2016年-2017年新疆规模化猪场伪狂犬病抗体检测

为了解新疆地区不同规模化猪场伪狂犬病病毒(PRV)野毒感染情况,采用ELISA对2016年4月-2017年12月来自67个不同规模化猪场的2 516份血清进行了PRV-gE抗体血清学调查。结果显示,血清总阳性率为34.02%,2016年和2017年阳性率分别为17.77%和39.52%;哺乳仔猪、保育猪、育肥猪、后备母猪、妊娠母猪、哺乳母猪、公猪总阳性率分别为26.07%、22.35%、35.38%、32.70%、33.13%、31.06%和31.71%;猪场总阳性率为82.09%,北疆、南疆和东疆猪场阳性率分别为78.57%、100.00%和100.00%。结果表明,2016年-2017年新疆地区猪群中PRV感染率明显上升,南疆与东疆地区阳性率显著高于北疆地区,各个阶段猪群阳性率均显著升高,母猪与公猪感染加重是伪狂犬病持续存在的重要原因,对其进行防控与净化刻不容缓。     

Ns NPV杂交瘤抗体的研究

本文研究了抗纯化N.Sertifer NPV的杂交瘤抗体。病毒的包涵体是通过K-系列离心而提纯,由Frank Lewis博士提供。每个BALB/C小白鼠每次用200μg抗原免疫。最后一次注射是在细胞融合之前4～7天。取2×10~8脾细胞与2×10~7骨髓瘤细胞(NS-1或P_3×63)在50％PEG 4000(Sigma)存在下进行融合,用HAT来选择杂交瘤细胞。用间接ELISA法来筛选阳性的杂交瘤细胞。 13个细胞系已筛选成功,并对其产生的免疫球蛋白进行了分型。选择三种Lepidopteran NPVs用于交叉保护试验。除三种杂交瘤抗体外,其他10种对这三种病毒均有不同程度的交叉反应。     

Combining ability,maternal, and reciprocal effects of elite early-maturing maize population hybrids

Choosing germplasm based on elite and diverse genetic sources is essential for the genetic improvement of maize (Zea mays L.) hybrids. The objectives of this research were to evaluate the agronomic and economic potential of maize population and single-cross hybrids and whether significant maternal (ME) and reciprocal effects (RE) reside in elite population hybrids for seed production purposes. Seven elite maize populations currently under recurrent selection at North Dakota State University (NDSU) [NDSCD(M-S)C11, NDSAB(MER-FS)C14, BS21(R)C7, BS22(R)C7, LEAMING(S)C4, CGL(S₁-S₂)C5 and CGSS(S₁-S₂)C5] were crossed in a diallel mating design to form 42 population hybrids, including their reciprocals. The 42 population hybrids with eight single-cross hybrids were evaluated at six U.S. North Central locations in 2005. Data collected across locations indicated that differences across genotypes were significant (P ≤ 0.05) for all traits observed, except for grain yield ear components. General combining ability (GCA) effects were on average larger than specific combining ability (SCA) effects. ME and RE were not significant for all traits, except for ear height. The large grain yield differences between macro-environments were reflected in the ranking of genotypes, with BS21(R)C7 × BS22(R)C7 being the top performer in eastern environments and CGSS(S1-S2)C5 × NDSAB(MER-FS)C14 being the top one across western environments where drought is the major limitation. The increased ethanol production and demand from maize make test weight (and grain quality), earliness, lodging resistance, and drought tolerance as important as grain yield for maintaining a sustainable maize-ethanol relationship. Part of the thesis submitted by McDonald B. Jumbo in partial fulfillment of the requirements for a MS degree at North Dakota State University.     

不孕症奶牛抗卵巢抗体的检测及临床意义

为探讨奶牛不孕症与ＡＯＡｂ的关系,用放免法检测啊１４例原发性不孕、１０例继发性不孕奶牛血清ＡＯＡｂ,并与正常妊娠组对照。实验表明,ＡＯＡｂ阳性１０例,总阳性率为４１．６７％,ＡＯＡｂ为原发性不孕相关,与继发性不孕无明显关系。结果提示,ＡＯＡｂ的存在是奶牛原发性不孕的重要病因。     

Identification of B-cell epitopes on the betanodavirus capsid protein

The pepscan procedure was used to identify betanodavirus B-cell epitopes recognized by neutralizing mouse monoclonal antibodies (MAbs) and serum samples obtained from sea bass, Dicentrarchus labrax, naturally infected with betanodavirus. Pepscan was performed with a panel of thirty-four 12-mer synthetic peptides that mimicked the entire betanodavirus capsid protein. Sea bass serum samples reacted strongly with three regions of the capsid protein comprising amino acid residues 1-32, 91-162 and 181-212. The latter region was also recognized by neutralizing MAbs and coincided with a region of high antigenic propensity identified by an antigen prediction algorithm. These data suggest that a region of the betanodavirus capsid protein spanning amino acid residues 181-212 may represent a neutralization domain that could potentially be used to inform the development of nodavirus vaccines and immunodiagnostic reagents.     

牛朊蛋白和酵母朊毒体结构域融合蛋白的原核表达及其单克隆抗体的制备

利用DNA重组技术将酵母Ure2p朊蛋白结构域(UPD)基因插入牛朊蛋白(BPrP)表达质粒pET-PrP中,构建原核表达载体pET-PrP-UPD.阳性质粒转化宿主菌BL21 (DE3),在IPTG诱导下获得高效表达.Westernblot检测表明表达的重组蛋白与单克隆抗体6H4呈现特异性反应,且纯化的PrP-UPD融合蛋白在体外具有聚集成淀粉样纤维、抵抗蛋白酶K消化等朊毒体的结构特点.利用纯化的PrP-UPD免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0细胞融合,经克隆和筛选,获得3株稳定分泌抗重组PrP单抗的杂交瘤细胞,分别命名为1G3、3A4、4D1,其中1G3分泌的单抗能识别细胞型牛朊蛋白,其Ig亚类为IgG2b,腹水ELISA效价为1×105,Western blot表明该单抗具有较强的特异性.     

抗Asia1型口蹄疫病毒单克隆抗体的制备及生物学特性鉴定

用纯化的Asia1型口蹄疫病毒免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,经间接ELISA和间接免疫荧光(IFA)筛选,有限稀释法克隆,获得了2株稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为3H6、5G3,其细胞培养上清效价分别为1:64和1:128,小鼠腹水效价分别为1×10~(-4)和8×10~(-3);ELISA和IFA结果显示,2株单抗仅与Asial型口蹄疫病毒反应,不与O型口蹄疫病毒反应,表明它们均为抗Asial型口蹄疫病毒的型特异性单克隆抗体。westem blot结果显示,2株单克隆抗体均不与全病毒抗原反应,表明它们所针对的抗原表位均为构象表位。相加ELISA试验表明,两株单抗识别不同的抗原表位。经硫氰酸盐洗脱法测定,3H6和5G3的相对亲和力指数分别为1.0 mol/L和1.5 mol/L。这2株单抗的获得为建立口蹄疫病毒检测方法提供了强有力的工具。     

动物组织中四环素类抗生素残留的ELISA检测研究——土霉素抗体的制备

四环素类抗生素属小分子半抗原物质 ,必须与大分子物质结合才能产生免疫原性。本试验采用重氮化法合成土霉素 牛血清白蛋白 (BSA OTC)及土霉素 鼠血清白蛋白 (RSA OTC)人工抗原 ,用紫外扫描对其进行鉴定。以BSA OTC免疫家兔制备抗血清 ,以RSA OTC为包被抗原 ,采用双向免疫扩散法和ELISA方法对抗血清进行鉴定。结果表明用重氮化法合成的人工抗原对四环素类药物有特异的抗原抗体反应 ,抗血清效价达 1 2 8× 1 0 5,完全能够满足四环素类药物残留的ELISA检测要求     

鲤春病毒血症病毒单克隆抗体的制备及其特性鉴定

为获得针对鲤春病毒血症病毒(SVCV)特异性的单克隆抗体(MAb),以纯化的SVCV为抗原,免疫BALB/c小鼠.将免疫鼠的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,采用间接ELISA法筛选获得4个能稳定分泌抗SVCV MAb的杂交瘤细胞株;4个杂交瘤细胞制备腹水的MAb效价为1:160 000～1:640 000.亚型鉴定结果表明,这些MAb分属2个亚型(1F1、3E1,IgG2a;3F5、4F9,IgGl),轻链均为K链.Western blot分析显示,MAb1F1、3F5、4F9能特异性地识别SVCV的N蛋白(47 ku),3E1能特异性地识别SVCV的G蛋白(69 ku).采用相加ELISA法对抗原表位分析结果显示,1F1、3F5、4F9可能识别相同的表位,3E1则识别不同的表位.间接免疫荧光试验结果显示4株MAb均能对染毒病灶产生特异性的荧光染色.这些MAb的制备为SVCV免疫学检测方法的建立奠定了基础.     

牛血清中口蹄疫病毒非结构蛋白抗体时间分辨荧光免疫分析检测方法的建立

为研究快速定量检测牛血清中口蹄疫病毒非结构蛋白抗体的方法,试验通过优化抗原表达条件等步骤,在大肠杆菌原核表达系统中表达可溶性的3A-3B融合蛋白,并基于纯化的可溶性融合蛋白建立口蹄疫病毒非结构蛋白抗体时间分辨荧光免疫分析检测试剂盒。结果表明:建立的方法能够检测牛血清中的口蹄疫病毒非结构蛋白抗体,敏感性高,特异性强,对其他相关的牛类病原无交叉反应,其组内与组间变异系数分别低于10%和15%,具有良好的重复性。对300份临床牛血清样品进行检测,同Procheck公司的口蹄疫非结构蛋白抗体试剂盒进行比较,阳性样品符合率96%,阴性样品符合率93.3%,总的符合率95.7%。重复性试验组内与组间变异系数均小于10%。文章首次建立了口蹄疫病毒非结构蛋白抗体时间分辨荧光免疫分析检测方法,同传统的ELISA方法相比,该检测方法特异性相当、敏感性更高,操作更简单、快速,具有较高的应用推广价值。