侧脑室注射Leptin对大鼠下丘脑前阿黑皮素mRNA表达的影响

给体重 180～ 2 0 0 g的雌性 SD大鼠侧脑室中注射重组瘦素 (L eptin) 1μg,采用 RT- PCR测定了其下丘脑前阿黑皮素 (POMC) m RNA和 L eptin受体 (OB- R) m RNA的表达水平。结果表明 ,注射重组 L eptin后 ,OB- R基因和 POMC基因表达量均上升 ,与生理盐水注射组、空白对照组相比差异显著 (P<0 .0 5 ,P<0 .0 1)。由此认为 ,L eptin在大鼠下丘脑 POMC的调控功能中起着重要作用     

大豆孢囊线虫4号生理小种侵染大豆根系诱导表达的cDNA分析

大豆孢囊线虫(Heterodera glycines Ichinohe；Soybean Cyst Nematode，SCN)是一种土传的专性内寄生线虫。SCN的二龄幼虫侵入到大豆幼嫩的根组织中，导致大豆根内的细胞变形并与之形成“合胞体”。合胞体在形态上和生理上的变化是SCN直接诱导大豆基因表达的结果。本研究以高抗SCN的灰布支黑豆为材料，用大豆孢囊线虫二龄幼虫直接接种大豆的根系，应用DDRT—PCR技术及RDB(Reversedot—blotting)杂交鉴定，获得6个阳性cDNA克隆，分别是SCN侵染后5天的A32克隆(GenBank登录号为B1173978)；侵染后10天的B12克隆(GenBank登录号为B1173979)、B71克隆(GenBank登录号为B1173980)；侵染后15天的Cll克隆(GenBank登录号为B1173981)、CPl2(GenBank登录号为B1173982)克隆和CP32克隆(GenBank登录号为B1173983)。序列的同源比较表明，6个cDNA均与Shoemaker构建的大豆基因表达库中的cDNA序列有非常高的同源性，证明这些cDNA是大豆基因表达的产物。其中A32克隆的序列与控制拟南芥下胚轴生长的MYB转录因子、营养元素缺失诱导的番茄根的表达文库中的一个cDNA及番茄抗假单胞杆菌表达文库中的一个cDNA有较高的同源性。     

牛GDF-9基因的克隆与组织表达的分析

为了检测牛GDF-9基因mRNA在怀孕期牛生殖系统的表达情况,为GDF-9基因在雌性动物繁殖上的研究提供一定的理论依据。本试验根据GenBank中报道的牛GDF-9基因序列设计引物,从牛卵巢、输卵管、子宫、肾脏中提取RNA,采用RT-PCR技术进行cDNA扩增,扩增产物与载体pGM-T连接,转化大肠杆菌DH5α,筛选阳性克隆,测序。结果表明,已成功克隆的阳性重组子经测序鉴定其片段大小与预期大小完全一致,为264 bp。序列同源性分析比较表明,该cDNA及其推导的氨基酸序列与绵羊GDF-9cDNA和氨基酸序列同源性分别为97%和94%。以-βactin为内参照物,采用RT-PCR技术进行半定量分析,通过检测比较牛GDF-9基因在卵巢、输卵管、子宫、肾脏组织中mRNA的表达情况。结果表明,牛GDF-9基因在卵巢中表达量最高,在输卵管、子宫、肾脏中均有表达,但表达量不高。     

硫酸酯化酵母β-葡聚糖对H1N1猪流感病毒血凝作用和mRNA转录的影响

为研究硫酸酯化酵母β-葡聚糖对流感病毒血凝抑制作用及对mRNA转录的影响,以猪流感病毒A/tianjin/1/TJ2(H1N1)感染MDCK细胞为模型,采用血凝抑制试验(HI)及SYBR Green Real-time PCR方法,探索硫酸酯化酵母β-葡聚糖对流感病毒血凝抑制作用及其对mRNA转录影响。结果显示,硫酸酯化酵母β-葡聚糖在浓度超过1.25 mg/m L时,能对猪流感病毒血凝产生抑制作用,且在5 mg/m L时对猪流感病毒mRNA转录具有抑制作用。因此,硫酸酯化酵母β-葡聚糖具有抑制流感病毒在MDCK细胞复制的作用,其作用机制可能与抑制流感病毒HA靶点及影响mRNA转录有关。     

日粮添加木聚糖酶对肉鸡小肠葡萄糖吸收及其转运载体基因表达影响

156羽1日龄AA肉雏鸡随机分为对照组和试验组，对照组饲以小麦基础日粮，试验组在基础日粮中添加1000mg/kg木聚糖酶，试验期为30d。与对照组相比，试验组4周内平均日增重提高4.81％（P〈0．01），料重比下降5．00％（P〈0．05）；肠系膜静脉血清中葡萄糖的含量提高5．56％（P〈0．05）。采用半定量RT-PCR方法测定十二指肠和空肠黏膜SGLT1 （sodium／glucose cotransporter 1）和GLUT2（glucose transporter 2）mRNA的表达，发现木聚糖酶显著增加十二指肠SGLT1 mRNA的表达，增幅为33．30％（P〈0．05），试验组空肠SGLT1 mRNA的表达量比对照组增加8．21％，但差异不显著（P〉0．05）。木聚糖酶对十二指肠和空肠GLUT2 mRNA表达均无显著影响。提示木聚糖酶主要作用在小肠上段，通过上调SGLT1的表达而影响肉鸡小肠葡萄糖吸收。     

mRNA差异显示法分离与水稻籼粳亚种间杂交稻低温敏感不育性相关的cDNA片段

采用mRNA差异显示法对籼粳亚种间杂交稻亚优2号幼穗发育基因在两种不同温度条件下的表达差异进行了研究。结果发现,对照(正常温度28～30℃)和低温处理(白天24℃、夜晚20℃)的幼穗发育基因在转录水平上存在差异。从获得的35条差异片段中随机选取6条进行克隆测序,结果发现其中有1条片段长为556bp,暂命名为DF9,该片段与水稻第一染色体上一段cDNA序列有99%的同源性;其他5条片段与水稻的EST存在一定的同源性。进一步研究发现,DF9可能编码的产物与一些参与信号传导或能量代谢过程的酶存在不同程度的相似性。推测其与水稻籼粳亚种间杂种低温敏感不育性有关。     

肝窦内皮细胞和枯否细胞中bcl-2和GAPDH mRNA半衰期的测定

通过反转录 PCR( RT- PCR)测定了肝窦内皮细胞和枯否细胞中 bcl- 2和 GAPDH m RNA的半衰期。结果表明 ,在窦内皮细胞中 bcl- 2和 GAPDH m RNA的半衰期分别为 6 .13和大于 2 0 h,在枯否细胞中 bcl- 2和GAPDH m RNA的半衰期分别为 5 .86和 13.74h。     

环境低温对肉鸡肺小动脉壁c-jun mRNA表达的影响

研究环境低温诱发肉鸡肺动脉高压综合征(PHS)过程中肺小动脉壁c-junmRNA的表达变化,从而确定原癌基因c-jun在环境低温诱发肉鸡PHS过程中的参与作用,为肉鸡PHS发生机制的研究提供基础。160只雄性AA商品代肉鸡15日龄随机分为对照组(22±1.5)℃和低温组(11±2)℃。15~50日龄,每周每组随机取6只,做肺组织石蜡切片,应用原位杂交染色法进行c-junmRNA杂交,并结合图像分析法,测定对照组与低温组肉鸡肺小动脉壁原癌基因c-junmRNA的表达情况。1)低温组肉鸡PHS发生率(18.75%)极显著高于对照组(1.25%)(P<0.01);2)低温组肉鸡肺小动脉壁c-junmRNA的表达从22日龄开始较对照组明显增加(P<0.05),从29~50日龄较对照组极显著升高(P<0.01)。说明环境低温明显诱发了肉鸡肺小动脉壁c-junmRNA的表达,且c-junmR-NA的表达参与了环境低温诱发的肉鸡PHS的发生。     

mRNA差异显示技术在分离水稻抗性基因中的应用

mRNA差异显示技术从问世至今,在分离水稻抗性基因中得到了广泛的应用,通过对差异表达基因进行分析,能够进一步阐明水稻的抗性机理.对近年来mRNA差异显示法分离水稻抗性基因的研究做了总结,并从引物改进、PCR退火温度、dNTP浓度的改进、胶浓度的选择、标记方法的改进和差异片段验证方法的改进7个方面对mRNA差异显示技术的优化做了简单阐述.     

仔猪海马结构及其周围皮质内生长抑素mRNA的分布

用原位杂交组织化学法研究了５头仔猪海马结构及其周围皮质内生长抑素ｍＲＮＡ的分布。结果表明生长抑素ｍＲＮＡ主要分布于海马的始层和齿状回的多形层，偶见于海马的辐射层和锥体细胞层，此外，在内溴区和海马旁回内也见到标记细胞，主要位于深层。