巴彦淖尔市肉羊成本效益分析及发展对策

巴彦淖尔市内羊产业是畜牧业主导产业．同时也是农牧民来自畜牧业收入的优势产业。为了探索提高肉羊养殖效益的途径,文章依据成本效益理论、生产理论,从不同品种、不同饲养模式、不同饲养周期、各项费用构成等角度,对巴彦淖尔市肉羊的成本效益进行了对比分析。提出降低肉羊饲养成本和提高肉羊经济效益的有效途径及相应对策。     

中国美利奴成母羊促甲状腺激素受体基因的克隆与组织表达

[目的]探讨绵羊TSHR基因序列及组织表达特征,为进一步研究TSHR在绵羊季节性繁殖中作用的分子机理奠定基础.[方法]利用RT-PCR技术克隆绵羊TSHR基因,并对序列进行生物信息学分析;采用半定量RT-PCR技术检测TSHR在绵羊不同组织的表达情况.[结果]以中国美利奴羊卵巢组织cDNA为模板,获得了3 276 bp的TSHR cDNA序列,包括全部编码区序列(Coding Sequence,CDS)长2 295 bp,编码764个氨基酸.TSHR蛋白结构经预测发现存在多个磷酸化位点和蛋白激酶C磷酸化位点.半定量RT-PCR结果显示,绵羊TSHR基因在所检测组织中均有表达,其中在下丘脑、松果体和垂体中呈高丰度表达,在甲状腺、子宫等组织呈中等丰度表达.[结论]从绵羊卵巢组织中克隆到TSHR基因并进行了序列分析;TSHR基因在绵羊各组织中广谱表达,但在下丘脑、松果体、垂体、甲状腺中表达水平较高,提示TSHR在绵羊季节性繁殖等重要生理活动的神经内分泌调节过程中发挥重要作用.     

添喂不同剂量气溶胶OT对绵羊采食、瘤胃原虫和细菌数量的影响

选取4只2岁龄、体重约50kg、装置了永久性瘤胃瘘管的小尾寒羊公羊,采取4×4拉丁方设计,在粗料型和精料型日粮条件下给绵羊添喂气溶胶OT(0,0.4,0.8,4.0g/kg日粮),以研究不同剂量气溶胶OT对绵羊采食、瘤胃原虫和细菌数量的影响。结果表明,添喂气溶胶OT 0.4,0.8,4.0g/kg日粮,在粗料型日粮条件下绵羊的自由采食量分别提高13.2%(P0.01),30.7%(P0.01)和-5.3%(P0.01),瘤胃原虫数量分别减少33.9%(P0.01),54.2%(P0.01)和86.3%(P0.01),细菌总数分别增加33.6%(P0.01),46.9%(P0.01)和-23.5%(P0.01);在精料型日粮条件下绵羊的自由采食量分别提高7.1%(P0.01),16.3%(P0.01)和-5.6%(P0.01),瘤胃原虫数量分别减少30.1%(P0.01),56.2%(P0.01)和89.0%(P0.01),细菌总数分别增加44.7%(P0.01),59.4%(P0.01)和-19.8%(P0.01)。本研究表明,添喂适量的气溶胶OT可以同时减少绵羊瘤胃原虫数量和增加细菌总数,提高绵羊采食量。     

我国肉羊散养的成本效率及其影响因素

为促进我国肉羊产业发展提供参考,基于2006—2012年肉羊生产相关数据,运用随机前沿分析法对河北、黑龙江、山东、河南、陕西和新疆的肉羊散养成本效率进行测算,分析其变化趋势,探讨其影响因素。结果表明：河北、黑龙江、山东、河南、陕西和新疆的肉羊散养成本效率总体呈波动上升趋势,存在不同程度的成本非效率情况,距离最优效率水平仍有一定差距,尚有较大的提升空间。料肉比与成本效率呈负相关,降低料肉比能够提高成本效率;疫病是导致成本效率低下的主要因素。     

草地藏系绵羊生长激素释放激素基因部分cDNA的克隆及生物信息学分析

为了克隆草地藏系绵羊生长激素释放激素基因,采用Trizol法从草地藏系绵羊下丘脑组织中提取总RNA,用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)进行cDNA扩增并克隆测序,获得长度为207 bp的促生长激素释放激素基因(GHRH)的部分cDNA序列。结果表明获得的草地藏系绵羊GHRH部分cDNA序列与Gen Bank中注册的绵羊GHRH基因编码起始位置(86位)到292位区域高度同源,仅有1个碱基的差异,该cDNA序列编码69个氨基酸残基,其内含有信号肽序列,该氨基酸序列的31~57位具有典型胰高血糖素类似激素特征的GLUCA结构域。     

发酵全混合日粮对肉羊消化吸收功能和生长性能的影响研究

旨在探讨添加混合微生物菌剂的发酵全混合日粮(Fermented total mixed ration,FTMR)对肉羊营养物质消化吸收功能和生长性能的影响。通过发酵和肉羊饲喂试验,测定了FTMR的品质变化、营养物质表观消化率、肉羊瘤胃发酵情况及日增重。结果表明:1)全混合日粮发酵后pH和中性洗涤纤维含量显著降低,乳酸和乙酸含量显著增加(P<0.05);2)试验组肉羊瘤胃液pH显著降低,氨态氮含量降低50%以上(P<0.05);粗蛋白质、粗脂肪、中性洗涤纤维、酸性洗涤纤维和酸性洗涤木质素(ADL)的利用率均显著高于对照组(P<0.05),尤其是ADL利用率提高了29.92%(P<0.05)。3)试验组平均日增重较对照组提高50%。综上,混合微生物菌剂加入全混合日粮发酵后,适口性增强,可改善肉羊瘤胃液环境,提高肉羊的消化吸收功能和生长性能,有利于提高秸秆饲料化利用效率。     

CRISPR/Cas9介导的绵羊示踪脐带间充质干细胞系的建立

【目的】利用CRISPR/Cas9技术建立绵羊示踪脐带间充质干细胞系,为间充质干细胞的临床治疗与分化机制研究奠定基础。【方法】根据绵羊ROSA26的基因组序列,利用在线工具ZiFiT Targeter Version 4.2设计合成3对引物,利用点突变法,以px330质粒为模板分别进行PCR,DpnⅠ去除质粒DNA后,PCR产物自身环化,酶切测序鉴定,构建以绵羊Rosa26为靶标基因的sgRNA/Cas9载体,构建的质粒含Cas9和向导RNA(single-guide RNA,sgRNA) 表达盒,由U6启动子驱动表达。将上述载体分别利用脂质体转染绵羊脐带间充质干细胞(sUMSCs),提取其基因组PCR后进行T7E1酶切,琼脂糖电泳分析条带灰度以检测载体编辑活性。根据sgRNA序列在绵羊ROSA26靶位点的上下游设计并合成左、右同源臂扩增引物,提取绵羊全基因组为模板分别进行PCR扩增得到左右同源臂,回收纯化后分别与pMD19-Simple连接,酶切测序鉴定获得左、右同源臂重组质粒。根据PCR引入的酶切位点,将左同源臂质粒和Donor表达载体DC-DON-SH02 ROSA26进行酶切连接,鉴定获得左臂重组打靶载体,使用相同方法将右同源臂质粒连接到左臂打靶载体上,鉴定获得Donor打靶载体,载体携带嘌呤霉素抗性基因和绿色荧光蛋白（GFP）报告基因。在生长良好的sUMSCs中加入不同浓度的嘌呤霉素,观察细胞存活时间,确定最佳抗性筛选浓度和时间。利用脂质体共转sgRNA/Cas9载体和Donor载体到绵羊间充质干细胞,在其ROSA26位点切割DNA双链,在DNA断裂处通过同源重组方式引入报告基因,转染48 h后进行嘌呤霉素抗性筛选,筛选结束后更换正常培养基继续培养,观察绿色荧光的表达并提取阳性细胞基因组,针对ROSA26位点设计上下游两对引物对其进行PCR检测其整合情况。【结果】（1）针对绵羊Rosa26位点设计3对PCR引物,利用点突变法将sgRNA 克隆至px330的BbsⅠ酶切位点上,成功构建sgRNA/Cas9载体px330-sgRNA1/2/3,将其分别转染sUMSCs,T7E1酶切结果表明px330-sgRNA2/3出现脱靶现象,未在靶位点发生编辑,px330-sgRNA1的编辑效率最高,约为20%;（2）基于sgRNA1,PCR法获得打靶载体的左、右同源臂,经一系列分子生物学方法先后连接到载体DC-DON-SH02 ROSA26上,经酶切和PCR鉴定,成功获得绵羊ROSA26位点的重组载体sROSA26-HA;（3）筛选得到sUMSCs最佳抗性浓度时间,利用Lipofectamine2000共转染sgRNA/Cas9载体和Donor重组载体到sUMSCs,1.5 μg·mL^-1嘌呤霉素筛选15d至对照组细胞全部死亡,获得的阳性克隆并扩大培养。显微镜下可观察到明显的绿色荧光,且与对照组相比,阳性细胞克隆的基因组PCR均检测到特异条带,表明sUMSCs的ROSA26位点发生同源重组,GFP基因被成功敲入到基因组中并能正常表达,该细胞可以用于动物疾病模型中追踪sUMSCs的去向和分化方向的研究。【结论】成功利用CRISPR/Cas9系统在sUMSCs内实现外源GFP基因的定点敲入,获得绵羊示踪脐带间充质干细胞系,为间充质干细胞进一步的临床转化奠定了基础。     

饲喂不同方法处理的高粱对绵羊瘤胃微生物蛋白生产的影响

25只绵羊分成5组，每组5只，每只羊每天喂给苜蓿二草420g，另加用下列方法处理的高粱子实280g：a.未处理的高粱；b.微波处理（1．5g高梁微波处理15min）；c。120℃蒸汽处理10min；d。0．5％洗涤剂浸泡30min；e．水浸泡30min。用嘌呤衍生物在尿中的排泄量估测瘤胃微生物蛋白的产量。瘤胃微生物蛋白产量及其生产效率均未受高粱处理方法的影响。     

小尾寒羊冷冻精液制作保存技术

在制作小尾寒羊冻精颗粒时，对其冷冻稀释液和甘油浓度进行了研究。结果表明，2＃稀释液效果最好（P＜0．05），甘油浓度为6％时的冷冻效果最佳（P＜0．01）；在40－50℃解冻后，其活力可达0．5以上。     

宁夏农垦万只商品肉羊生产场羊群结构的优化与设计

为了稳步推进宁夏农垦企业集团百万肉羊产业化生产,笔者结合宁夏农垦生产实际,在既充分考虑宁夏农垦百万肉羊良种繁育和杂交利用体系的总体建设方案和现有建设实际,又紧密结合商品肉羊生产场目前技术力量和实际生产水平的前提下,提出了宁夏农垦万只商品肉羊生产场羊群结构优化与设计的具体方案:优秀种公羊50只,占羊只总数的0.5%,其中6月龄、1岁、2岁、3岁、4岁、5岁公羊分别占公羊总数的24%、18%、16%、16%、14%、12%;二元杂交母羊9950只,占羊只总数的99.5%,其中6月龄、1岁、2岁、3岁、4岁、5岁、6岁母羊分别占母羊总数的18.3%、16.4%、15.6%、14.5%、13.2%、11.8%、10.2%。