黄羽肉鸡育肥期维生素A、E适宜添加量研究

选体重和脚胫颜色度接近的56日龄黄羽肉鸡共960只,随机分为16个处理组,每处理60只鸡。采用双因子4×4水平的随机试验设计,4个维生素A添加水平(0、5000、10000、20000IU/kg)和4个维生素E添加水平(0、30、60、120IU/kg)。结果表明:在维生素A0～10000IU/kg、维生素E0～60IU/kg范围内,黄羽肉鸡的日增重和饲料报酬逐渐提高;日粮维生素A添加量超过10000IU/kg,血浆中维生素E含量有下降趋势。高水平维生素A(20000IU/kg),升高血浆TBARS值,大剂量维生素E(120IU/kg),提高机体脂质稳定性。日粮添加20000IU/kg维生素A对色素的沉积有抑制作用,随维生素E水平的上升,皮肤的颜色指数呈现上升趋势。维生素A和E含量及其互作对血清新城疫抗体效价有显著影响。综合考虑,黄羽肉鸡育肥期维生素A、E的适宜添加量分别为5000～10000IU/kg,30～60IU/kg。     

黄芩抗鸡大肠杆菌作用的研究

通过体外和体内两种方法研究黄芩抗鸡大肠杆菌作用.通过体外抑菌作用测定黄芩水煎液对鸡大肠杆菌的最小抑菌浓度（MIC）为2.5g/ml;体内抑菌作用通过对7日龄雏鸡的攻毒与治疗试验来研究,体内治疗药物浓度5g/ml可使90%以上雏鸡获得保护,10g/ml可使100%雏鸡获得保护.以上说明黄芩可以对抗鸡大肠杆菌,可以防治鸡的大肠杆菌病.     

西尼罗热病毒RT-PCR检测方法的建立

参考Genebank发表的西尼罗热病毒(West Nile virus，WNV)E糖蛋白基因序列，自行设计合成一对引物，对WNV进行RT—PCR扩增，产物经琼脂糖电泳分析，呈现一条约400bp的条带，将其克隆入pMD18-T—Vector载体中，并进行序列测定，与已发表的WNV基因比较发现，核苷酸的同源性为99．7％，证实为WNV的E基因，通过对样品多次检测，都能扩增出一条约400bp的条带，表明该方法比较稳定。     

复方中草药"毒菌杀"对禽大肠杆菌及鸡白痢沙门氏菌的体外抑菌试验

观察了复方中草药“毒菌杀”的安全性及其对禽大肠杆菌及鸡白痢沙门氏菌的体外抑菌情况。结果发现“毒菌杀”安全性高，组成“毒菌杀”的各单味中药及其合剂对大肠杆菌的最低抑菌浓度MIC(g/mL)分别为板蓝根0．05、穿心莲0．05、黄芪0．025、黄柏0．05、柴胡0．05、生地0．05、甘草0．05、当归0．025，“毒菌杀”方剂为0．05；对沙门氏菌的MIC分别为板蓝根0．05、穿心莲0．025、黄芪0．025、黄柏0．05、柴胡0．025、生地0．05、甘草0．025、当归0．05，“毒菌杀”方剂为0．025；而牛胆汁对这两种致病菌的最低抑菌浓度分别为2％和1％。说明“毒菌杀”方剂对大肠杆菌、沙门氏菌具有明显的抑制作用。     

毒害艾美耳球虫(Eimeria necatrix)广东株微线蛋白-2基因在大肠杆菌的表达

根据克隆的毒害艾美耳球虫(Eimeria necatrix)广东株微线蛋白-2基因(EnMIC-2(Gd))的cDNA序列设计特异性引物，用PCR方法扩增其阅读框架(ORF)后，克隆至质粒表达载体pET-32a( )，成功构建了重组表达质粒pET-32a( )-EnMIC-2。用CaCl2法将其转化至宿主细菌E.cliBL21(DE3)，并用IPTG成功诱导了EnMIC-2重组抗原在大肠杆菌表达。表达的重组蛋白约占菌体总蛋白的10．8％，其相对分子质量约为55000。重组蛋白经SDS-AGE分析后，用E．necatrix(广东株)感染鸡的高免血清进行Western Blotting分析，结果为阳性。     

肉鸡大肠杆菌多价灭活蜂胶苗的研制

从分离鉴定的49株大肠杆菌中筛选出5株致病力强、免疫原性好、具有优势血清型的大肠杆菌作为制苗菌株，经培养灭活后，以蜂胶为佐剂，研制出的肉鸡大肠杆菌多价灭活蜂胶疫苗，使用安全，免疫效果好。用该苗免疫后150d的保护率为100％，无不良反应。该苗4C下保存1年不失效。田间试验结果表明，该苗性能好，免疫后对肉仔鸡、肉种鸡的生产性能无不良影响，鸡群大肠杆菌病的死亡率明显下降。     

猪附红细胞体感染对仔猪猪瘟免疫效果的影响

为探讨猪附红细胞体对仔猪猪瘟免疫效果的影响,本试验利用猪瘟抗体检测ELISA试剂盒,对已注射猪瘟疫苗的69头感染猪附红细胞体的仔猪和31头无猪附红细胞体感染的健康仔猪进行了猪瘟抗体检测。结果表明,感染猪附红细胞体仔猪的猪瘟抗体水平低下,其猪瘟疫苗整体免疫合格率(49·2%)明显低于健康仔猪(93·5%),且显性感染仔猪的免疫合格率(41·6%)明显低于隐性感染仔猪(53·5%)。说明猪附红细胞体严重干扰了猪瘟疫苗的免疫效果,且干扰程度与猪附红细胞体的感染程度呈正相关。     

sikFBA4基因启动子的克隆及低温表达模式分析

天山雪莲生长于常年积雪覆盖高海拔处的高山区域,具有很强的极端低温生境适应能力,属于研究植物低温适应的良好模式植物。前期的研究表明,sikFBA4基因可以显著提高番茄的抗寒能力。为进一步研究sikFBA4基因的耐寒响应模式,以天山雪莲为材料,采用实时荧光定量PCR分析sikFBA4在低温胁迫下的表达模式;利用高效热不对称PCR法(Hi-Tail PCR)克隆sikFBA4启动子序列并进行生物信息学分析。为分析PsikFBA4序列克隆的完整性及转录表达特性,将PsikFBA4与GUS基因融合在烟草中进行瞬时表达。结果表明,sikFBA4在低温胁迫条件下的表达发生瞬时显著上调,并在1 h达到峰值,而后表达下调。通过启动子克隆分析,在PsikFBA4序列-1648 bp位置处具有冷响应元件LTRE;进一步的GUS染色和酶活力测定结果表明,低温能够显著提高GUS基因的表达活性,说明sikFBA4属于低温诱导型基因。SikFBA4基因启动子的克隆、序列分析以及表达分析,为进一步探究雪莲果糖-1,6-二磷酸醛缩酶(sikFBAs)基因的表达与调控机制奠定了基础。     

铺地竹叶片对结球生菜种子发芽及幼苗生长的影响

采用基质盆栽试验,研究了铺地竹(Sasa argenteastriatus E.G.Camus)叶片对结球生菜(Lactucasativa L.var.capitata L.)种子萌发和幼苗生长的影响,结果表明,铺地竹叶片粉末对结球生菜种子的萌发和幼根生长具有一定的抑制作用,随着浓度的增加抑制作用增强,在50～200 g/m2的范围内,幼根抑制率为12.15%～28.91%。在50～100 g/m2的用量下,铺地竹叶片对结球生菜苗长表现为促进生长作用,而在200 g/m2时,则表现为抑制生长作用。施用铺地竹叶片后3 d、6 d、9 d和12 d,结球生菜幼苗的叶绿素含量特别是叶绿素a的含量显著减少,随着基质中叶片粉末浓度的增加,结球生菜叶绿素含量降低,叶绿素a含量高低依次为对照、低浓度处理、中浓度处理、高浓度处理。随着处理后时间的延长,竹叶对结球生菜叶片叶绿素a含量的影响减弱。这个结果进一步验证了自然条件下铺地竹叶片对植物生长的化感效应,说明其具有开发植物源除草剂的潜力,为研究铺地竹叶片中的化感物质提供了佐证。     

表达牛病毒性腹泻病毒E2蛋白的重组乳酸菌的构建及蛋白免疫原性分析

试验旨在构建能表达牛病毒性腹泻病毒（Bovine viral diarrhea virus，BVDV）E2抗原蛋白的重组乳酸乳球菌（Lactococcus lactis），为进一步研制BVDV乳酸菌口服活载体疫苗奠定基础。将BVDV E2基因克隆后测序，根据乳酸乳球菌的密码子偏嗜性进行优化，再将优化的基因片段插入表达载体pNZ8148中，并电转化乳酸乳球菌NZ9000感受态细胞，构建重组乳酸菌pNZ8148-E2/NZ9000，经1 ng/mL乳链菌肽诱导表达后，对菌体物进行了SDS-PAGE和Western blotting分析。将重组乳酸菌pNZ8148-E2/NZ9000口服免疫6~12月龄健康犊牛，在免疫后不同时间点采集血液样品并分离血清，用间接ELISA方法检测抗体水平。结果显示，PCR扩增到了1 149 bp的目的片段，乳酸菌密码子偏嗜性优化后，GC含量从45.28%变为34.30%。重组质粒pNZ8148-E2经酶切鉴定插入片段与预期大小相符，在菌体裂解物中出现大小约42 ku的条带，与预期蛋白大小一致，且该蛋白可与BVDV E2抗体反应。在免疫犊牛的血清中检测到特异性抗BVDV E2蛋白的抗体。本研究结果表明，表达BVDV E2蛋白的重组乳酸菌口服免疫可诱导犊牛产生特异性的体液免疫反应，该重组菌具有较好的免疫原性。