玉米漆酶ZmLac5基因拟南芥遗转转化

旨在模式生物拟南芥中获得玉米漆酶ZmLac5基因过表达转化体,以研究该基因功能。分离玉米自交系掖478根部总RNA,反转录PCR法获得玉米漆酶基因ZmLac5全长,测序与序列分析表明,ZmLac5 cDNA的开放阅读框为1 758 bp,编码一个由586个氨基酸组成的蛋白质。同源性比对和进化树分析显示该基因与高粱Sb03g039570.1和谷子Si000813m在进化上亲缘关系较近。采用In-Fusion试剂盒构建了过表达载体pCUB-Ubi::ZmLac5,通过电击法将过表达载体导入根癌农杆菌LBA4404中,并成功转化拟南芥(Columbia ecotype),获得PCR阳性T1代植株62株,转化率为1.28%,T2代阳性植株60株。本研究为基于模式生物体过表达分析该基因生物学功能奠定了分析基础。     

云芝漆酶对靛蓝废水脱色降解研究

[目的]探讨云芝漆酶对靛蓝废水的脱色净化作用。[方法]首先研究不同温度、pH、靛蓝浓度、HBT添加量、漆酶用量对漆酶/HBT脱色作用的影响,然后分析漆酶和酸性纤维素的酶协同水洗。[结果]当以1-羟基苯并三唑(简称HBT)为介体时,云芝漆酶/HBT对靛蓝作用的动力学参数Km和Vmax分别为0.318 mmol/L和0.035 5 mmol/(L.min)。在温度50℃,pH 4.5,靛蓝浓度100 mg/L,介体HBT用量0.1%,漆酶用量100 IU/L条件下,作用40 min时,靛蓝脱色率高达96.5%。牛仔布生物整理中采用漆酶与酸性纤维素酶协同作用,当漆酶用量为15 000 IU/kg牛仔布时,牛仔布的返沾程度减少85%,同时水洗废水中靛蓝含量减少83.8%。[结论]漆酶在牛仔服的生物整理及染整废水的脱色净化处理中具有良好的应用前景。     

白色金针菇原生质体单核菌系的建立及其遗传特性分析

利用原生质体技术获得的白色金针菇原生质体再生菌株,根据细胞核的分布与数目以及锁状联合的有无,选出25株单核菌株,对峙试验表明,这些单核株分为核基因型不同的两种类型。两种类型的单核株和始发双核菌株的菌落形态、生长速度、胞外漆酶活性和药物抗性等性状指标均有明显差异,表明生成原生质体的过程中,所再生的单核株发生了变化。     

香菇漆酶的纯化及部分性质研究

对香菇漆酶进行了丙酮分级沉降、半透膜透析、DEAE一纤维素及Sephadex G100柱层析纯化,并研究了漆酶的产酶曲线及酶作用最适条件.,结果表明:在该培养条件下,香菇第10天达产酶高峰,峰值酶活为216 U/mL,酶作用的最适pH值为3.6,在pH值3.6～4.6有较强的稳定性.最适酶解温度为30℃,Ba2 、Cu2 对香菇漆酶有激活作用,而Ag 、Fe3 则能明显抑制漆酶活性,其它离子影响相对较小.以邻联甲苯胺为底物的表观Km值为1.68 mmol/L.     

白腐菌混合培养在胞外漆酶分泌上的种属互惠性

香菇、平菇、灵芝既是著名的食用菌 ,也是研究得相当广泛的白腐菌。香菇A3、平菇B2、灵芝KG菌株间两两混合培养 ,在胞外漆酶分泌状况上表现了较好的种属互惠性。研究结果显示 :A3 B2、B2 KG的混合培养体系表现了漆酶峰值提高、峰面积增大的优势 ,其中峰值情况为A3第 12d达 2 0 0单位 /g ,B2第 6d达 6 0 6单位 /g、KG第 10d达 5 76单位 /g ,A3 B2第 8d达 72 8单位 /g、B2 KG第 12d达 2 16 5单位 /g ;A3 KG的混合培养也在后、末期表现优于相应单株纯培养的漆酶状况。实验表明 ,不同种属白腐菌株混合培养对体系的漆酶分泌存在重要影响。     

2种野外采集白腐真菌分离及其产漆酶液体培养基优化

[目的]优化2种野外采集白腐真菌菌丝产漆酶液体培养基。[方法]对2种采集的白腐真菌轮纹韧革菌(Stereum ostrea)和朱红密孔菌(Pycnoporus cinnabarinus)通过分离纯化得到白腐真菌菌丝,应用ABTS法测定其产漆酶活性,研究碳源、氮源、金属阳离子、p H、温度、转速对白腐真菌产漆酶的影响。[结果]轮纹韧革菌最佳培养基是葡萄糖20.00 g、硝酸钾5.00 g、NaH_2PO_45.00 g、Cu SO41.00 g、初始p H 6、温度25℃、转速170 r/min,在第11天其产漆酶活性达到最大,为1.557 U/m L,是PDA液体培养基产漆酶活性的2.7倍。朱红密孔菌最佳培养基是麦芽糖25.00 g、酵母膏5.00 g、NaH_2PO_41.00 g、KCl 2.00 g、初始p H 7、温度30℃、转速200 r/min,在第9天其产漆酶活性达到最大,为1.478 U/m L,是PDA液体培养基产漆酶活性的2.3倍。[结论]筛选出2种野外白腐真菌产漆酶最佳培养基,为漆酶的进一步研究提供了参考。     

杨树幼茎特异表达基因及PsnLAC基因的克隆

利用cDNA-AFLP技术对小黑杨茎、叶基因的差异表达进行分析.结果表明,64对引物组合在茎和叶中共扩增出4 192条带,其中差异条带2 275条.通过对茎中特异表达基因的克隆和测序,获得了4条cDNA序列.经Blast-x比对分析表明,它们分别是类伸展蛋白、漆酶、过氧化物酶和细胞壁相关水解酶.进行RT-PCR分析发现...     

变色栓菌产漆酶培养条件及热激对发酵的影响

[目的]为提高漆酶发酵水平提供一种有效的控制策略。[方法]采用栓菌菌株14001,对其发酵产漆酶条件及热激对漆酶酶活的影响进行研究。[结果]栓菌产酶最适Cu2＋浓度为20mg/L,最适起始pH值为4.5,最适接种量为10%,最适培养温度为25℃,并对发酵过程进行pH控制,其酶活比不进行pH控制的酶活最大能提高30%;热激作用能诱导漆酶相应的mRNA产生,提高漆酶酶活1倍以上。[结论]优化后的培养条件和热激均能提高漆酶的发酵水平。