农药残留酶联免疫吸附分析技术研究进展

酶联免疫吸附分析法具有灵敏度高、特异性强、方便快捷的特点,在现场筛选和大量样品的快速检测中显示了其独特的优势。简要介绍了农药残留酶联免疫吸附分析技术的关键环节及其应用,并对该技术存在的问题和应用前景进行了讨论。     

多巴胺对鸡新城疫疫苗抗体效价的影响

将180只10日龄公鸡随机均分成9组,用新城疫LaSota弱毒疫苗(ND)点眼滴鼻免疫的同时,3个实验组分别肌肉注射高、中、低剂量的多巴胺激动剂和拮抗剂溶液,注射1次/d,连续注射3次,对照组注射生理盐水。各组分别于免疫后7、14、21、28 d翼下静脉采血,分离血清,用微量血凝抑制(HI)测定新城疫抗体效价。结果表明,多巴胺(DA)受体激动剂中剂量组的HI抗体效价明显高于对照组,且呈现一直上升趋势;多巴胺(DA)受体拮抗剂的高剂量组抗体效价明显低于对照组,且呈现一直下降趋势;表明DA对新城疫疫苗的抗体效价有明显的调节作用。     

利用Asia1型口蹄疫病毒VP1蛋白的单克隆抗体建立单抗竞争ELISA方法

应用纯化的Asia1型口蹄疫病毒VP1蛋白作为抗原,采用过碘酸钠法标记纯化的单抗,建立了单抗竞争ELISA,检测10份阳性猪口蹄疫血清及200多份阴性血清,试验结果与样品的背景相一致。敏感性试验和重复试验结果表明,该方法具有稳定和敏感等特性,适合Asia1型猪口蹄疫病毒抗体的监测。     

不同猪瘟疫苗对仔猪的免疫效果

选择24头断奶仔猪,随机分成4组,每组6头,其中1组猪瘟细胞苗(A苗)按5和10 mL的剂量进行注射,其他3组猪瘟脾淋苗(依次为B、C、D苗)均按1和2 mL的剂量进行注射。在免疫15 d后,分别采血、分离血清、按照猪瘟正向间接血凝试剂盒使用说明方法检测猪瘟抗体水平。检测结果显示,A苗、B苗、C苗、D苗检出的平均抗体水平与未注射之前的平均抗体水平之比分别为1∶51、1∶91、1∶114、1∶161。统计分析表明,猪瘟脾淋苗免疫效果最好,而猪瘟细胞苗和脾淋苗两者抗体水平差异不显著,但总体上使用4种疫苗免疫15 d后都能使仔猪获得良好的保护力。     

猪瘟病毒结构蛋白抗体间接ELISA检测方法的建立及评价

通过研究猪瘟(CSF)疫苗免疫猪抗结构蛋白E2、E0和C抗体的产生规律,为临床制定合理的CSF疫苗免疫程序提供参考。利用间接ELISA方法检测CSF疫苗免疫猪过程中,抗E2抗原血清抗体的产生特征;分别以重组猪瘟病毒(CSFV)结构蛋白E0和C为抗原,建立检测血清抗体的间接ELISA方法,评价其敏感性和特异性,并检测疫苗免疫过程中抗E0和C蛋白抗体的消长规律。结果显示:CSFV-E0和CSFV-C间接ELISA抗体检测方法的抗原最佳包被质量浓度分别为2.09和1.59μg/mL,待检血清样本最适稀释度分别为1∶60和1∶80,酶标二抗稀释度分别为1∶100和1∶350,2种ELISA方法与常见猪病原的阳性血清无交叉反应,具有良好的特异性。CSF疫苗免疫后第7天即可检测到抗E2、E0和C蛋白的抗体,其中抗E2和E0的抗体在免疫后第21天达到最高水平,E2抗体滴度先上升后下降,E0抗体在免疫后第21天开始下降并最终趋于稳定;C蛋白抗体在免疫后第7天出现,随后开始下降,在第28天转为阴性。结果表明,利用重组抗原建立的CSFV血清抗体ELISA检测方法,可以用于评价CSF疫苗免疫后血清中针对3种结构蛋白的抗体消长特点,从而为临床猪瘟疫苗免疫程序的制定提供参考。     

分泌抗BVDV McAb杂交瘤细胞株的建立

用牛病毒性腹泻病毒（ＢＶＤＶ）感染ＭＤＢＫ细胞,将感染细胞培养物冻融后离心取上汪经ＰＥＧ沉淀浓缩抗原免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠,取血清抗体效价高遥免疫鼠的脾细胞与ＳＰ２／Ｏ细胞在ＰＥＧ作用下融合,产生杂交瘤细胞,用间接ＥＬＩＳＡ法检测杂交瘤细胞生长孔上清,筛选阳性杂交瘤细胞株。以有限稀法克隆２－３次,得到８ 泌抗ＢＶＤＶ的单克隆抗体（ＭｃＡｂ）杂交瘤细胞株。８株ＭｃＡｂ对ＢＶＤＶ,猪瘟均呈阳性反应。杂交     

水稻白叶枯病菌单克隆抗体酶联试剂盒的研制及其应用

利用全菌包被酶联免疫吸附试验间接法,建立了能准确快速灵敏测定不同类型的水稻白叶枯病菌的单抗酶联试剂盒。应用该试剂盒检测水稻白叶枯病病叶样品101份、病种样品10份及水稻白叶枯病病菌65个菌株,结果均为阳性,且重复性好,该试剂盒使用简便、灵敏度高、特异性强,有实用价值。     

犬瘟热病毒F蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

[目的]获得犬瘟热病毒F蛋白特异性单克隆抗体。[方法]用纯化的大肠杆菌BL21表达的犬瘟热病毒重组F蛋白作为抗原,免疫BALB/c小鼠,采用传统的杂交瘤技术制备单克隆抗体。用ELISAI、FA、Western-blot、细胞中和试验鉴定各株单抗的生物学特性。[结果]获得7株稳定分泌犬瘟热F蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株(2D6,3E10,3A2,5B7,5F6,6H8,9B6);单抗亚类鉴定结果分别为IgG2a,IgG1,IgG2b,IgG1,IgG1,IgG2a和IgG1;细胞中和试验初步证实2株单抗(5B7,9B6)具有中和犬瘟热病毒感染Vero细胞的作用,中和效价分别为1∶320和1∶640;经ELISA相加试验证实7株单抗的作用位点不同,其中2D6,5F6的作用位点非常相近。[结论]该研究成功制备了7株抗犬瘟热F蛋白特异性单抗,为进一步研究犬瘟热病毒F蛋白和临床诊断打下良好的基础。     

抗大肠埃希氏菌粘附素单克隆抗体诊断试剂的研制及其现场初步应用

作者从所研制的抗产肠毒素性大肠埃希氏菌(ETEC)粘附素K_(88)、K_(99)、987P和F_(41)单克隆抗体(以下简称单抗)44株中的7株,建立了检测以上粘附素抗原的单抗诊断试剂,并确定了以4单抗和3单抗夹心ELISA为特征的检测大批量临床样品的诊断方法与程序,对1038例自然发生下痢仔猪粪样ETEC粘附素的检测结果表明,本试验所建立的诊断方法与程序,具有敏感、准确、快速和简便的特点。     

中药添加剂对断奶仔猪免疫力及抗寄生虫感染的影响

为筛选替代抗生素、维护仔猪健康的中草药添加剂,将党参等21味中药按一定比例混匀,经粉碎研磨处理后按照断奶仔猪基础日粮的1.5%加入其中,30 d为1个疗程。试验结果显示:中药添加剂使用2个疗程后,可显著改善断奶仔猪的淋巴细胞转化率(P<0.05);1个疗程后,试验组的猪瘟和蓝耳病抗体检测合格率比对照组均提高了3%(P>0.05),2个疗程后试验组合格率比对照组分别提高了17%(P<0.05)和19%(P<0.05);粪便虫卵计数结果显示,用药1个疗程后试验组的减卵率为1%(P>0.05),2个疗程后试验组的减卵率为47%(P<0.05)。中草药添加剂具有一定的增强机体免疫力及抑制寄生虫卵的作用。