鼠李糖乳酸杆菌LG_A对鸡小肠上皮细胞β-防御素-9基因表达的影响

本研究旨在研究益生性鼠李糖乳酸杆菌LGA对体外培养的鸡小肠上皮细胞β-防御素-9 (AvBD9)表达的调节作用.选用鼠李糖乳酸杆菌LGA对体外培养的鸡小肠上皮细胞进行剂量依赖性及时间依赖性刺激实验,利用实时荧光定量PCR(fluorescence quantitative PCR,FQ-PCR)从mRNA水平研究刺激后上皮细胞AvBD9基因表达水平的差异.结果表明,不同浓度(2×105、2×106、2×107 cfu· mL-1)鼠李糖乳酸杆菌LGA均能上调AvBD9mRNA的表达,且在不同细菌浓度之间AvBD9 mRNA的表达存在差异.热灭活鼠李糖乳杆菌LGA亦能上调AvBD9基因表达,且上调值显著高于活菌(P＜0.05).鼠李糖乳杆菌LGA刺激上皮细胞后AvBD9表达存在时间依赖关系,12 h时AvBD9的表达达到峰值.Western blot检测结果显示,鼠李糖乳杆菌LGA刺激后的上皮细胞培养上清中存在AvBD9蛋白表达,表明AvBD9蛋白可以分泌到细胞外而发挥其生物学功能.益生性鼠李糖乳酸杆菌LGA与鸡肠道上皮细胞的相互作用过程中,鼠李糖乳酸杆菌LGA能够促进上皮细胞抗菌肽β-防御素-9的表达.本研究结果提示益生性乳杆菌可能通过促进肠道上皮抗菌肽的表达而发挥其益生作用.     

猪流行性腹泻病毒S2基因B细胞表位嵌入型S-层蛋白在副干酪乳杆菌中的表达与鉴定

【目的】构建新型猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus, PEDV)乳酸菌活菌疫苗载体。【方法】应用DNA重组技术将嗜酸乳杆菌S-层蛋白(SLP)基因及PEDV S2基因B细胞表位(EpitopeS2)融合基因(SLP-EpitopeS2)克隆到乳酸杆菌表达载体pTRK892中,构建重组载体pTRK-SLP-EpitopeS2,通过电转化方法将重组质粒导入副干酪乳杆菌中,获得重组副干酪乳杆菌。分别用SDS-PAGE、Western blotting和免疫荧光试验(IFA)鉴定目的蛋白在副干酪乳杆菌中的表达。【结果】PCR结果显示,成功扩增出大小为1 400 bp的目的条带,与插入融合基因大小一致,双酶切结果出现大小分别为1 400和4 700 bp的2条带,基因测序结果显示无碱基缺失和突变等,从而确定重组质粒pTRK-SLP-EpitopeS2构建正确。SDS-PAGE、Western blotting结果显示,在48 ku处出现与理论值大小一致的目的蛋白条带,表明融合基因SLP-EpitopeS2在副干酪乳杆菌中得到有效表达。IFA结果显示,...     

乳酸杆菌抑制致病菌及生物保鲜发酵剂特性评价

以15株乳酸杆菌为研究对象,动物双歧杆菌乳亚种BB-12作为对照,研究它们对肠道致病菌的抑菌特性.结果表明:9株菌对5株指示菌均有较好抑制作用,2株菌对金黄色葡萄球菌、肠炎沙门氏菌、大肠杆菌和蜡样芽孢杆菌均有抑制作用;以抑菌效果、凝乳状态、产酸性能为指标,筛选出4株菌,与嗜热链球菌ST-21组合制备生物保鲜发酵剂;通过...     

转录组测序技术在植物乳杆菌细菌素合成研究中的应用研究进展

细菌素因具备抵御食源性致病菌和腐败菌的特性,可作为天然无毒抗菌剂应用在食品中。生物信息学是以计算机科学和应用数学为基础理论,将生命科学领域测得的生物信息经搜索比对,分析相关的核酸信息和蛋白结构基因,从而定位功能基因的一门科学。其中,转录组学即从整体转录水平分析不同细胞或组织在特定条件下所转录的所有RNA,从而揭示生物学通路和调控分子机制。将转录组测序结果中获得的海量数据与参考基因组比对,即可从基因表达水平上定量分析转录本的遗传信息。通过差异表达倍数筛选出差异基因,对其进行GO（Gene Ontology）功能注释和KEGG通路富集分析,进而推测其功能特性,并揭示细菌素等代谢产物的合成机理。由于转录组测序不存在安全隐患且属于较为经济的调控方式,因此该技术有望为细菌素大规模投入生产提供新思路。     

传统乳制品中嗜酸乳杆菌的生理特性研究

文章以实验室保藏的从内蒙古地区采集传统发酵乳制品中分离出的8株嗜酸乳杆菌为研究对象,研究了它们的生理特性,包括生长曲线的测定,渗透压对菌体生长的影响,耐胆盐性及抑菌能力。结果表明,该8株菌耐盐和耐胆酸盐能力分别达到6.0%和1.0%,经过多次筛选后,获得了两株细菌素产生菌株KLDS1.0365和KLDS1.0384。     

刺参池塘养殖系统中1株副干酪乳杆菌的分离及其生物学特性研究

本研究利用MRS培养基,从山东东营刺参(Apostichopus japonicus)养殖池塘环境中分离到56株乳酸菌.以刺参腐皮综合征2种重要致病菌灿烂弧菌(Vibrio splendidus)和假交替单胞菌(Pseudoalteromonas nigrifaciens)为指示菌,采用牛津杯法测定所分离的乳酸菌对2株...     

食淀粉乳杆菌干预PRV GDNF和GSNO的ZO-1调控

为探究食淀粉乳杆菌在猪轮状病毒(PRV)感染乳鼠空肠组织中GSNO及GDNF对紧密连接蛋白ZO-1的影响,选择2日龄清洁级中国昆明鼠乳鼠作为试验动物,分为5组,正常对照组、轮状病毒组(RV组)、食淀粉乳杆菌组(L.a组)、预防性干预组(BI组)、治疗性干预组(AI组).空肠组织作为靶器官,分别应用实时荧光定量PCR检测GDNF和ZO-1 mRNA相对表达量,采用比色法检测抗氧化指标(NO、GSH、SOD、MDA、GSH-Px、CAT),通过ELISA定量检测GSNO和5-HT含量,Western blot检测ZO-1、GDNF、GFAP蛋白含量变化,免疫组化检测ZO-1蛋白分布表达变化.结果表明,食淀粉乳杆菌可显著上调ZO-1和GDNF mRNA相对表达量(P<0.05),RV组、BI组和AI组ZO-1和GDNF的mRNA相对表达量变化趋势相似,先升后降.攻毒后各时间点,L.a组5-HT含量均显著高于其他组(P<0.05),RV组5-HT含量高于对照组,低于BI组和AI组;L.a组GSNO含量均显著高于其他组(P<0.05),RV组、BI组和AI组GSNO含量整体变化趋势相似,均是先升后降;对于ZO-1、GFAP、GDNF蛋白表达,整体趋势相似,在攻毒后第2、3天表达量较显著,L.a组ZO-1和GFAP蛋白表达量比其他4组高,AI组GDNF蛋白表达量比其他4组高.免疫组化结果表明,L.a组ZO-1蛋白分布比对照组更连续均匀,BI组ZO-1蛋白分布较RV组更连续,AI组与RV组无明显差异.RV组NO含量和MDA含量显著高于其他组(P<0.05),L.a组NO和MDA含量保持不变,BI组和AI组NO和MDA含量高于L.a组,低于RV组;L.a组CAT、SOD、GSH、GSH-Px含量均高于其他组,BI组和AI组CAT、SOD、GSH、GSH-Px含量整体变化趋势一致,先降后升,且高于RV组.可知,食淀粉乳杆菌通过上调GDNF和GSNO表达和增强乳鼠空肠抗氧化能力,共同促进ZO-1表达,使其在乳鼠空肠上更均匀连续,显著提高乳鼠空肠细胞屏障强度,干预轮状病毒感染.     

鲢鱼加工副产物的酶解产物对益生菌生长特性的影响

为探索鲢鱼加工副产物高值化利用新途径，降低益生菌培养基氮源成本，以氮回收率和相对分子质量分布为指标，研究3种蛋白酶(中性蛋白酶、碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶)水解鲢鱼加工副产物不同时间(0.25、0.5、1、2、3和4 h)得到的水解物性质的差异；以鼠李糖乳杆菌LGG(Lactobacillus rhamnosus LGG)和嗜酸乳杆菌NCFM(Lactobacillus acidophilus NCFM)的生长曲线、比生长速率和菌落总数为指标，研究鲢鱼加工副产物水解物替代MRS(deMan，Rogosa，Sharpe)培养基氮源对益生菌生长繁殖的影响。结果表明:1)木瓜蛋白酶对鲢鱼加工副产物具有更好的水解效果，具体表现为木瓜蛋白酶水解物的氮回收率在各时间点均显著高于中性蛋白酶和碱性蛋白酶水解物(P<0.05)，且木瓜蛋白酶2、3和4 h水解物中相对分子质量<1 000的小分子肽含量显著高于其他水解物(P<0.05)；2)中性蛋白酶1和4 h水解物，碱性蛋白酶2 h水解物，木瓜蛋白酶1和4 h水解物替代MRS培养基75%氮源时，鼠李糖乳杆菌LGG的比生长速率显著高于对照组(MRS培养基)(P<0.05)；3)木瓜蛋白酶1 h水解物替代MRS培养基75%氮源时，嗜酸乳杆菌NCFM的生长曲线、比生长速率、在600 nm的最大吸光度和菌落总数均显著高于对照组(MRS培养基)(P<0.05)。综上，鲢鱼加工副产物经中性蛋白酶、碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶酶解后有望用于替代益生菌培养基氮源，促进益生菌生长繁殖，实现其高值化利用。     

短乳杆菌SLB1000对Ⅱ型糖尿病大鼠的控糖作用

为探索更为安全无副作用的控糖方法,对实验室筛选所得的一株短乳杆菌（Lactobacillus brevis）SLB1000进行体内试验,观察其可能具有的益生效果,以期为益生菌的研究和利用提供依据。以SD大鼠为试验对象,构建Ⅱ型糖尿病模型大鼠。灌胃不同剂量（1×108 CFU/mL和1×1010 CFU/mL）的短乳杆菌SLB1000,定期测定大鼠的体重、空腹血糖、口服葡萄糖耐量（OGTT）,于试验第75天解剖,测定大鼠脏器指数、血清和肝脏中抗氧化相关酶活性。结果表明,短乳杆菌SLB1000延缓了Ⅱ型糖尿病引起的大鼠体重下降,可降低空腹血糖,且呈剂量依赖关系。与模型组对比,高剂量组（1×1010 CFU/mL）可抑制体重下降12.82%,使空腹血糖降低67.21%,达到6.43 mmol/L,肾脏指数和肝脏指数分别降低了20.95%和27.62%,效果好于二甲双胍,有效缓解脏器肥大。短乳杆菌SLB1000还可提高体内超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）和过氧化氢酶（CAT）的活性,有效降低Ⅱ型糖尿病大鼠的血糖水平,显著提高葡萄糖耐受性及抗氧化能力,可见该菌株具有较好的开发潜力。     

果汁牛奶混合型酸奶加工工艺的研究

以优质鲜牛奶为原料，添加胡萝卜、西红柿、芦荟混合果汁，将保加利亚乳酸杆菌及嗜热链球菌以1：1混合作为发酵剂，研制出营养丰富，色泽美观，风味独特的果汁牛奶混合型酸奶。