铜绿假单胞菌oprH基因DNA疫苗的构建与检测

研究旨在构建铜绿假单胞菌oprH基因的DNA疫苗。试验根据GenBank中已发表的铜绿假单胞菌的oprH基因序列,设计合成了一对特异性引物,利用PCR技术由铜绿假单胞菌基因组DNA中扩增获得该目的基因,进行胶回收纯化并与T载体进行连接,经双酶切和PCR鉴定后将重组质粒进行酶切回收目的基因片段,并将其亚克隆于真核表达载体pCAGGS-HA中,以双酶切和PCR方法进行鉴定。结果显示：PCR成功扩增出约600 bp的oprH基因,连接T载体后的重组质粒经双酶切和PCR鉴定,均可获得大小正确的目的基因片段。真核重组载体鉴定结果显示,oprH基因成功克隆于真核表达载体pCAGGS-HA中。研究表明,试验成功构建了oprH基因的DNA疫苗,为进一步研究其免疫效果及铜绿假单胞菌新型疫苗的研制提供参考。     

杂草稻nrDNA ITS片段的PCR扩增条件优化及测定

对杂草稻的nrDNA ITS片段的PCR扩增条件进行了优化并测定,建立的PCR最优体系为：20μL反应体系含1μL模板DNA,0．125mmoL／L dNTPs,0．5μmol／L正反向引物,1U Taq酶,2．0μL 10×Taq PCR Bufter;退火温度为57℃。这样的条件下充分保证了ITS PCR产物的质量和纯度要求,直接测序结果为600bp左右,与网上结果十分类似,表明结果准确可靠。这些ITS片段的系统学信息将为杂草稻的起源进化提供有力的分子水平证据。     

苦瓜MAP30基因的克隆与载体构建

首先提取苦瓜的基因组DNA,然后根据Genbank中已公开发表的MAP30序列,设计一对特异引物MAP301,MAP302,并增添特异定位于内质网的小肽Kozak序列。采用PCR技术,从苦瓜的基因组DNA中扩增出一分子量为800bp左右的片段,回收克隆测序,结果表明,克隆获得片段与已公开发表的MAP30序列同源性达100%,将阳性克隆进行酶切,获得的目标片段与用同样酶切所获得的植物表达载体pEV1和pEV2大片段连接,酶切鉴定重组子构建成特异表达于果实的载体。     

锦州地区副猪嗜血杆菌病流行情况调查与药敏试验

为了解辽宁省锦州地区副猪嗜血杆菌病流行情况,对37个疑似样本进行分离鉴定。采用多重PCR方法进行血清型鉴定,并对分离菌株进行药敏试验,结果分离到23株副猪嗜血杆菌,分别为血清4型11株,5型6株,1、2、14型各1株,不可分型菌株为3株,对头孢噻肟、氟苯尼考、头孢曲松、阿莫西林、阿米卡星高度敏感。     

基于非洲猪瘟病毒CD2v基因TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立

为用于非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV) CD2v基因功能研究及区分ASFV野毒株和CD2v基因缺失毒株,本研究根据ASFV中国流行株(MK333180.1)的CD2v基因序列设计了1对特异性引物和探针,经过条件优化建立了一种以ASFV CD2v基因为靶标的能够鉴别ASFV野毒...     

如何利用饲料才能减量增效

(一)精细加工 机械加工能减少饲料浪费,改善适口性.粗饲料切短后,便于拌料和咀嚼.精饲料磨碎后,有利于消化液的充分混合.具体细度要求:猪应在1毫米以下,牛羊可在1～2毫米,马和小家畜可在2～4毫米.喂猪用的甘薯叶经浸泡,有利于溶去杂质.发霉的瓜干经浸泡后,能很快溶去有毒物质.瓜干或甘薯面经蒸煮后,可进一步提高适口性,又能使粗纤维膨胀,有利于消化液的渗透.     

食肉性毛皮动物常用饲料

动物性饲料 主要是家畜、家禽、野生动物的肉及其副产品;鱼类及其它水产动物;乳类、蛋类等. 1.肉类饲料.食肉性毛皮动物(水貂、紫貂、狐、艾虎等)几乎能够食用各种动物来源的肉类.     

灵芝提取物对人肝癌SMMC─7721细胞DNA合成的影响

本文以人肝癌ＳＭＭＣ－７７２１细胞为材料，对水溶性灵芝提取物（ＥＧＬ）抗癌作用机理进行了研究。结果表明，ＥＧＬ能明显抑制ＳＭＭＣ－７７２１细胞的ＤＮＡ合成：ＥＧＬ在５０ｕｇ／ｍｌ到３００ｕｇ／ｍｌ范围表现出明显的剂量效应；ＥＧＬ最小有效作用剂量为１００ｕｇ／ｍｌ，最大有效作用剂量为３００ｕｇ／ｍｌ。结果提示ＥＧＬ的抗癌机理主要是通过抑制癌细胞ＤＮＡ合成而起作用的。     

龙眼体胚发生早期miR166初级体的克隆与表达分析

为了解龙眼miR166初级体基因Pri-miR166 S53结构特点及其前体和成熟体在龙眼体胚发生早期的表达模式,采用SMART~(TM) RACE试剂盒和PCR扩增技术克隆龙眼体胚早期miR166基因的初级体(Pri-miR166 S53),确认其转录起始位点,并预测其含有的潜在ORF;利用龙眼基因组数据库提取其启动子序列,预测其含有的顺式作用元件;用实时荧光定量PCR对龙眼体胚发生早期及不同激素处理下的胚性愈伤组织中miR166基因的前体(Pre-miR166 S53)和成熟体(miR166a.2)表达模式进行分析。结果表明:获得长317 bp的Pri-miR166 S53基因初级体序列,对其进行翻译,得到一条长13个氨基酸序列的miPEP(MLCFVDALFLIST)。利用生物信息学软件分析Pri-miR166 S53基因的启动子序列发现,除了具有TATA/CAAT-box外,还含有生长素、脱落酸、乙烯、水杨酸、茉莉酸甲酯及spl、HSE等特异作用元件。实时荧光定量PCR分析表明,在2,4-D调控的龙眼体胚发生早期过程中,从胚性松散型愈伤组织发育到球形胚的过程中,Pri-miR166 S53基因的前体pre-miR166 S53和成熟体miR166a.2都表现为下调趋势;而在无2,4-D调控的龙眼体胚发生早期中,pre-miR166 S53和miR166a.2表达模式不同。此外,pre-miR166S53随ABA和乙烯处理浓度升高呈下调表达,而对不同浓度2,4-D处理无应答;miR166a.2随2,4-D、ABA处理浓度升高呈下调表达,而在乙烯处理下呈上调表达。上述研究结果提示miR166前体和成熟体在对外源激素应答的模式上并不呈简单线性相关,可能存在多层次、多方位的调控。     

江苏某地鸭群中乙型脑炎病毒及其抗体检测

乙型脑炎病毒(JEV)属于黄病毒科黄病毒属,是一种重要的人畜共患病原体。JEV于1924年在日本首次被发现,至今已成为东南亚国家人类健康的主要威胁之一。JEV主要通过蚊媒传播,禽类是JEV的主要扩增宿主之一。本研究为了调查JEV在鸭群的流行情况,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)对江苏省某地部分鸭群进行JEV的血清抗体检测,同时对疑似病例进行了JEV的PCR检测。结果显示,在被检测的20份产蛋种鸭血清样本中JEV抗体阳性率为75%(15/20);PCR检测结果显示,在所检测的19份病死雏鸭样本中,有1份为JEV阳性,2份为JEV弱阳性,20份产蛋种鸭抗凝血样本均为阴性。该项研究结果表明了该地鸭群中存在JEV感染,对当地养殖业构成潜在的威胁,同时提醒需要加强JEV在鸭群中的监测并采取有效的防控措施。