赤羽病病毒检测方法研究进展

赤羽病是目前对养牛业和养羊业危害较为严重的疫病,在我国已广泛存在,一旦暴发将会给我国畜牧业造成严重的经济损失。迅速、准确的诊断是防制和消灭该病的重要前提。几十年来,赤羽病诊断技术经历了早期的病毒分离鉴定到血清学试验,再到分子生物学检测这一发展过程,正逐渐向着更敏感、更特异、更方便、更经济的方向发展。本文就赤羽病病毒的实验室检测技术研究进展作一综述。     

狂犬病毒中和抗体检测试验中病毒回归试验的重要性

狂犬病毒中和试验的病毒回归试验表明,病毒攻毒液的实际剂量与理论剂量不完全一致.建议在新版<中华人民共和国兽用生物制品质量标准>中增加对病毒攻毒实际剂量范围的规定,以使结果的判定更为合理.     

O型口蹄疫病毒结构蛋白VP1的原核表达与抗原性分析

研究分析了O型口蹄疫病毒(FMDV)结构蛋白VP1与当前猪FMDV疫苗血清的免疫反应性.将VP1基因克隆至原核表达载体pET32c,并在大肠埃希菌BL21中得到了表达,Western blot分析表明该重组蛋白与豚鼠O型FMDV标准阳性血清具有良好免疫反应性.目的蛋白经纯化后用ELISA分析其与猪疫苗血清的免疫反应性,结果显示该重组VP1蛋白(rVP1)只能与部分O型FMDV疫苗血清反应.推测当前使用的不同O型FMDV疫苗毒株在VP1重要中和抗原位点G-H环(134 aa～158 aa)与C末端(200 aa～213 aa)存在较大差异.     

传染性法氏囊病病毒广西分离株血清亚型的确定

应用兔制备的抗传染性法氏囊病病毒(IBDV)高免血清,在鸡胚成纤维细胞(CEF)上对从广西发病鸡群分离的4个IBDV代表性流行毒株和2个常用疫苗株进行交叉中和试验。结果表明6个毒株被分为2个血清亚型;根据试验所得的R值,应用聚类分析法分析了各亚型毒株之间的亲缘关系,结果显示目前在广西流行的IBDV野毒株之间以及其与疫苗株间的抗原性存在一定的差异。研究结果对及时掌握广西IBDV流行毒株的抗原变异并为研制更有效的适合本地使用的IBD疫苗提供了科学依据。     

高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒双重液相基因芯片检测方法的建立

为了实现快速检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)并同步鉴别高致病性PRRSV毒株(HPPRRSV),根据PRRSV囊膜蛋白GP2基因保守序列和HP-PRRSV特有的Nsp2基因区保守序列设计特异扩增引物和杂交探针,通过双重一步法RT-PCR不对称扩增和双重微球杂交反应,建立了双重液相基因芯片方法。对12株PRRSV以及其他12种猪病原体的检测显示,该法能特异性检测12株PRRSV毒株并准确鉴别其中7株HP-PRRSV,与其他病原体无交叉反应;对PRRSV、HP-PRRSV病毒液的检测低限均小于每个反应0.5TCID_(50);其组内、组间检测变异系数均10%;检测55份疑似临床样品并与商品化荧光RTPCR试剂盒比较检测结果,符合率达98.2%(54/55)。研究结果为适应临床快速检测PRRSV提供了一种新的分子生物学检测方法。     

2011年-2013年滨州及其周边地区4种猪病毒性疾病的流行情况分析

通过对滨州及其周边地区2011年-2013年316个场次采集病料进行猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪伪狂犬病病毒与猪圆环病毒2型的检测,并对检测结果进行了统计分析,了解滨州及其周边地区上述4种疫病的流行状况。     

套式反转录—聚合酶链反应检测恙螨及鼠肺内肾综合征出血热病毒RNA

选择覆盖肾综合征出血热病毒（ＨＦＲＳＶ）膜蛋白（ＭＰ）基因的保守区核苷酸序列合成２对引物,采用异硫氰酸胍一步抽提ＲＮＡ,建立了ＲＴ－ＰＣＲ检测鼠体恙螨及游离恙螨体内ＨＦＲＳＶ－ＲＮＡ的方法,扩增产物经凝胶电泳及斑点印迹杂交证实具有特异性。结果显示,ＨＦＲＳＶ抗原阳性鼠体恙螨５０只组、１０只组、游离螨５０只组,ＨＦＲＳＶ抗原阳性鼠肺１０００ｍｇ、５００ｍｇ组经ＲＴ－ＰＣＲ检测为阳性;ＨＦＲＳＶ抗原阳性鼠体恙螨５只组,ＨＦＲＳＶ抗原阴性鼠体恙螨５０只和１０只组,游离螨１０只和５只组,鼠肺ＨＦＲＳＶ抗原阳性１００ｍｇ组均未见有明显扩增带。进一步用套式反转录－聚合酶链反应（ＮｅｓｔｅｄＲＴ－ＰＣＲ）检测,在ＲＴ－ＰＣＲ未测出ＨＦＲＳＶ－ＲＮＡ的各组中均检测有ＨＦＲＳＶ－ＲＮＡ。结果表明ＮｅｓｔｅｄＲＴ－ＰＣＲ具有高特异、高敏感的特点,可用于检测恙螨体内微量ＨＦＲＳＶ－ＲＮＡ,为确认恙螨作为ＨＦＲＳＶ的传播媒介提供了分子生物学证据。     

鸡传染性喉气管炎病毒姻台株gB基因的序列测定及其结构功能分析

研究以鸡传染性喉气管炎病毒（ILTV）烟台株为模板，PCIK扩增出1条约2．7的gB基因片段，并将其克隆到pMD18-T载体中。序列测定显示，gB基因长2622bp，包含完的阅读框架。序列比较分析发现，烟台株和王岗株、河北株的班基因核苷酸序列与SA2株的比均在第89位上缺失1个碱基G，而在第102位核苷酸处插入1个碱基A，从而引起氨基酸序中第29-32位5个氨基酸的移码突变。烟台株还有另外7个碱基发生突变，使得其班基因与北株、王岗株、SA2疫苗株的gB基因核苷酸同源性分别为99．8％、99．7％和99．6％，氨基酸的同性分别为99．4％、99．4％、98．9％，表明不同ILTV毒株之间gB基因是非常保守的。划型相列河源     

Ⅰ型鸭肝炎病毒SH株全基因组序列测定与分析

本研究从上海市某鸭场发病鸭群中分离到1株DHV-1型强毒株,对其进行毒价测定、琼脂扩散试验和动物回归实验,结果显示：按103.41 ELD50/0.2 mL接种1日龄雏鸭,该毒株对雏鸭有明显的致病性,死亡率为60%,肝脏病变率为100%。经全基因组测序显示：该毒株长度为7652 nt,含626 nt的5＇非编码区和314 nt的3＇非编码区,编码一个2249 aa大小的多聚蛋白。根据Blast比对发现,该毒株属于经典的DHV-1A群,与韩国经典强毒株R85952（99.7%）和中国分离强毒株HP-1（99.3%）的同源性最高。     

鸭肝炎病毒VP1蛋白B细胞抗原表位预测及变异分析

以鸭肝炎病毒(DHV)SN株VP1基因序列为基础,运用Garnier-Robson、Chou-Fasman和Karplus-Schulz方法预测VP1蛋白的二级结构,并分别运用Kyte-Doolittle方法、Jameson-Wolf方法和Emini方法预测蛋白的亲水性、抗原指数和表面可及性,最后结合吴玉章的方法综合分析预测其B细胞抗原表位.结果显示,VP1蛋白C端第132～137、177～186、209～219区段有较好的亲水性、表面可及性和较高的抗原指数,并且在二级结构上含有易形成抗原表位的无规则卷曲和β-转角,可能是VP1蛋白的B细胞抗原优势表位;DHV SN株与弱毒疫苗株在推测的VP1 B细胞抗原表位177～186和209～219两个区域氨基酸序列变异较大.