大豆种子DNA快速提取方法的改良及应用

高质量的DNA是进行基因克隆等分子生物学试验的前提条件。因大豆种子中蛋白质和油脂含量丰富,利用传统方法提取DNA质量很难达到试验要求。研究在SDS提取液的基础上,通过添加表面活性剂NP-40和Tween-20,优化出一种适合于大豆种子DNA快速提取的方法。优化后的SDS方法提取的DNA质量较高,OD260/OD280在1.809～1.916之间,无蛋白质和RNA污染。对该方法提取的DNA进行了基因克隆和分子标记的试验验证,结果表明,它们能够用于大豆基因克隆、分子标记。     

一种简捷高效提取胚乳细胞RNA的方法

在用Trizol一步法提取RNA基础上,通过SDS碱裂解法同Trizol法相结合,得到一种简单、快速从富含多糖及多种次生代谢物的胚乳细胞中提取总RNA的方法.所得RNA样品经紫外分光光度计和琼脂糖凝胶电泳分析证明具有较高的纯度、产率和良好的完整性,并可进一步满足RT-PCR和Northern杂交的试验需要.     

刺山柑(Capparis spinosa)总RNA不同提取方法的比较

以野生刺山柑叶片为材料,采用70%丙酮抽提研磨材料,结合TRIZOL,CTAB,SDS 3种常见的RNA提取方法提取总RNA,通过RNA获得率、纯度、电泳图谱以及RT-PCR反应等分析,初步确立了一种有效的提取刺山柑叶片总RNA的改良SDS法.该方法提取的RNA A<,260>/A<,280>值在1.88～1.94之间,电泳图谱完整,具有产量高、时间短、成本低等特点,所得的RNA可以用于RT-PCR和cDNA文库构建以及Northern杂交等后续实验.     

Partial characterization of digestive proteases of the three‐spot cichlid Cichlasoma trimaculatum (Günter 1867)

Partial characterization of digestive proteases in the three‐spot cichlid Cichlasoma trimaculatum juveniles was conducted. It was determined that there is higher alkaline proteases activity (3.95 ± 0.32 IU mg^?1 protein) compared to acidic proteases (2.01 ± 0.57 IU mg^?1 protein). Optimal temperature for alkaline proteases is 60 °C which resulted in more thermostability to temperature changes. On the other hand, optimal temperature for acidic proteases is 50 °C. Optimal pH for acidic proteases was pH 2, while for alkaline proteases, it was pH 10, which resulted in more stability in relation to pH changes than acidic protease. The use of specific inhibitors and the SDS‐PAGE electrophoresis analysis revealed seven types of bands for alkaline proteases, which make evident the main presence of serine proteases. In acidic proteases, more than 98 g kg^?1 of the activity was inhibited with pepstatin A inhibitor. Therefore, it is evident that C. trimaculatum digestion is composed by acidic and alkaline proteases; thus, it should be considered an omnivorous fish.     

小麦一些高分子量麦谷蛋白亚基对SDS沉降值的效应分析

分析了两个单交组合(烟农19×皖麦48和烟农19×安农0016)的F2单株、F3株系SDS沉降值和高分子量麦谷蛋白亚基(HMW-GS)组成.结果表明,高分子量麦谷蛋白亚基对SDS沉降值的影响显著.Glu-A1和Glu-B1位点内的差异对沉降值的作用达显著或极显著水平,但Glu-A1与Glu-B1的互作效应不显著.两个杂交组合亚基的等位变异对SDS沉降值的影响大小顺序为:Glu-A11>Null,Glu-B17 9= Glu-B117 18> Glu-B114 15,F2代单株和F3代株系分析结果相似.     

太行花DNA提取的优化和适用分子标记检测

比较了常规CTAB法、改良CTAB法和SDS法对太行花叶片总DNA的提取效果,并对改良CTAB法提取的DNA在多种分子标记中的适用性进行了测试。结果表明：常规CTAB法提取的DNA难以完全溶解,且有褐化现象;SDS法提取的DNA产率及纯度都很低;改良CTAB法提取的DNA产率高且稳定,无明显降解,杂质少,OD260/OD280比值在1.8左右。以改良CTAB法提取的DNA为模板,应用叶绿体和线粒体通用引物扩增出了特异性的高效产物,ISSR和RAPD引物对总DNA的扩增也获得理想结果。因此,改良CTAB法适用于太行花总DNA提取,其产物能满足核、叶绿体和线粒体基因组分子实验的要求。     

两种方法提取杏基因组DNA的比较

以改良CTAB法和改良SDS法提取辽杏等6个杏品种的基因组DNA。经检测,结果表明:两种方法均可提取到较高质量的杏基因组DNA,可用于SSR-PCR扩增,满足后续分子生物学研究需要。改良CTAB法提取的各品种DNA产率和纯度具有更高的稳定性,因此,更适用于杏基因组DNA的提取。     

瞬变高压对β-乳球蛋白变性的影响

[目的]探讨瞬变高压条件下β-乳球蛋白的变性规律。[方法]以鲜牛乳为原料,通过瞬变高压处理后β-乳球蛋白的SDS-PAGE和巯基含量检测,考察压力水平、进料温度、处理时间对β-乳球蛋白的影响。[结果]瞬变高压处理可导致β-乳球蛋白发生凝聚和解聚;20~60 MPa范围内随着压力的提高,β-乳球蛋白的凝聚作用增强,但过高的压力(80 MPa)会导致其产生解聚作用;25~45℃进料温度的影响结果与压力类似;而2~8 min处理时间的影响不显著。[结论]该研究为消除β-乳球蛋白的致敏原及高压技术在牛乳中的应用提供了理论依据。     

基于改良SDS法的杏基因组DNA提取

为探讨改良SDS法是否适用于杏基因组DNA提取及提取液适宜浓度,以6个品种杏叶片为试材提取DNA,提取液设0.5%、1%、2%三个浓度梯度。检测结果表明,改良SDS法完全适用于杏叶片基因组DNA的提取,3种浓度的提取液均可得到质量较高的DNA, 且0.5%为改良SDS法提取杏叶片基因组DNA的适宜提取液浓度。     

陕农138小孢子不同发育时期蛋白质差异的比较分析

为了探索小麦花药发育过程中的蛋白质代谢机理,利用SDS-PAGE电泳对陕农138花药单核早期、单核中晚期和双核期小孢子的全蛋白电泳谱带进行了分析.结果表明,双核期同时出现2条明显的条带或表达丰度大的条带,其分子量分别为50.7、48.2 kD,而这两个条带分别在单核早期和单核中晚期单独出现,认为通过电泳所获得的这些差异蛋白很可能直接或间接参与小孢子发育过程中某些关键的代谢途径;单核中晚期是小麦花药培养中出愈率最高的时期,这些差异蛋白又很可能与小麦花药培养力的表达调控和代谢机理有关.