件下,1000mg/kg的添加量效果最好.     

加减三黄汤对耐药大肠杆菌acrA mRNA表达水平的影响

为了解加减三黄汤对大肠杆菌耐药性的影响,采用实时荧光定量方法检测了外输泵acrA mRNA表达水平的变化。将100只昆明系小鼠分为阳性组(感染耐药性大肠杆菌2 751株和2 952株),阴性组,攻毒治疗组(2 751株+加减三黄汤,2 952株+加减三黄汤),8d后将鼠随机剖杀,取肝组织抹片培养大肠杆菌,做药敏试验,同时提取质粒,检测大肠杆菌外输泵基因acrA的mRNA表达量。结果显示,经加减三黄汤在体治疗后的大肠杆菌耐药性下降了,每μL中mRNA拷贝数为2 751株最高达1016,2 952株1015;用药后各菌株均有下降;相差极显著(P≤0.01),耐药性越大的拷贝数越多。表明加减三黄汤对耐药大肠杆菌外输泵基因acrA的mRNA表达水平影响与耐药性有一定的相关性。