荧光定量PCR检测单核细胞增生性李斯特氏菌

[目的]建立一种快速检测单核细胞增生性李斯特氏菌的实时荧光定量PCR方法。[方法]针对单核细胞增生性李斯特氏菌的特异基因hlyA,结合锁定寡核苷酸（LNA）,设计引物和探针,利用阳性质粒和模拟标本建立单核细胞增生性李斯特氏菌实时定量荧光PCR检测方法。[结果]以单核细胞增生性李斯特氏菌为模板克隆了hlyA基因,得到阳性质粒,并进一步建立了荧光定量PCR方法,得到标准曲线Y=-3.273 X＋37.640,相关系数R2=1.000;该方法的灵敏度可以达到1.2×10 CFU/ml;人工污染猪肉检出限可以达到3.2×102 CFU/ml。[结论]建立了快速检测单核细胞增生性李斯特氏菌的实时荧光定量PCR方法,为实现食品中单核细胞增生性李斯特氏菌的快速检测构建了一个技术平台。     

肉中两种致病菌的双重PCR检测方法的建立

为了建立肉中单增李斯特菌和金黄色葡萄球菌的双重PCR检测方法,以金黄色葡萄球菌nuc基因和单增李斯特菌hly基因为靶基因设计引物,通过优化退火温度和PCR反应体系,建立这两种菌的双重PCR检测方法,并分析其反应特异性和敏感性。进一步将该方法应用到人工模拟肉样中,并分析其敏感性。结果表明,建立的单增李斯特菌和金黄色葡萄球菌双重PCR检测方法应用于人工模拟肉样中具有较高敏感性,其中金黄色葡萄球菌和单增李斯特菌最低检测限分别为102和103 cfu.mL-1。该方法的建立为食品中多种致病菌的同时检测奠定了基础。     

单核增生李斯特氏菌的分布研究

对采自人和动物粪便、冷链食品、猪肉、羊肉、牛肉、鸡肉、鱼肉等640份样品进行李斯氏菌的分离与鉴定,研究了李斯特氏菌的分布状况,检出单核增生李斯特氏菌1株,英诺克李斯特氏菌7株,威尔斯李斯特氏菌1株,格氏李斯特氏菌34株,默氏李斯特氏菌6株;单核增生李斯特氏菌的检出率为0.16%,李斯特氏菌的总检出率为7.66%。     

3种单增李斯特氏菌快速检测方法的比较

【目的】确定适用于不同条件下快速检测单增李斯特氏菌的方法。【方法】以单增李斯特氏菌标准菌株CMCC54004和市售盐水鸭、凉拌菜为研究对象,按照国家食品安全标准(GB 4789.30-2010)对检测样品进行选择性增菌培养,选择阴性样品进行人工布菌,比较单增李斯特氏菌蛋白条检测法、CPA恒温扩增法以及实时荧光PCR方法的检测效果,并以传统平板分离法进行验证。【结果】蛋白条检测法操作简单但灵敏度低,最低检测限为106cfu/mL;实时荧光PCR方法灵敏度高,最低检测限为101 cfu/mL,但操作繁琐,对操作技术及实验室条件要求较高;CPA恒温扩增方法灵敏度相对较高,最低检测限为105 cfu/mL,操作相对简单。【结论】实时荧光PCR方法适合灵敏度要求高、且具备良好实验条件时使用;CPA恒温扩增法适于对灵敏度要求不高、实验室条件简单的基层实验室使用。     

Prevalence of Listeria species in camel sausages from retail markets in Aydin province in Turkey and RAPD analysis of Listeria monocytogenesisolates

Samples were taken from 100 camel sausages from the different retail markets in Aydin province in the south-west of Turkey and they were tested for the presence of Listeria spp by biochemical methods. Samples were enriched using Listeria Enrichment Broth and they were inoculated onto Listeria Selective Agar. Listeria monocytogenes was isolated from nine samples (9%), Listeria innocua from 14 samples (14%) and Listeria welshimeri from two samples(2%). A 701 bp fragment of listeriolysin O sequence for L. monocytogenes was amplified using specific primers by polymerase chain reaction (PCR) for confirmation of the identification. A random primer (OPA-11) was used in a random amplified polymorphic DNA (RAPD) assay. This detected five different band profiles amongst the L. monocytogenes isolates, indicating a relatively large amount of genetic heterogeneity amongst the nine isolates. The study has highlighted the need for improved strategies for food safety, in particular appropriate hygienic precautions to avoid contamination of sausage during the manufacturing process and appropriate preservation techniques during storage and transport, to prevent transmission of Listeria spp to consumers at home and abroad.     

Fluid-structure thermal simulation of gasoline engine manifold catalytic converter

片球菌素是一类未修饰的具有良好热稳定性的小分子蛋白质,其理化性质稳定,抑菌谱较广,能抑制多种革兰氏阳性菌,尤其对单核细胞增多症李氏杆菌的抑制作用最为显著。本文综述了近年来片球菌素在食品防腐保鲜应用方面取得的研究进展,分析了其作为天然食品防腐剂的发展前景,同时就片球菌素当前产业化开发与市场应用所面临的问题进行了深入探讨。     

含果粒液体食品微波杀菌动力学模型的比较研究

为了描述微波处理下微生物致死动力学的变化规律,以含柑橘果粒的含糖液体作为对象,并分别接种了单增李斯特菌和大肠杆菌,选用800 W微波功率对样品进行杀菌处理,考察其杀菌效果。分别应用一级动力学模型、Weibull模型、Log-Logistics模型和Dose-Response模型对微波处理条件下两种微生物的失活曲线进行动力学分析。结果表明：微波加热40 s过程中,大肠杆菌和单增李斯特菌的活菌数迅速下降,分别下降了2.5和3.5个对数值数量级,两者的热敏感性不同,杀菌过程中致死速率存在差异,两者失活曲线形状较为相似,加热初始活菌数下降缓慢,当温度达到60 ℃时迅速下降,当温度超过100 ℃时,致死速率逐渐趋缓。一级动力学模型不能用于描述微波杀菌下两种微生物致死规律。Weibull模型、Log-Logistics模型和Dose-Response模型均能较好的拟合微波处理下两种微生物的失活曲线,用五个模型评价参数精确因子、偏差因子、根平均方差、根平方和以及决定系数综合分析比较了不同数学模型的拟合程度,Dose-Response模型能最好的拟合单增李斯特菌的失活曲线,Log-Logistic模型能最好地拟合微波杀菌条件下大肠杆菌的失活曲线。     

四甲基吡嗪对獭兔单增李斯特菌感染和天然免疫的影响

本试验通过研究四甲基吡嗪（TMP）对单增李斯特菌感染獭兔载菌量、溶血素、促炎因子（TNF-α、IL-1β和IFN-γ）、免疫器官指数和天然抗体的影响,旨在探讨TMP对单增李斯特菌的抑菌作用。选择断奶獭兔180只随机分为5组,每组6个重复,每个重复6只。对照组饲喂基础日粮,其他4组在基础日粮中分别添加0、50、100、150 mg/kg TMP。饲养试验第1天,4个试验组獭兔每只灌服1 mL（10⁷ CFU）单增李斯特菌株,对照组灌服无菌株的培养液,饲养试验持续14 d。结果表明,TMP降低了獭兔肝脏、脾脏和淋巴结的单增李斯特菌载菌量（P<0.05）。盲肠食糜、肝脏、脾脏和淋巴结载菌量均呈线性下降（P<0.05）。添加TMP使獭兔李斯特菌溶血素和促炎因子（TNF-α和IL-1β）显著降低（P<0.05）,14 d时,李斯特菌溶血素呈线性下降（P<0.05）,促炎因子（TNF-α和IL-1β）均呈现线性和平方下降（P<0.05）。胸腺指数、脾脏指数、血清IgA和IgG在单增李斯特菌感染后下降,随TMP添加量增加而增加,但只有饲喂至7 d时的脾脏指数呈线性上升（P<0.05）。说明日粮中添加TMP可以降低单增李斯特菌感染獭兔组织载菌量,减少单增李斯特菌的毒力,对提升免疫器官指数和天然抗体有积极作用。     

使用二重PCR方法快速检测单核细胞增生性李斯特氏菌的研究

本研究以单核细胞增生性李斯特菌Hly基因和InlA基因作为靶序列设计2对引物,建立了检测单增李斯特菌的二重PCR方法。结果表明,该方法可以同时扩增出单增李斯特菌的Hly基因和InlA基因,而对大肠杆菌、沙门氏菌等食品中的常见致病菌和英诺克李斯特菌均不能扩增出任何条带,表现出良好的特异性。二重PCR方法的最低检测限为104CFU/mL,并能够用于鉴定实验小鼠攻毒后内脏器官的单增李斯特菌分离培养物。该方法表现出良好的特异性、敏感性和通用性,适用于单增李斯特菌的快速鉴别检测。     

ABC—Dot—ELISA快速检测食品中单核白细胞增多症李氏杆菌

本实验采用ＡＢＣ一Ｄｏｔ—ＥＬＩＳＡ检测食品中单核白细胞增多症李氏杆菌。该法可检出在蛋白胨增菌液中接种的单核白细胞增多症李氏杆菌．其敏感性可达１０４个／ｍｌ，比Ｄｏｔ—ＥＬＩＳＡ约高１０—１００倍．特异性检测表明，其不与沙门氏菌、小肠结肠耶氏菌、蜡样芽胞杆菌、副溶血性弧菌发生交叉反应，但与葡萄菌和大肠杆菌有交叉反应．该法在２６ｈ内可报告结果，比常规法快３—５ｄ。对２３１份各种食品进行检测，检出４１份，经生化试验复检，３８份为单核白细胞增多症李氏杆菌，阳性率１６．４５％，假阳性率７．３２％，常规法的检出率１７．３１％。两种方法比较，结果相差不显著（Ｐ＞０．０５）。进行３次重复性试验，结果完全相同。实验结果表明，该法操作简便快速，具有较高的特异性和敏感性，可在２６ｈ报告结果，适于对大批样品进行快速检测，便于基层推广使用．