Effects of edaravone on high glucose-induced apoptosis in SH-SY5Y cells via regulating microRNA-25

AIM: To observe the effects of edaravone on high glucose-induced apoptosis of SH-SY5Y cells and its potential mechanism. METHODS: The SH-SY5Y cells were cultured in the DMEM medium with 100 mmol/L glucose and 100 μmol/L edaravone for 24 h. The viability of the SH-SY5Y cells was detected by MTT assay. The levels of ROS in the cells were determined by DCFH-DA fluorescent probing. The apoptotic rates of the cells were analyzed by flow cytometry. The protein expression of Bax and Bcl-2 in the cells were detected by Western blot. The expression levels of micro-RNA-25 (miR-25) were determined by real-time PCR. To further clarify the target sites of edaravone on inhibiting apoptosis induced by high glucose, miR-25 inhibitor was applied to the SH-SY5Y cells and the activity of caspase-3 was measured.RESULTS: Compared with control group, the cell viability was decreased significantly in model group, and the ROS level was increased significantly. The protein expression of Bax was up-regulated significantly, while the expression levels of Bcl-2 and miR-25 were significantly down-regulated. Compared with model group, the cell viability was increased significantly in edaravone group. The ROS level was decreased significantly. Meanwhile, the expression of Bax was down-regulated, while the expression of Bcl-2 and miR-25 was up-regulated with statistical significance. The caspase-3 activity of the cells incubated with 100 mmol/L glucose and miR-25 inhibitor was increased. However, no alteration of caspase-3 activity with edaravone added simultaneously was observed. CONCLUSION: Edaravone inhibits the apoptosis of SH-SY5Y cells induced by high glucose with the potential target site of miR-25.     

甜瓜白粉病抗性AFLP连锁标记的初步研究

甜瓜白粉病是危害我国甜瓜(Cucumis melo L.)生产的主要病害之一。以抗病的7-2和感病的7-1、7-3杂交组合与分离群体进行了甜瓜抗白粉病连锁分子标记研究,建立了AFLP标记技术体系,找到了1个与甜瓜白粉病抗病基因紧密连锁的AFLP标记:M60/E25-520。     

玉米PEPC基因和抗白叶枯病基因Xa25的水稻聚合育种

利用转玉米PEPC基因水稻HPTER(高感水稻白叶枯病)和抗白叶枯病水稻HX-3(具有抗白叶枯病基因Xa25)杂交,获得F1杂种,并对F1杂种进行花药培养,获得42株二倍体植株。通过对这些植株后代进行抗白叶枯病性鉴定,PEPC酶活性和光合速率测定及PCR检测,最后获得同时具有玉米PEPC基因和抗白叶枯病基因Xa25的水稻聚合株系7个,这些株系的农艺性状较HPTER有较大改善,可作为培育高产、抗白叶枯病水稻新品种的种质资源。     

25%阿米西达悬浮剂防治丝瓜霜霉病药效试验

霜霉病是丝瓜主要真菌病害之一,在广东菜区严重危害丝瓜生长中后期的功能叶片,严重影响产量和质量,必须进行药剂防治.2003～2004年进行新型杀菌剂25%阿米西达悬浮剂防治丝瓜霜霉病大田药效试验,结果表明,25%阿米西达悬浮剂对丝瓜霜霉病具有优良的防治效果,安全性高,25%阿米西达833倍施药3次的防治效果达到89.80%～91.99%,显著优于对照药剂50%安克可湿性粉剂1667倍和58%雷多米尔-锰锌可湿性粉剂833倍的防效,能够达到快速、有效地控制丝瓜霜霉病,可在生产上推广应用.     

呼伦贝尔地区牛体表寄生蜱中羊种布鲁氏菌的分离与鉴定

【目的】阐明牛体表寄生草原革蜱与牛羊布鲁氏菌病的相关性,为内蒙古地区布鲁氏菌溯源调查及防控提供基础数据。【方法】通过传统形态学及分子生物学相结合的方法,对呼伦贝尔地区采集的191只蜱虫进行种型鉴定;以牛体表采集的寄生蜱为材料,应用布鲁氏菌选择性培养基从蜱体内分离可疑细菌;将可疑细菌进行分离培养,菌落的形态学观察,以及革兰氏染色和柯氏染色镜检初步鉴定可疑细菌的种属;经PCR方法扩增布鲁氏菌的Bcsp31和Omp22基因序列,并应用MEGA 7.0软件构建系统遗传进化树;运用AMOS-PCR、单项特异性血清凝集试验、染料抑菌和噬菌体裂解试验对分离的可疑菌进行分型鉴定。【结果】该地区优势蜱种被鉴定为草原革蜱,并成功在其体内分离到4株可疑细菌;经革兰氏染色镜检发现该菌属于革兰氏阴性短杆菌,柯氏染色后菌体呈红色短杆菌,并通过PCR方法成功克隆出布鲁氏菌的Bcsp31和Omp22基因序列,经过基因序列测序及BLAST比对分析,发现与布鲁氏菌参考序列相似度均在99.0%以上。应用MEGA 7.0软件成功构建遗传进化树,分离菌株序列与布鲁氏菌属的已知序列聚类在同一分支;运用AMOS-PCR和布鲁氏菌常规分型鉴定试验,确定4株分离菌均属于羊种布鲁氏菌。【结论】成功在呼伦贝尔地区牛体表采集的草原革蜱体内分离到4株羊种布鲁氏菌,表明草原革蜱作为吸血节肢动物,可能在不同宿主之间的布病传播过程中发挥重要作用。本论文为内蒙古地区布鲁氏菌溯源调查和防控提供基础数据。     

不同剂量25羟基维生素D3对断奶前犊牛生长性能、营养物质表观消化率、血浆代谢物及粪便菌群的影响

本试验旨在研究饲粮添加不同剂量25羟基维生素D₃[25(OH)VD₃]对断奶前犊牛生长性能、营养物质表观消化率、血浆代谢物及粪便菌群的影响。选取18头健康、体重[(40.68±1.20)kg]相近的新生荷斯坦犊牛,随机分为3个组,每组6头牛。对照组饲喂基础饲粮,不添加25(OH)VD₃;试验组每头犊牛每天分别在基础饲粮中添加6000(低剂量组)和12000 IU(高剂量组)的25(OH)VD₃。试验期56 d。结果表明:1)与对照组相比,低剂量组和高剂量组体重和平均日增重显著提高(P<0.05),高剂量组体高显著提高(P<0.05),低剂量组和高剂量组粪便评分显著降低(P<0.05)。2)与对照组相比,低剂量组和高剂量组干物质表观消化率显著提高(P<0.05),高剂量组中性洗涤纤维(P=0.05)和钙表观消化率(P<0.05)显著提高。3)与对照组相比,低剂量组和高剂量组血浆25(OH)VD₃和钙含量显著提高(P<0.05),高剂量组血浆磷含量显著提高(P<0.05)。4)与对照组相比,低剂量组和高剂量组血浆白细胞介素-2含量显著降低(P<0.05)。5)与对照组相比,低剂量组和高剂量组粪便中毛螺菌科(Lachnospiraceae)和普雷沃式菌科(Prevotellaceae)相对丰度显著提高(P<0.05),粪便中鼠杆菌科(Muribaculaceae)、克里斯滕森菌科(Christensenellaceae)、螺旋体科(Spirochaetaceae)和未培养_细菌_o_柔膜菌纲_RF39(uncultured_bacterium_o_Mollicutes_RF39)相对丰度显著降低(P<0.05)。由此可见,饲粮添加25(OH)VD₃可以提高断奶前犊牛生长性能,促进营养物质消化吸收,降低炎症反应,改善粪便菌群,降低腹泻发生。     

胚蛋注射25-羟基胆钙化醇对樱桃谷雏鸭孵化性能、早期发育与血清生化指标的影响

为研究胚蛋注射25-OH-D₃对雏鸭孵化性能、1~7 d生长发育和血清生化指标的影响，本研究选取60周龄樱桃谷种鸭蛋200枚，随机分为5组，每组8个重复，每个重复5枚种蛋。在孵化第13.5天时，A组不做处理，B组注射0.2 mL 0.85%的生理盐水，C、D、E组分别注射相同体积不同浓度的25-OH-D₃溶液。出壳后，饲喂基础饲粮，试验期7 d，计算每组的出壳率，测定体重和血清生化指标。结果表明:1)与A组相比，试验C、D、E组雏鸭的孵化率分别显著提高了4.79%、5.54%和3.37%(P<0.05)。试验C、D、E组对7 d雏鸭的体重无显著影响(P>0.05)，试验D组3 d雏鸭的体重显著增加了13.19%，1 d雏鸭的体重显著提高了1.65%(P<0.05)。2)与A组相比，C、D、E组对雏鸭的胫骨发育无显著影响(P>0.05)。3)与A组相比，试验C、D、E组显著提高了雏鸭血清中生长激素和胰岛素样生长因子I的水平(P<0.05)。试验D、E组雏鸭血清中25-羟基胆钙化醇的水平分别显著提高了56.16%和40.16%(P<0.05)。试验C组雏鸭血清中磷的水平提高了22.20%(P<0.05)。4)与A组比，C、D、E组显著降低了雏鸭血清中的LDL水平(P<0.05)。C组显著提高了雏鸭血清中ALB的含量(P<0.05)。D组显著提高了雏鸭血清中ALP的活性和GLU的水平(P<0.05)，E组显著降低了雏鸭血清中ALP和AST的活性(P<0.05)。C、D组显著提高了雏鸭血清中AST的活性(P<0.05)。综上，胚蛋注射25-OH-D₃可提高雏鸭的孵化率和免疫力，其最佳添加剂量为0.8 μg/枚，并促进早期发育，为后期发育提供更好的基础。这提示胚蛋注射25-OH-D₃有利于促进雏鸭胚胎发育，并对雏鸭机体健康发挥潜在的积极作用。     

重组布鲁菌外膜蛋白Omp19的制备方法及免疫原性研究

[目的]探索重组布鲁菌Omp19蛋白的制备方法,评价其在实验动物中的免疫原性,为中试工艺放大奠定基础。[方法]利用摇瓶培养对重组Omp19蛋白进行原核诱导表达,对培养基类型、诱导剂浓度、诱导温度、诱导时间、诱导时的菌体密度等条件进行筛选;利用阳离子交换层析、疏水层析和阴离子交换层析对重组Omp19蛋白进行纯化制备;利用SDS-PAGE和分子排阻高效液相色谱法（SEC-HPLC）对重组Omp19蛋白的纯度进行鉴定;利用动物实验评价制备的重组Omp19蛋白的免疫原性。[结果]摇瓶培养试验表明,重组布鲁菌Omp19蛋白较优的表达条件为：使用LB培养基,在菌密度OD_{600 nm}值为0.6~1.0时加入0.5 mmol/L的IPTG,于28 ℃诱导5 h;经3步纯化后,获得了高纯度的重组Omp19蛋白;免疫原性研究表明,经方法优化后制备的重组Omp19蛋白联合佐剂可以较好地刺激BALB/c小鼠产生特异性抗体。[结论]优化了重组布鲁菌外膜蛋白Omp19的制备方法,评价了其在小鼠中的免疫原性,为重组布鲁菌疫苗的研发提供了实验基础。