胶体金免疫层析检测牛结核γ干扰素方法的建立

牛结核病是一种重要的人畜共患病,尽管许多国家已经实施了牛群净化,但其仍然威胁人类的公共卫生健康。本研究利用抗牛γ干扰素特异性单克隆抗体,通过免疫金标记技术,建立了胶体金免疫层析试纸条检测牛γ干扰素的方法。研充结果证明,该方法对牛γ干扰素具有高度特异性,与其它动物干扰素没有交叉反应,检测牛γ干扰素的灵敏度与进口ELISA试剂盒相当。试纸条在室温保存6个月、4℃保存12个月,其特异性及灵敏度没有明显变化。对田间送检的23份全血经结核特异性刺激后进行检测,结果与进口结核ELISA试剂盒符合率为91．3％。研究表明,本研究建立的牛γ干扰素免疫层析检测方法具有特异、敏感、稳定、操作简单快捷等特点,适合用于牛结核的快速特异检测。     

Immunohistochemical evidence of Orexin-A in the pancreatic beta cells of domestic animals

A large body of information proves that Orexin-A is present in the pancreatic endocrine cells of humans and laboratory animals; more detailed studies identify Orexin-A-immunopositive cells as beta cells. Because no data have been reported on the pancreas of domestic animals, we investigated the presence and the distribution of cells containing Orexin-A in the pancreas of cattle, sheep and pigs by means of immunohistochemical techniques.Using a polyclonal antibody against Orexin-A, the immunopositive reaction was identified in the cytoplasm of many insular cells in the three species studied.Double immunohistochemical staining, using a polyclonal anti-insulin antibody, showed that Orexin-A is co-expressed with insulin.Our results, besides showing the presence of Orexin-A in the endocrine pancreas of domestic animals, together with data present in the literature, could contribute to the understanding of complex mechanisms regulating the functionality of the endocrine pancreas in domestic animals.     

膜分离法纯化浓缩猪伪狂犬病疫苗毒的效果

本研究使用不同孔径的陶瓷(有机)膜过滤器,对不合格的猪伪狂犬病毒细胞收获液(病毒含量≤104TCID50/mL)滤除杂蛋白、超滤浓缩、除菌处理得到纯化浓缩的猪伪狂犬病疫苗病毒液;然后对纯化浓缩的猪伪狂犬病疫苗病毒液分别进行杂蛋白去除率检验与无菌检验、病毒含量测定、安全检验、效力检验;将检验合格的纯化浓缩的猪伪狂犬病疫苗病毒液添加保护剂冻干,并对纯化浓缩的猪伪狂犬病冻干活疫苗进行以上各项检验,以及进行免疫猪体内抗体消长变化的检测。结果表明:纯化的猪伪狂犬病疫苗杂蛋白去除率平均达到68.3%以上,病毒含量≥105TCID50/mL,效力检验合格;免疫猪体内抗猪伪狂犬病毒抗体增长幅度比同时期未纯化的常规疫苗显著,其中免疫至84 d时中和抗体效价平均高达40.35稀释倍数左右,比常规疫苗中和抗体效价平均高出14.22稀释倍数。此项研究为畜禽疫苗的纯化提供一定的参考。     

硝基呋喃类药物广谱特异性多克隆抗体的制备与鉴定

以5-硝基糠醛为分子模板合成了硝基呋喃类药物的共有半抗原,然后分别以重氮法和戊二醛法合成了人工完全抗原。以两种方法所得免疫原免疫新西兰兔,获得了能够同时识别8种硝基呋喃药物的广谱特异性抗体。两种抗体均对8种药物具有较高的灵敏度和交叉反应性。检测限范围为6~19 ng/mL,交叉反应率范围为32%~92%。因此,本研究制备的广谱特异性抗体可以用于研究建立多残留检测硝基呋喃类药物的免疫分析方法。     

Vaccination Response of Young Foals to Keyhole Limpet Hemocyanin: Evidence of Effective Priming in the Presence of Maternal Antibodies

The ability to produce antibodies is essential for protection from infectious disease; however, in the neonate, maternal antibodies have been proposed to interfere with the foal's ability to respond to vaccination. In species other than the equid, keyhole limpet hemocyanin, a high-molecular weight protein, is used in vivo as an experimental vaccine component because of its high intrinsic immunogenicity. In this study, we show that young foals are able to produce a primary antibody response to vaccination at an early age. Thus, foals, like human infants, are capable of responding to antigenic exposure to a novel antigen (keyhole limpet hemocyanin) during the neonatal period. Although vaccinating foals in the presence of maternal antibodies failed to induce a primary serological response, priming occurred as comparable anamnestic responses were detected upon subsequent exposure to the antigen. There was no evidence of tolerance induction.     

猪血浆蛋白粉中IgG含量的酶联免疫检测方法研究

猪血浆蛋白粉已经成为断奶仔猪理想和必需的蛋白饲料来源。评价血浆蛋白粉质量的重要指标就是其中IgG的含量。研究通过制备猪IgG单克隆抗体,调试优化后建立了相应的酶联免疫检测方法。该方法最低检测浓度为10μg/g,阴性血浆蛋白粉添加10(1%)、100(10%)、200mg/g(20%)猪IgG标准品后用本方法测定回收率为73.1%～104.6%,批内、批间变异系数小于15%,可基本满足血浆蛋白粉质量监控需要。     

布鲁菌在豚鼠和奶牛体内诱导的抗体水平和变态反应强度的相关性

为探索布鲁菌在豚鼠和奶牛体内所引起的抗体水平和变态反应强度的相关性,分别用1×104,3×104CFU牛种布鲁菌强毒2308株各感染12只豚鼠,30 d后测定抗体滴度和变态反应强度。感染后35 d,扑杀豚鼠,取脾脏测定每克脾脏含菌量。用布鲁菌A19疫苗,以5×1010CFU皮下注射布病阴性荷斯坦奶牛50头,分别于免疫后15,30,60 d测定抗体滴度,并于免疫后45 d测定变态反应强度。运用SPSS 17.0-Analyze-Correlate-Bivariate Corre-lations程序分析试验数据,结果显示,不同剂量布鲁菌2308感染豚鼠后30 d所诱导的抗体水平、变态反应强度和克脾脏含菌量三者之间均无相关性。A19疫苗免疫奶牛后60 d的抗体水平与免疫45 d的变态反应强度呈正相关,免疫15 d和30 d的抗体水平和变态反应强度无相关性。豚鼠试验结果表明,抗体水平、变态反应强度与个体对布病的抵抗力均无相关性。     

日粮铜水平对育成蛋鸡生长性能和新城疫抗体效价的影响

通过探讨有机铜对育成蛋鸡免疫功能和生产性能的影响,为蛋白质螯合铜在生产中的应用提供理论依据。试验选用9周龄的海兰褐蛋鸡216只,随机分为6组,每组3个重复,每个重复12只鸡,11周龄时开始进入正式试验。分别饲喂添加蛋白质螯合铜(以铜量计)0mg/kg(Ⅰ组)、6.5mg/kg(Ⅱ组,对照组)、15mg/kg(Ⅲ组)、30mg/kg(Ⅳ组)、60mg/kg(Ⅴ组)、125mg/kg(Ⅵ组)相同的基础日粮,试验期为6周,测定鸡的平均日增重、平均日采食量和新城疫抗体效价。结果表明:与对照组相比,Ⅲ组和Ⅳ组显著提高育成蛋鸡平均日增重、平均日采食量和新城疫抗体效价。添加15mg/kg和30mg/kg铜(以蛋白质螯合铜的形式)可显著提高育成蛋鸡的生产性能和免疫功能,15～30mg/kg铜(以蛋白质螯合铜的形式)为育成蛋鸡最适宜的添加范围。     

猪肺炎支原体P46蛋白单克隆抗体制备

P46蛋白是猪肺炎支原体的主要免疫优势蛋白,且与其他支原体无交叉反应,常作为猪肺炎支原体检测的靶蛋白。制备针对该蛋白的特异性单抗能为猪肺炎支原体的检测及机理研究提供有效的资源。本研究取猪肺炎支原体全菌抗原免疫小鼠,用大肠杆菌表达的P46蛋白作为筛选抗原制备了2株特异性单克隆抗体1A4和3C11。结果显示,2株单抗ELISA效价最高可达1∶64 000。Western-blot结果表明,2株单抗均能与原核表达的P46蛋白及猪肺炎支原体全菌蛋白中46 000大小的蛋白发生特异性反应;2株杂交瘤细胞株经3个月冻存或连续传代3个月均能保持较高的滴度。本研究成功制备了2株针对猪肺炎支原体P46蛋白的特异、稳定且高滴度的单克隆抗体。     

动物源性食品中莫能菌素残留ELISA试剂盒的研制

利用碳化二亚胺法合成抗原,进行动物免疫,制备特异性强的单克隆抗体。在筛选莫能菌素单克隆抗体的基础上,建立了莫能菌素ELISA检测方法,并研制出利用单克隆抗体对动物源性食品中残留的莫能菌素进行检测的试剂盒。本试剂盒的最低检测限为1μg/kg,试剂盒标准品变异系数为5.4%～13.1%,肌肉、肝脏样本的变异系数为5.1%～14.2%,肌肉和肝脏样本添加回收率分别为67.5%～87.4%和64.7%～86.7%。该方法的建立为莫能菌素的残留检测提供了可靠的分析检测手段。