鸭IFIT5基因(544G>A)多态性与部分免疫指标的关联分析

探索IFIT5基因作为抗性性状的候选标记的可能性,为家禽抗病育种提供一些参考依据。以樱桃谷北京鸭、苏牧麻鸭(樱桃谷鸭×金定鸭)、金定鸭、白羽番鸭为试验材料,利用DNA直接测序技术扫描IFIT5基因单核苷酸多态性(SNP),并分析其与部分免疫指标的关联性。结果表明:仅在IFIT5基因外显子2上检测到一个错义突变(G544A),产生2种等位基因,2种基因型(GG、GA),未发现有AA基因型。经χ2检验,4个鸭群体只有金定鸭和苏牧麻鸭处于Hardy-Weinberg平衡状态。关联分析结果显示:樱桃谷鸭体内H5含量GG型显著高于GA型(P0.05),而Ig M含量GG型显著低于GA型(P0.05),其余免疫指标均无显著差异(P0.05);苏牧麻鸭体内H5含量GG型极显著高于GA型(P0.01),其余免疫指标均无显著差异(P0.05);金定鸭不同基因型各免疫指标均无显著差异(P0.05)。白羽番鸭在+544位点均为GG纯合基因型。由此可以看出,IFIT5(544GA)可作为樱桃谷鸭体内H5含量的候选分子标记。     

闽西地区猪伪狂犬病病毒变异株gC基因克隆与序列分析

为了解闽西地区2013年以来猪伪狂犬病病毒(PRV)流行株的现状、分子生物学特征和遗传演化规律,收集了闽西不同地区的14株PRV分离株,并对其gC基因进行遗传变异分析。结果表明,14株PRV分离株与2012年以来国内不同省份分离的PRV变异株的核苷酸序列同源性为98.8%~99.7%,而与Bartha疫苗株核苷酸序列同源性为93.6%~93.8%。氨基酸多序列比对发现,14株PRV分离株和近年来国内分离的PRV毒株gC基因氨基酸序列同源性较高,有很多相同的特征性氨基酸替换,其中最有特征性的是aa52~aa61,aa63~aa69位和aa186~aa194位氨基酸的替换和插入。遗传进化树分析表明,14株PRV分离株与2012年以来国内不同省份分离的PRV株位于一个相对独立的大分支中,且形成了一个独立的亚分支,而与Bartha疫苗株存在很大差异,亲缘关系较远。抗原表位预测分析表明,PRV闽西分离株与Bartha疫苗株相比发生了抗原漂移,该差异是否预示闽西地区流行株正在向远离疫苗株的方向变异尚有待进一步研究。     

LTβR基因在大肠杆菌F18抗性型和敏感型苏太仔猪间的差异表达分析

旨在探讨LTβR基因在苏太断奶仔猪各组织间的mRNA表达谱,并比较分析该基因在大肠杆菌F18抗性/敏感型群体间的表达差异,为进一步探讨该基因的功能及筛选断奶仔猪大肠杆菌F18抗性遗传标记提供一定的指导和依据。试验分别挑选35日龄大肠杆菌F18抗性/敏感型苏太断奶仔猪各4头,利用实时荧光定量PCR方法比较分析LTβR基因在11个组织(心、肝、脾、肺、肾、胃、肌肉、胸腺、淋巴结、十二指肠、空肠)间的表达差异。结果:LTβR基因在检测的11个组织中均有表达,其中在肝、肺、肾、胃、十二指肠和空肠呈现高水平表达,在脾和淋巴结中呈现中等水平表达,在心脏、肌肉和胸腺组织中呈现低水平表达。除肝脏外,LTβR基因在抗性型个体中表达量普遍高于敏感型个体,而且在肠系膜淋巴结中的表达量极显著高于敏感型个体(P0.01)。由此推测,LTβR基因的表达上调有利于断奶仔猪抵御大肠杆菌F18的感染,且可能是通过在淋巴结组织中的高表达维持和提高了肠道的免疫水平,从而提高了断奶仔猪抵御大肠杆菌F18感染的能力。     

猪skMLCK基因RNAi慢病毒载体的构建及干扰效率测定

为了构建猪骨骼肌肌球蛋白轻链激酶(sk MLCK)基因有效短发夹RNA(shRNA)的慢病毒载体,筛选出最佳干扰效率的序列,采用RNAi技术,设计并合成3条siRNA干扰序列,插入到慢病毒穿梭质粒(h U6-CMV-puror-Ploy A)上,与慢病毒包装系统共转染293T细胞,收集病毒上清并进行病毒滴度的测定,将其转染小鼠C2C12细胞,分别用实时定量PCR和Western blot方法检测细胞中sk MLCK基因mRNA和蛋白的表达。结果显示:PCR扩增和测序分析结果显示靶向sk MLCK RNAi慢病毒载体构建成功;转染小鼠C2C12细胞后,sk MLCK基因mRNA和蛋白均受到不同程度抑制,实时定量PCR显示,抑制率分别为(29.2±4.43)%、(76.4±7.33)%、(20.0±1.8)%;Western blot显示,抑制率分别为(29.6±5)%、(42.4±1.6)%、(34.3±1.2)%。结论:成功构建猪sk MLCK基因有效shRNA的慢病毒载体,确定干扰载体-2(sk MLCKRNAi-2)具有最佳干扰效果,证实sk MLCK基因RNAi慢病毒载体能有效抑制目的基因mRNA和蛋白的表达,为进一步研究该基因与肌肉肉质性状的关系奠定了基础。     

胸膜肺炎放线杆菌2,3,6血清型三重PCR检测方法的建立与应用

根据Gen Bank中胸膜肺炎放线杆菌(APP)荚膜多糖基因序列,设计3对引物,成功建立了检测APP 2型、3型和6型的三重PCR检测方法。该三重PCR的最低核酸检测量分别为0.25、0.5和0.25 ng/μL,对猪肺炎支原体、猪传染性萎缩性鼻炎病毒、副猪嗜血杆菌的扩增结果均为阴性。对112份自然感染病猪样品的检测结果与单一PCR检测结果完全符合。结果表明,该多重PCR方法具有很好的特异性和敏感性,可用于临床APP 2型、3型和6型的检测。     

副猪嗜血杆菌同一质粒携带bla_(ROB-1)和aacA-aphD耐药基因

探讨1株副猪嗜血杆菌携带介导β-内酰胺类药物耐药基因bla_(ROB-1)耐药质粒的基因环境。抽提阳性菌的耐药质粒,采用电转法将耐药质粒转入DH5α,运用Southern blot确定耐药基因bla_(ROB-1)的位置,通过测序获得耐药质粒的基因组成结构。结果表明,该菌携带有2个质粒,其中1个质粒(p QY431-1)携带有耐药基因bla_(ROB-1),该质粒成功转入受体菌DH5α,转化子较受体菌对阿莫西林、头孢克洛、庆大霉素、卡那霉素以及阿米卡星的MIC分别提高了64倍、16倍、32倍、64倍和2倍。该质粒全长为7 777 bp,其基因环境由潜在的移动和复制区、一个截断的ISApl1插入序列、耐药基因aac A-aph D和bla_(ROB-1)组成。     

灯盏花素对肝纤维化大鼠肝组织中TGF-β1,Smad3表达的影响

为了观察灯盏花素对肝纤维化大鼠肝组织中TGF-β1和Smad3表达的影响,探讨灯盏花素抗大鼠肝纤维化的作用机制,方法:将大鼠32只随机分为对照组、模型组、水飞蓟宾组和灯盏花素组,采用皮下注射四氯化碳(CCl_4)造成大鼠肝纤维化模型,每周两次,连续8周。留取肝左叶行H.E.Masson染色,免疫组化方法检测各组TGF-β1和Smad3的表达,然后光镜下观察肝组织学变化和TGF-β1和Smad3表达量。结果与对照组比较,模型组TGF-β1和Smad3的表达明显增强(P0.05),和模型组比较,灯盏花素可显著减少TGF-β1和Smad3的表达(P0.05),而且肝纤维化减轻。表明灯盏花素可抑制大鼠肝纤维化模型中TGF-β1和Smad3的表达,从而发挥抗肝纤维化作用。     

PRRSV变异株ORF5全基因的可溶性表达与重组蛋白的纯化

为了获得猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)变异株可溶性糖基化囊膜蛋白(GP5),从p MD18-T-ORF5(V)重组质粒中PCR扩增得到PRRSV变异株LX13(1)结构蛋白ORF5全基因编码区,并克隆至原核表达载体p Cold TF DNA上,得到重组表达质粒p Cold-TF-GP5(V),转化大肠埃希菌BL21中诱导表达,并通过SDS-PAGE和Western Blot鉴定分析。结果表明,目的基因插入位置和阅读框正确,成功表达的融合蛋白分子量约为75.2 ku,并以可溶性蛋白的形式存在,表达量约占菌体总蛋白含量的22.26%。该融合蛋白能与鼠抗His标签单克隆抗体发生特异性反应,说明重组蛋白具有反应原性。该可溶性重组蛋白的获得为研究PRRSV变异株GP5蛋白的抗原性奠定了基础。     

基于叶绿体ndhA基因内含子序列的DNA条形码在秋海棠属物种鉴定中的应用

以18种秋海棠属植物为试材,基于叶绿体ndhA基因内含子片段,利用Codon Code Aligner软件拼接序列后,通过MEGA软件进行比对并计算19个秋海棠属植物种间及种内遗传距离,最后利用邻接法构建分子系统树,研究了该片段作为DNA条形码对秋海棠属植物进行物种鉴定的可行性。结果表明:秋海棠属19个种类共59个个体的ndhA基因内含子序列长度为1 182bp,在所考察的候选秋海棠属植物中具有最大的种间变异和较小的种内变异,且二者存在极显著差异。在系统树中,秋海棠属植物每一物种能够分别形成各自独立的分支,表现出良好单系性。基于ndhA基因内含子的DNA条形码在识别秋海棠属植物物种方面和传统形态学基本一致。该研究表明,以ndhA基因内含子作为秋海棠属植物DNA条形码进行物种鉴定具有一定的可行性。     

早熟杏新品系鲁杏3号的选育

鲁杏3号是以金太阳杏和巴旦杏为亲本杂交选育的杏新品种,2016年6月通过专家验收。该品系果实椭圆形,平均单果重80.1g,果面黄色,阳面着红晕。果肉黄色,肉厚核小,可食率96.35%。汁液较多,甜酸适度,味浓芳香,风味极佳,可溶性固形物含量12.90%,品质上。离核,甜仁。泰安地区6月初成熟。早实、丰产、稳产、适应性强。