四川省部分地区副猪嗜血杆菌血清学调查

为了解四川省部分地区副猪嗜血杆菌病感染情况,采用副猪嗜血杆菌抗体检测间接血凝2006-2008年,四川省10个不同地区和不同来源的1062份血清样品进行了血清学调查,结果阳性率在2%～30%,平均阳性率为10%;不同日龄猪群阳性率不同,以30～70日龄断奶仔猪多发,达25%.表明:四川省部分地区均存在副猪嗜血杆菌病的不同程度感染,统计结果为四川省有效防制副猪嗜血杆菌病提供了参考依据.     

福建省部分地区副猪嗜血杆菌病的流行病学调查

为了解副猪嗜血杆菌病在福建省的流行情况,通过间接血凝检测方法对福建省部分猪场猪副猪嗜血杆菌病的流行情况进行了调查,结果表明,福建部分地区猪副猪嗜血杆菌病的阳性率为6.5%,其中母猪阳性率偏高,为8.75%。     

副猪嗜血杆菌对猪气管上皮细胞的黏附作用及其黏附模型的建立

为了探讨副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,Hps)与原代培养的猪气管黏膜上皮细胞的相互作用,应用气管支气管结扎灌注酶冷消化法分离气管黏膜上皮细胞,于胶原覆盖的盖玻片上培养,使上皮细胞分化成假复层黏膜纤毛上皮细胞,然后以对数生长期不同Hps含量的菌液感染上皮细胞和猪脐静脉血管内皮细胞,分别作用1、2、34、h后,通过革兰氏染色法观察Hps对细胞的黏附情况。结果表明,Hps可黏附在上皮细胞和内皮细胞表面;Hps对气管上皮细胞有毒性作用,致细胞变性坏死和凋亡;Hps对细胞的黏附力与其在菌液中含量和作用时间有关,以菌落形成单位计,当含量为1.0×108mL-1且感染4 h后,黏附效果最好。高倍显微镜下可见大量Hps黏附于猪气管上皮细胞,只有个别Hps黏附于猪血管内皮细胞表面。说明Hps对猪气管黏膜上皮细胞的黏附能力远强于猪血管内皮细胞,可以利用猪气管黏膜上皮细胞建立副猪嗜血杆菌的黏附细胞模型。     

副猪嗜血杆菌的分离与鉴定

从福建省龙岩市l例临床症状、病理剖检变化疑似副猪嗜血杆菌病的患病猪的关节液中分离到1株革兰氏染色阴性可疑菌株,经卫星现象、生化鉴定等实验室诊断,进一步以副猪嗜血杆菌的16S rRNA基因设计特异性引物进行PCR鉴定,确定该分离菌为副猪嗜血杆菌。药敏试验结果表明,分离株对环丙沙星、卡那霉素、强力霉素、氨苄西林、阿米卡星、庆大霉素药物敏感;对泰妙菌素、诺氟沙星有抵抗力。     

副猪嗜血杆菌病原检测及aroA基因PCR-RFLP分型

本试验应用PCR方法及PCR-RFLP技术对aroA基因在副猪嗜血杆菌病原检测及基因分型中的作用进行探讨。以针对aroA基因的PCR引物成功检测出18株来自广西各地区猪场的副猪嗜血杆菌,敏感性检测结果表明,该PCR方法可检测的最低菌数为10²个。对该18株副猪嗜血杆菌进行aroA基因的序列测定,并进行aroA基因的酶切位点分析,筛选出Hind Ⅲ和FokⅠ两种限制性内切酶,利用PCR-RFLP技术对1株血清5型参考菌株与本研究中18株广西菌株aroA基因的完整编码序列进行Hind Ⅲ和FokⅠ限制酶谱分析,结果显示可分为与毒力相关的3种谱型。本研究结果表明,应用PCR方法及PCR-RFLP技术对副猪嗜血杆菌进行检测分析有助于更好地研究副猪嗜血杆菌的生物学特性及aroA基因的功能。     

浙江地区副猪嗜血杆菌分离株的生物学特性

为明确浙江地区副猪嗜血杆菌(HPS)病的流行特点,提高对该病的免疫防控能力,本研究对HPS分离株进行生物学鉴定。结果表明,HPS在含有2%小牛血清和16μg/mL NAD的TSB培养基中生长良好,在TSB液体培养基中培养16 h～18 h后,活菌数达到峰值;6个分离株对小鼠的LD50分别为2.03×109、5.3×109、1.34×1010、7.0×109、1.17×1010和1.62×109;可在感染HPS豚鼠的心血中分离到该菌;ERIC-PCR指纹图谱分析结果表明,4个分离株与4型、5型和9型标准菌株图谱一致,但有2个分离株与15个血清型标准菌株图谱不吻合。研究提示浙江地区内HPS的散发、流行的原因可能是由于该细菌血清型复杂性造成的。     

副猪嗜血杆菌分离鉴定及药敏试验

副猪嗜血杆菌能够引起猪的多发性浆膜炎、关节炎和脑膜炎等,是影响猪的最重要细菌之一,目前在所有的主要养猪国家均有存在。为了弄清河南省副猪嗜血杆菌病流行情况,2012年-2015年,从河南不同地区猪场送检的疑似病料,进行副猪嗜血杆菌分离和鉴定,共分离到5株细菌,通过细菌形态观察、培养特征鉴定、生化试验、PCR检测,鉴定为副猪嗜血杆菌,分别命名为A6-fei、C3-xin、C12-xin、D2-fei和E1-fei。采用纸片扩散法,对分离5株副猪嗜血杆菌进行药敏试验,其结果表明所分离的5株副猪嗜血杆菌的药物敏感性不尽相同,各分离菌株对头孢噻肟、氟苯尼考星最敏感,对复方新诺明敏感性最差,其中菌株C3-xin对复方新诺明、庆大霉素、卡那霉素、青霉素完全耐药。表明副猪嗜血杆菌病在河南省依然存在,并且不同地区菌株对常用药物的敏感性各不相同,应当引起养猪场重视。     

aroA gene PCR-RFLP diversity patterns in Haemophilus parasuis and Actinobacillus species

The Haemophilus parasuis aroA gene encodes 5-enolpyruvylshikimate-3-phosphate synthase and participates in the aromatic amino acids and the folic acid universal metabolic pathway of bacteria. The application of aroA-based PCR-RFLP methodology yields a significant degree of diversity in H. parasuis and Actinobacillus species. PCR amplification of the aroA gene rendered a 1,067-bp fragment in all 15 H. parasuis serovars, and also in Actinobacillus pleuropneumoniae serotypes 1-12, Actinobacillus lignieresii, Actinobacillus equuli, Actinobacillus porcinus, Actinobacillus rossii, Actinobacillus suis, Actinobacillus ureae, Actinobacillus minor and Actinobacillus indolicus. Sau3AI and RsaI digestions of the aroA PCR products rendered seven different restriction fragment length polymorphism (RFLP) patterns: group I (H. parasuis serovars 1, 2, 4-6, and 8-15, A. porcinus and A. ureae), group II (H. parasuis serovars 3 and 7, and A. pleuropneumoniae serotypes 1, 4, 5, 9, 11 and 12), group III (A. lignieresii), group IV (A. pleuropneumoniae serotype 7), group V (A. pleuropneumoniae serotypes 2, 3, 6 and 8, A. equuli, A. rossii, A. minor and A. indolicus), group VI (A. suis) and group VII (A. pleuropneumoniae serotype 10). This is the first report describing the presence of aroA gene in H. parasuis, A. lignieresii, A. porcinus, A. rossii, A. suis, A. ureae, A. minor and A. indolicus and the data presented here demonstrates a significant degree of aroA genetic diversity in H. parasuis and species of the genus Actinobacillus.     

猪的胸膜肺炎放线杆菌、多杀性巴氏杆菌和副猪嗜血杆菌复合PCR检测方法的建立

在已经建立猪胸膜肺炎放线杆菌(APP)、猪多杀性巴氏杆菌(PM)、副猪嗜血杆菌(HPS)的单项PCR诊断方法的基础上,通过对扩增条件的优化,成功地建立了APP、PM、HPS的复合PCR实验室诊断方法,利用一次PCR反应,即可同时扩增出APP的342bp、PM的457bp和HPS的821bp的特异性片段。该复合PCR能同时检测到100个每种细菌或50pg的APP或HPS的DNA和500pg的PM的DNA。该三重复合PCR的敏感性同已报道的单PCR一致。该方法的建立对临床上进行这3种疾病的鉴别诊断和混合感染的检测都具有重要意义。     

广东部分猪场副猪嗜血杆菌病的流行病学调查

为了解副猪嗜血杆菌病(Haemophilus parasuis,HPS)在广东省部分地区的流行情况,通过针对副猪嗜血杆菌外膜蛋白P2(OMPP2)的间接ELISA法对广东省部分猪场的376份猪血清样本进行了抽样检测。结果显示,副猪嗜血杆菌的阳性率为23.8%,其中母猪阳性率高达31%;保育仔猪为29%,育肥猪为33.6%,育肥猪阳性率显著高于母猪和保育仔猪;冬季(11～1月)副猪嗜血杆菌抗体阳性检出率最高为31.4%、秋季(8～10月份)的阳性检出率最高为18.7%,冬季比秋季高出12.7%,差异极显著(P<0.01)。