多型FMDV VP1表位嵌入型载体pMG-SLPMultiVP1的构建及其表达产物鉴定

构建出表达载体pMG-SLPMultiVP1,并对其进行双酶切鉴定及PCR鉴定。将阳性重组质粒转入到发酵乳杆菌中进行表达,并对表达产物进行SDS-PAGE、Western blot和IFAT鉴定。多型FMDV VP1表位嵌入的SLPMultiVP1融合基因成功克隆入穿梭质粒pMG36e中,其表达产物大小约为35ku,部分表达产物位于发酵乳杆菌表面。成功构建了一个乳杆菌嵌入型表达载体pMG-SLPMultiVP1,为以发酵乳杆菌为活菌载体的表位疫苗研究奠定了基础。     

Lactobacillus rhamnosus GG SpaC pilin subunit binds to the carbohydrate moieties of intestinal glycoconjugates

Lactobacillus rhamnosus GG (LGG) is a well‐established probiotic strain. The beneficial properties of this strain are partially dependent on its prolonged residence in the gastrointestinal tract, and are likely influenced by its adhesion to the intestinal mucosa. The pilin SpaC subunit, located within the Spa pili structure, is the most well studied LGG adhesion factor. However, the binding epitopes of SpaC remain largely unknown. The aim of this study was to evaluate the binding properties of SpaC to the carbohydrate moieties of intestinal glycoconjugates using a recombinant SpaC protein. In a competitive enzyme‐linked immunosorbent assay, SpaC binding was markedly reduced by addition of purified mucin and the mucin oligosaccharide fraction. Histochemical staining revealed that the binding of SpaC was drastically reduced by periodic acid treatment. Moreover, in the surface plasmon resonance‐based Biacore assay, SpaC bound strongly to the carbohydrate moieties containing β‐galactoside at the non‐reducing terminus of glycolipids. We here provide the first demonstration that SpaC binds to the oligosaccharide chains of mucins, and that the carbohydrate moieties containing β‐galactoside at the non‐reducing termini of glycoconjugates play a crucial role in this binding. Our results demonstrate the importance of carbohydrates of SpaC for mucus interactions.     

黄芪多糖和2株益生菌体外抑菌作用研究

采用吸光度法研究了黄芪多糖在体外对2株益生菌(乳酸菌和芽孢杆菌)和3株致病菌(大肠杆菌、沙门氏菌和金黄色葡萄球菌)的作用,以及2株益生菌对3株致病菌的作用。结果表明:10 mg/L,20 mg/L和40 mg/L的黄芪多糖对2株益生菌均有显著抑制作用(P<0.05),对3株致病菌,除10 mg/L浓度对大肠杆菌作用不显著(P>0.05)外,其余均显著抑制了致病菌生长(P<0.05),且以20 mg/L效果最佳;乳酸菌和芽孢杆菌对3株致病菌均有显著抑制作用(P<0.05)。试验结果显示:黄芪多糖和2株有益菌在体外均能抑制致病菌的生长,且黄芪多糖对2株益生菌存在抑制作用。     

热激法修饰瑞士乳杆菌的参数优化与特性研

采用不同热处理温度(67、70℃)与时间(10、15、20 s)对瑞士乳杆菌(Lactobacillus helveticus)进行热激修饰,研究处理前后与干酪加工相关的菌体特性.同时对热激修饰条件参数进行优化.研究结果表明,菌体经70℃、10 s热激处理后,菌体存活率、动态产酸能力、蛋白水解能力等指标符合热激要求,经修饰后的菌株适宜作为于酪促熟酶源.采用扫描电镜对细菌表面微观结构的观察结果表明.热激处理使菌体形态、膜表面发生明显改变,菌体表面发生萎缩、褶皱与底端溶解等变化.     

猪源发酵乳杆菌的筛选及其潜在益生性能

【目的】对从健康仔猪粪便中筛选分离出一株发酵乳杆菌的益生性能进行测试,为其在畜禽动物养殖中的应用提供参考。【方法】采用Rogosa SL完全选择性培养基分离出106株乳酸菌,通过革兰氏染色、酸和胆盐耐受初步筛选出1株潜在的饲用乳酸菌,经16S rDNA序列鉴定为发酵乳杆菌LF1,并对其益生性能潜力进行评估,包括抑菌活性(针对大肠杆菌K88、金黄色葡萄球菌、猪链球菌、沙门氏菌以及弧菌等12种病原菌)、对模拟胃液中酸性环境的耐受性、对胆盐的耐受性以及对小肠上皮细胞的粘附性。【结果】发酵乳杆菌LF1耐酸和耐胆盐的能力较强,显示出较强的益生菌潜力,但LF1菌株对猪肠道上皮细胞的粘附能力不强。在生物拮抗作用方面,发酵乳杆菌LF1的培养上清可以显著抑制多种常见动物病原菌生长。【结论】发酵乳杆菌LF1具有较好的益生性能,通过进一步的动物实验评估后,可以作为应用于畜禽养殖业的益生菌候选菌株。     

油茶籽提取废液中乳酸菌的分离鉴定与发酵性能

从自然发酵的油茶籽提取废液中发现1种产乳酸的细菌.以一定时间内产乳酸量的多少和耐酸性强弱为指标,经分离纯化、鉴定后初步确定为乳酸杆菌属微小乳杆菌种变种.采用接种量3%,发酵时间48h,发酵温度38℃的发酵条件测试此菌种的发酵产酸量及活菌数,其48h产酸量可达2.02%,生长稳定期活菌密度达1011cfu/mL,为具有工业利用价值的优良乳酸菌种.     

乳酸杆菌LH对水产常用药物的敏感性

采用试管法,以金黄色葡萄球菌ATCC25922为质控菌,研究乳酸杆菌LH菌株对氟苯尼考、土霉素、二氧化氯、二溴海因、强力碘的敏感性。结果显示,在5.0×105cfu/mL时,最小抑菌浓度分别为2μg/mL、4μg/mL、16μg/mL、32μg/mL、32μg/mL,最小杀菌浓度分别为16μg/mL、64μg/mL、128μg/mL、128μg/mL、128μg/mL;最小抑菌浓度随着菌悬液浓度(104~107cfu/mL)的增大而升高;在杀菌曲线中,药物对菌的抑制作用随着作用时间的延长而逐渐减弱。     

表达猪细小病毒VP2蛋白的重组干酪乳杆菌的构建

利用Oligo设计合成一对引物P1、P2,分别含有BamHI和XhoI酶切位点,以猪细小病毒株LJL12的DNA为模板,采用PCR技术扩增VP2基因,克隆到pMD18-TSimple载体,并进行酶切、PCR鉴定和序列测定。将VP2基因分别亚克隆到干酪乳杆菌细胞表面表达型载体pPG1和分泌型表达载体pPG2的BamHI和XhoI酶切位点,电转化干酪乳杆菌Lactobacillus casei393,获得阳性重组菌株。成功构建了猪细小病毒VP2蛋白的干酪乳杆菌表达系统,命名为pPG1-VP2/L.casei393和pPG2-VP2/L.casei393。     

玉米浸泡液中噬淀粉乳杆菌的分离与鉴定

从玉米浸泡液中分离出３株细菌，这些细菌为兼性厌氧，革兰氏阳性，无运动性，不形成芽胞的杆菌，呈单在或短链状排列．无过氧化氢酶．４５℃生长，１５℃不生长，发酵纤维二糖、水杨苷，不发酵阿拉伯糖、棉子糖、鼠李糖，水解淀粉．这些细菌与Ｌ．Ｋ．Ｎａｋａｍｕｒａ（１９８１）所报道的噬淀粉乳杆菌（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓａｍｙｌｏｖｏｒｕｓ）的性状完全一致，证明由玉米制淀粉的过程中有噬淀粉乳杆菌参与．     

乳酸菌对断奶仔猪生产性能及免疫力的影响

为了研究植物源性乳酸菌对断奶仔猪生产性能及免疫功能的影响,选取35日龄左右、断奶后平均个体质量为(7.48±0.23)kg的大长二元杂阉公猪165头,随机分成5个处理组,每个处理组3个重复,每个重复11头,试验期28 d,分别饲喂基础日粮(I组)、基础日粮 金霉素300 mg.kg-1(II组)、基础日粮 乳酸菌10 mL.头-1.d-1(III组)、基础日粮 乳酸菌30 mL.头-1.d-1(IV组)、基础日粮 乳酸菌60 mL.头-1.d-1(V组),结果表明:在断奶仔猪日粮中添加乳酸菌和金霉素能提高仔猪的平均日增质量、降低料增质量比,1~28 d,II、III、IV、V组同I组比较,平均日增质量分别提高了14.8%、8.9%、30.5%和29.6%,料增质量比分别下降了9.6%、7.0%、20.5%和17.9%,1~14和1~28 d的Ⅱ、Ⅳ和Ⅴ组的腹泻率为0,试验得出乳酸菌的最适添加量为30 mL.头-1.d-1;乳酸菌可以提高血清T4和IGF-I的水平;IV组和I组比较:14 d时淋巴细胞转化率显著提高(P<0.05),28 d时有增高的趋势但差异不显著(P>0.05);28 d时血清中IgG显著提高(P<0.05),IgA、IgM有增高的趋势但差异不显著(P>0.05);表明乳酸菌对断奶仔猪的免疫功能有促进作用.