植物乳杆菌BS22对黄曲霉毒素B1的吸附效果 及对肉鸡消化道菌群的影响

为探明植物乳杆菌BS22对黄曲霉毒素的解毒作用及对肉鸡肠道菌群的影响,设饲料添加不同量的BS22试验(不饲喂)和饲料添加BS22饲喂肉鸡试验。在含有50μg黄曲霉毒素B1(AFB1)的1 kg饲料中加入106、107、108 CFU/g植物乳杆菌BS22,于加入0、15、30 d检测AFB1含量。检测结果:加入BS22后,各组饲料中的AFB1含量均显著下降;同一添加量下,随饲料贮存时间的增加,AFB1含量均有所提高。肉鸡饲喂设3个组:I组(对照组),饲喂基础日粮;II组,饲喂基础日粮+50μg/kg黄曲霉毒素B1;III组,饲喂基础日粮+50μg/kg黄曲霉毒素B1+1.0×108 CFU/g植物乳杆菌BS22。试验期为28 d。采用RCR–DGGE比较4周龄肉鸡嗉囊、腺胃、十二指肠、空肠、回肠及盲肠内容物及黏膜细菌群落的结构。对消化道内容物而言,除回肠外,消化道其他部位的内容物的细菌多样性指数、均匀度和丰富度均是III组的高于II组和对照组;聚类图显示,除腺胃和盲肠外,其他部位均是II组与对照组聚在一起,而III组单独存在。对消化道黏膜而言,除空肠和盲肠外,其他部位的黏膜的细菌多样性指数和丰富度均是II组的均高于III组和对照组,且III组和对照组的细菌多样性指数相近或相同;除回肠和盲肠外,其他部位III组和对照组聚在一起,而试验II组单独存在。综合分析,黄曲霉毒素B1对各肠段内容物菌群的作用不明显,对黏膜菌群有较大影响,尤其是对十二指肠的黏膜菌群影响更明显,植物乳杆菌BS22能调节由于黄曲霉毒素B1引起的肠道黏膜菌群失衡。     

藏猪源唾液乳酸杆菌的分离鉴定及生物学特性研究

【目的】对藏猪粪便中乳酸杆菌进行分离、鉴定及生物学特性研究。【方法】采集不同生长阶段藏猪（仔猪、保育猪、母猪）粪便,通过MRS选择性培养基培养、形态学观察、产酸性能测定、细菌生化鉴定及16S rDNA基因测序技术等方法从中分离、鉴定乳酸杆菌,检测藏猪源乳酸杆菌的生长曲线、耐酸耐胆盐特性、溶血活性、体外抑菌效果、益生基因,并对其进行安全性评估。【结果】从藏猪粪便中分离出48株乳酸杆菌,经16S rDNA基因测序和生物学特性分析,最终得到1株藏猪源唾液乳酸杆菌（Lactobacillus salivarius）,该菌株具有较好的产酸性能,产酸量可达（0.070±0.005） mol/L;对高质量浓度胆盐和低pH具有良好的耐受能力;该菌株中检测到肠菌素P2基因（Ent P2）,无溶血活性;体外抑菌结果显示,藏猪源唾液乳酸杆菌对金黄色葡萄球菌（CMCC 26003）和大肠杆菌（CMCC 44102）具有良好的抑菌效果;15 d小鼠灌胃试验结果显示,小鼠的体质量变化和脏器指数与生理盐水组无显著性差异,未观察到菌血症和细菌移位现象。【结论】筛选得到1株安全无毒副作用的藏猪源唾液乳酸杆菌,该菌具有较好的生物学特性,可作为发酵饲料和防治细菌性肠道疾病的潜在益生菌。     

干酪乳杆菌T1生物特性及保藏方法研究

干酪乳杆菌是一种具有广泛研究价值和良好研究前景的有益微生物。从青藏高原牧区的牦牛酸奶中分离出一株产细菌素的干酪乳杆菌T1(Lactobacillus casei T1)。通过探究菌株基本性质,研究能替代MRS的低成本培养基,筛选冻干保护剂等提高候选生产菌株T1的潜在生产价值。结果显示干酪乳杆菌T1的生长温度区间为20~40℃,耐受的p H值范围为p H2~pH 10。T1菌株对供试革兰阳性细菌和革兰阴性细菌均有较好的抑制作用,对部分供试真菌也有抑制作用,豆粕MRS培养基适应性好。以存活率为指标,进行冻干保护研究的结果表明,供试的4种保护剂的保护效果由大到小依次为乳糖、甘油、甘露醇和抗坏血酸。对候选生产菌株T1生物特性及菌种的保藏研究为该菌的开发打下坚实的理论基础。     

蜡样芽胞杆菌纤维素酶基因的克隆与其在乳酸菌中的表达

全球每年可产生的纤维素数量庞大。为了探索纤维素资源,更为科学合理的利用纤维素类饲料提供理论依据,根据蜡样芽胞杆菌纤维素酶基因序列设计1对特异性引物,扩增纤维素酶(Cell)基因,获得片段大小约为1 269bp的目的基因。该基因与Bacillus cereus B4264、Bacillus cereus G9842纤维素酶基因序列同源性分别达96%和95%。将Cell基因与乳酸乳球菌表达载体pNZ8149进行连接,电转化入乳酸菌NZ3900中,构建纤维素高效分解基因工程乳酸菌,经乳链菌肽(Nisin)诱导表达,SDS-PAGE分析得到分子量大小约为42kDa的目的片段。刚果红平板验证该表达蛋白具有纤维分解活性。FPA法测定表达产物酶活力为0.57U/mL。该基因的成功表达,对纤维素基因工程菌的相关研究具有指导意义。     

自主筛选的植物乳杆菌对酸羊乳品质与功能特性的影响

为改善酸羊乳风味与品质,提高酸羊乳的功能价值,将自浆水中筛选的植物乳杆菌JS5和JS19用于羊乳发酵,研究其对酸羊乳理化性质、质构特性及功能特性的影响。结果表明：2 种植物乳杆菌与商业发酵剂复合发酵后,均能在贮藏期内有效提高酸羊乳持水性和表观黏度,降低其硬度与胶着性,促进乙醛和双乙酰的释放;添加植物乳杆菌JS5的酸羊乳胆固醇降解率显著高于对照组（P＜0.05）,最高可达36.62%;添加植物乳杆菌JS19的酸羊乳体外抗氧化能力更强,贮藏1 d时1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基清除率高达70.58%,铁离子还原/抗氧化能力达32.03 μmol/L。2 种菌株均为适用于羊乳发酵生产的优良菌株。     

德氏乳杆菌特性及应用研究进展

综述了徳氏乳杆菌的生物学特性,生理功能及在食品发酵、饲料工业和医疗保健等领域的应用。     

鱼源植物乳杆菌表达IPNV VP2-VP3重组蛋白及其口服免疫程序

为比较鱼源乳酸菌表达系统口服疫苗在不同免疫程序下诱导鱼免疫应答水平的差异,确定鱼源乳酸菌表达系统口服免疫虹鳟幼鱼的免疫程序。本研究构建了重组表达IPNV VP2-VP3蛋白的鱼源植物乳杆菌L1212,将重组菌pPG612-VP2-VP3/L1212包裹颗粒饲料,口服免疫虹鳟幼鱼。免疫程序分为连续免疫组、免疫1 d后间隔1 d再免疫1 d组、连续免疫4 d后32 d加强免疫1次组和间隔免疫后32 d加强免疫1次组。免疫后进行尾动脉采血,间接ELISA方法检测各组血清抗体效价,免疫接种66 d后,腹腔注射IPNV,计算各组相对免疫保护率。确定颗粒饲料按照1 mL/g比例与108 CFU/mL重组菌pPG612-VP2-VP3/L1212和2.5%海藻酸钠混合,于20℃烘干制备口服疫苗。间隔免疫组血清抗体效价和攻毒保护率均显著高于其他组,并且免疫2次的间隔免疫组的血清抗体效价和攻毒保护率均显著高于免疫1次间隔免疫组。采用重组菌包被颗粒饲料饲喂虹鳟幼鱼,间隔免疫的免疫程序和免疫保护率优于连续免疫的免疫程序,对IPNV的入侵起到保护作用。     

Effect of formic acid and a bacterial inoculant on the amino acid composition of grass silage and on animal performance

An Italian ryegrass and hybrid ryegrass sward was harvested on 11 May 1994. The mean dry‐matter (DM) content of the herbage was 197 g kg^–1 fresh matter (FM), and mean nitrogen and water‐soluble carbohydrate contents were 20 and 272 g kg^–1 DM respectively. Approximately 72% of total nitrogen (TN) was in the form of protein‐nitrogen. The herbage was treated with either no additive, formic acid (3·3 l t^–1) (Add‐F, BP) or inoculant (2·3 l t^–1) (Live‐system, Genus) and ensiled in 100 t silos. Changes in effluent composition with time showed that silage fermentation and protein breakdown were delayed by treatment with formic acid. Formic acid and inoculant treatments also inhibited amino acid catabolism during ensilage. All silages were well fermented at opening with pH values < 4·0 and ammonia‐N concentrations of ≤ 50 g kg^–1 TN after 120 d ensilage. Treatment had an effect on protein breakdown as measured by free amino acid concentration, with values of 21·5, 18·2 and 13·2 mol kg^–1 N at opening (191 d) for untreated, formic acid‐treated and inoculated silages respectively. Amino acid catabolism occurred to the greatest extent in untreated silages with significant decreases in glutamic acid, lysine and arginine, and increases in gamma amino butyric acid and ornithine. The silages were offered ad libitum without concentrate supplementation to thirty‐six Charolais beef steers for a period of 69 d (mean live weight 401 kg). Silage dry‐matter intakes and liveweight gains were significantly (P < 0·05) higher on the treated silages. Silage dry‐matter intakes were 7·42, 8·41 and 8·23 kg d^–1 (s.e.d. 0·27) with liveweight gains of 0·66, 0·94 and 0·89 kg d^–1 (s.e.d. 0·058) for untreated, formic acid‐treated and inoculated silage‐fed cattle respectively. In conclusion, additives increased the intake of silage and liveweight gain by the beef steers, and it is suggested that this may be caused in part by the amino acid balance in these silages.     

干酪乳杆菌作为口服疫苗递呈抗原载体的可行性

通过口服干酪乳杆菌安全性、胃液及胆汁酸耐受能力、肠道定植能力及外源基因在干酪乳杆菌中的遗传稳定性等实验,对干酪乳杆菌作为递呈疫苗抗原活菌载体的可行性进行了研究。结果表明:干酪乳杆菌符合益生菌的标准,可作为递呈疫苗抗原活菌载体。     

鲜牛奶中副干酪乳杆菌隐蔽型质粒pMA3的全序列测定及功能分析

利用乳酸乳杆菌选择性培养基SL,从鲜牛奶中分离一株携带两个天然质粒的副干酪乳杆菌MA3。通过寻找的ScaI对未知小质粒pMA3进行酶切,产物连接载体pBK-CMV进行测序,全序列为5089bp,G＋C含量为39.54%。进一步通过生物信息学分析质粒pMA3,该质粒编码四个开放阅读框,其中Rep3是复制起始蛋白,根据复制蛋白的同源性及其基因上游的连续正向重复序列证明pMA3属于pUCL-287 θ-复制型质粒,该质粒GenBank登陆号为EU255257。该质粒的发现为开发具有自主知识产权的食品级乳酸乳杆菌表达载体奠定基础。