猪链球菌2型四川分离株毒力基因的检测及其序列分析

根据猪链球菌2型的MRP、EPF和SLY基因设计合成了四对引物,对我们分离鉴定的2005四川分离株进行毒力因子检测,并对阳性产物测序比较。结果以分离株为模板,获得了与预期结果一致的867bp(MRP)、572bp(EF)的2个片段,以及SLY的长度为1502bp目的片段(外引物)和1443bp的目的片段(内引物)。说明分离株SSsc0501为MRP+EF+SLY+,属于具有3种主要毒力因子的强毒株。经对PCR阳性产物测序及序列分析,结果其与P1/7株的核苷酸序列完全一致,与1933株的同源性达99.7%,仅在128位、217位、744位、1380位、1386位的5个核苷酸发生突变。在氨基酸水平上SSsc0501株与1933株的同源性达99.6%,有2个氨基酸发生替代。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒双基因多组合DNA疫苗的构建

本实验根据PRRSV结构蛋白的特性和IFNγ及IL-2这两种细胞因子的特性,构建表达PRRSVGP4-GP5、GP5-M、GP5-N、GP5-IFNγ、GP5-IL-2、N-IFNγ、N-IL-2的重组质粒。这些重组质粒在真核细胞中得到了表达。用这些真核表达质粒可以免疫小猪,通过检测其对猪体免疫应答的诱导能力和接种后动物对PRRSV的抵抗力来对基因疫苗的效能进行研究,以期筛选到有效的基因疫苗并为今后进一步的研究提供思路和理论基础。     

小反刍兽疫病毒F蛋白抗原位点的克隆与表达

目的表达小反刍兽疫F蛋白的抗原位点用于检测与预防。方法用DNAStar分析小反刍兽疫的抗原位点,采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,从病羊组织中PPRV的F基因的抗原位点并克隆到原核表达载体PET-28b中,最后用PCR、酶切和测序分析对重组质粒进行鉴定;将重组质粒转化到大肠杆菌Rosetta中,经ITPG诱导表达PPRVF基因的抗原位点;用SDS-PAGE和Western-Blotting分析抗原位点蛋白的表达。结果将RT-PCR产物电泳,得到与预期大小相符的特异性片段;对重组质粒PET-28b-F35-111(pZLW013)、PET-28b-F143-485(pZLW014)和PET-28b-F323-485(pZLW015)酶切后,均出现与预期相符的片段;DNA测序表明插入的片段的序列与小反刍兽疫F基因的抗原位点序列分别完全一致,其大小分别为251bp、1053bp和514bp;将重组表达的蛋白经SDS-PAGE和West-ern-Blotting分析,证明小反刍兽疫抗原位点F35-111没有表达、抗原位点F143-485和F323-485得到表达。结论成功表达了PPRVF基因的两段抗原位点蛋白,为日后检测与预防工作奠定了基础。     

猪圆环病毒2型感染对小鼠脾脏中IFN-γ基因表达的影响

本研究对PCV-2感染对小鼠组织中IFN-γ基因表达的影响进行了分析。分别取各基因RT PCR扩增的回收产物进行序列稀释（10^-1~10^-6）,再进行实时荧光定量PCR扩增,扩增完毕后,进行熔解曲线分析,相对定量检测了PCV 2感染小鼠脾脏不同时段IFN γ基因的表达水平。试验结果表明,得到定量标准曲线,起始模板浓度与Ct值之间呈良好的线性关系,β-actin基因标准曲线为y=-3.32x+31.57,IFN-γ基因标准曲线为y=3.43x+45.83,PCV-2感染小鼠后脾脏IFN γ基因表达水平升高,但第14~28天 IFN-γ基因表达水平呈下降趋势。     

基于畜禽粪便养分含量的畜禽承载力研究

为了减少畜禽养殖带来的环境污染,许多发达国家规定畜牧场周围必须配备农田来消纳畜禽粪便,同时也有成熟的畜禽承载力的研究方法。根据我国区域养殖畜种较多、农田分散、农牧脱节等情况,本研究确定了适合我国国情的用特定地理区域范围消纳畜禽粪便氮(N)、磷(P2O5)能力的方法来确定畜禽承载力。本研究根据不同畜种平均每头(只)存栏动物每年的粪便养分产生量、每公顷作物每年的养分移走量,计算出每公顷大田作物地、蔬菜地和园地每季所能承载的各种畜禽数量,然后根据各地区的复种指数估算出作物地每年承载的畜禽数量。结果表明:牛、羊的年产粪便N/P2O5较大,禽类比值较小,其他畜种比值居中;蔬菜地可以承载的畜禽数量最多,大田作物地次之,园地承载的最少;以N作为承载标准时,农用地所承载的畜禽数量比以P2O5作为标准时多(最高为6.6倍)或者两者持平。可以根据区域需要,通过提高作物对肥料的利用率、调整化肥与粪肥用量、调整种植结构等方式改变畜禽承载力的大小。     

金荞麦查尔酮合成酶基因CHS的克隆及序列分析

采用同源克隆的方法获得金荞麦查尔酮合成酶基因(CHS)的保守片段554bp,进一步采用染色体步移法(genome-walking)和RT-PCR技术克隆到CHS基因的全长DNA序列和cDNA开放阅读框(ORF)序列。序列分析结果表明,金荞麦CHS基因DNA全长1650bp,含一个462bp的内含子;其cDNA编码区全长1188bp,编码395个氨基酸,命名为FdCHS,NCBI登录号为GU169470。该氨基酸序列与同为蓼科的掌叶大黄、虎杖CHS的氨基酸序列同源率分别达到94%和93%,且含有CHS活性位点和底物结合口袋位点等保守位点。     

性别控制技术在家畜育种中的应用

家畜性别控制是当今生物学领域的重大研究课题之一。近年来,性别控制技术的研究取得了可喜的进展。作者综述了国内外家畜性别控制的生物学机制、途径、方法及存在的问题和发展前景,为性别控制技术在家畜实际生产中的广泛应用提供理论基础。     

猪链球菌9型钦州分离株cps9H基因序列分析

根据已发表的猪链球菌9型(SS9)荷兰5218分离株的基因核苷酸序列保守区域,设计一对特异性引物,以SS9钦州分离株抽提的DNA为模板,通过PCR方法扩增cps9H基因片段,并对其进行克隆、测序和分析。结果表明,4株SS9钦州分离株的cps9H目的基因长为389 bp,与已知的7个国内外SS9毒株cps9H基因片段的核苷酸及推导的氨基酸序列比较,同源性分别为96.7%~100%和91.5%~100%。     

影响羊生长发育的主基因研究进展

主基因是指对数量性状产生巨大效应的单个基因或位点.生长发育性状是羊的重要的经济性状,羊生长发育状况的好坏直接影响到其经济价值.随着分子生物学的发展,很多控制动物经济性状的主基因被发现.另外羊的生长发育性状如出生重、断奶重、成年体重等多是数量性状.数量性状最明显的特征是受多基因控制,并且易受环境因素的影响.因此,目前对数量性状的研究主要是从众多的基因中挑选出作用较大的主基因作为研究对象.在羊的主基因研究方面已经发现了影响羊繁殖、肉质及生长发育等经济性状的主基因.主基因被分离后,通过有力基因型的固定以及标记辅助选择,可获得大大超过常规选择的进展,使育种目标尽快得以实现,从而产生巨大的经济效益.文章仅就影响羊生长发育的几个主基因的研究进展作简要阐述,以期为育种实践提供科学的理论依据.     

KAP8.1基因多态对内蒙古绒山羊绒毛性状的影响

以角蛋白关联蛋白8.1(KAP8.1)基因为候选基因,采用PCR-SSCP技术,在内蒙古绒山羊群体中进行基因多态性检测.结果检测到AA、AB、AC、BB、BC和CC六种基因型,A、B和C三种等位基因;测序结果验证融P8.1基因编码区存在T113G和G116C两个SNP位点(GenBank accession no.AY510122),这两个突变未改变KAP 8.1蛋白氨基酸序列;关联分析结果表明,不同基因型对产绒量、绒长度和毛长度有显著影响(P＜0.05),但对绒细度没有影响(P＞0.05);AB基因型和BB基因型产碱量显著高于其它基因型.分析认为该效应是由于T113G突变所造成,表明KAP8.1基因多态性可能是缄山羊产绒量的一个分子标记.