马耳它布氏杆菌bp26基因缺失株的构建及鉴定

为了建立马耳他布氏杆菌M5-90株弱毒疫苗株与野生株的鉴别诊断,本研究以bp26基因作为重组靶位点,以M5-90为亲本,利用bp26基因ORF外侧序列作为同源序列,将卡那霉素抗性基因(Kan')整合到细菌基因组中,双交叉重组阳性菌株,经SDS-PAGE和western blot试验表明迁移率约为29 ku的BP26蛋白在亲本菌中表达并可被鼠抗BP26高免血清识别,而突变株M5-90-26反应结果为阴性,表明BP26蛋白在突变疫苗株M5-90-26中未表达.M5-90-26具备从血清学角度区分M5-90-26免疫与野生型布氏杆菌感染,对布氏杆菌病防制、监测及净化具有重要的意义.     

伪狂犬病毒UL14基因缺失突变株的构建及其生物学特性研究

UL14在α-疱疹病毒中相当保守,但其在伪狂犬病毒中的功能尚不清楚。本研究以伪狂犬病毒鄂A株（PRV-Ea）为亲本株,通过同源重组,将编码EGFP的真核表达盒插入到伪狂犬病毒基因组的UL14基因中,PCR检测和荧光观察证实获得了能稳定表达EGFP的UL14插入失活突变株PRV-UL14D。将PRV-UL14D感染IBRS-2细胞,发现该突变株较PRV-Ea野毒株增殖缓慢,而且PRV-UL14D突变株感染细胞后形成的蚀斑也明显小于PRV-Ea野毒株,但在稳定表达UL14的IBRS-2细胞系中,PRV-UL14D与PRV-Ea野毒株的增殖速度、形成的蚀斑大小均无明显差异。进一步将PRV-UL14D感染BALB/c小鼠,发现与相同剂量的PRV-Ea野毒株感染相比,小鼠平均死亡时间明显延缓。上述研究结果表明,UL14并非伪狂犬病毒增殖必需的,但其缺失可延缓病毒增殖,推测UL14可能与病毒粒子在细胞间的扩散有关。     

蜂胶抗肿瘤作用的研究进展

由于蜂胶具有抑制癌细胞生长、抗突变、抗氧化、抗辐射、抗病源微生物和调节机体免疫机能等功能，能够提高机体对环境因子变化的适应性以及阻碍和抑制致癌物或潜在致癌物的产生，在抗肿瘤方面的研究和应用较为广泛。     

3个黄牛品种的myostatin 5''调控区多态与生长性状的相关分析

用PCR-RFLPs方法对南阳牛、秦川牛、郏县红牛3个品种共411个个体的myostatin 5'调控区的单核苷酸多态性(SNPs)进行分析.结果表明,3个品种在myostatin 5'调控区T→A突变以等位基因T为主,仅在郏县红牛中发现1个AA型纯合体,郏县红牛品种显著偏离Hardy-Weinberg平衡状态(P＜0.05),其它品种处于Hardy-Weinberg平衡状态(P＞0.05).对黄牛myostatin 5'调控区T→A突变与南阳牛、秦川牛和郏县红牛生长性状进行相关分析,结果显示,TT型南阳牛6月龄的胸围和胸围指数显著低于TA型个体,TT型南阳牛18月龄的体高显著高于TA型个体(P＜0.05),但基因型对秦川牛和郏县红牛生长性状的效应不显著(P＞0.05).提示在南阳牛的育种实践中应该综合考虑南阳牛生长阶段和所要选择的性状.     

新发现的两个犬黑素皮质素受体-4缺失突变的探讨

目的：克隆犬黑素皮质素受体-4（Melanocortin-4 receptor，MC4R）基因片段，寻找其多态性位点。方法：根据犬、人和鼠等的MC4R基因序列，设计MC4R基因特异PCR引物。提取：本地犬基因组DNA，PCR扩增MC4R基因部分片段，回收纯化，连接载体，转化入感受态细胞，扩大培养。质粒酶切鉴定后，送测序公司测序。结果：本地犬MC4R基因片段有2处A碱基缺失突变。结论：本地犬中存在MC4R基因的多态性。本实验的MC4R两处缺失突变可能影响转录而引起：MC4R基因功能的改变。     

科技

正湖南专家完成猪圆环病毒突变株疫苗研究工作病毒学类国际权威杂志《普通病毒学》(Journal of General Virology)近日报道称,由湖南农业大学动物医学院的研究团队发现,当前全球市场上猪圆环病毒疫苗无法有效应对该病毒突变所引起的病症。目前,该团队已完成新的猪圆环病毒疫苗的研究工作,正处于动物临床实验阶段。     

伪狂犬病病毒鄂A株gG^—／LacZ^＋突变株的构建

以从湖北某猪场分离鉴定的鄂A株为亲本，提取其基因组DNA，克隆含gG基因的SphI/KpnI片段，然后将LacZ基因融合到gG启动子下游，得到重组质粒pUSKZ,将重组质粒与鄂A株基因组共转染PK－15细胞，待细胞完全病变后，在X－gal存在下，作蓝斑筛选纯化。经斑点杂交和PCR扩增证实得到的是基因型为gG^-/LacZ^ 的重组伪狂犬病病毒。     

六例仔猪水肿病的诊治

导致发生猪水肿病的主要病因是溶血性大肠杆菌。大肠杆菌是一种条件菌，在一定条件下才能发病，导致猪水肿病的诱发因素主要有以下几点，一是缺乏矿物质和维生素，主要是硒和多种维生素，特别是我国大部分地区是缺硒地区。二是气候突变，阴雨过后，抵抗力下降。     

绵羊BMP15基因B2突变可视化检测技术的建立

骨形态发生蛋白15（bone morphogenetic protein 15,BMP15）基因突变对绵羊排卵率、产仔数以及繁殖力有很大影响,本研究旨在建立快速可视化检测BMP15基因B2突变的技术。将改良的扩增阻滞突变系统（amplification refractory mutation system,ARMS）与核酸染料SYBR Green Ⅰ结合,针对BMP15基因B2突变设计ARMS特异性引物,使引物下游3'端的最后一个碱基为A,并在下游引物3'端的第3位碱基处设计额外的错配,以提高引物的特异性;经ARMS PCR扩增后,向产物中加入SYBR Green Ⅰ,通过肉眼观察PCR管内的颜色变化来检测BMP15基因的B2突变。经测序发现所采集的样本均为野生型,因此,利用重叠延伸PCR构建BMP15基因B2突变型模板,测序结果显示BMP15基因B2突变型模板构建成功。ARMS PCR结果显示,ARMS特异性引物能够只扩增突变型模板,而不会扩增野生型模板,且扩增效果良好。ARMS PCR扩增后加入SYBR Green Ⅰ发现已知野生型模板与阴性对照一致,呈SYBR Green Ⅰ原始颜色橙黄色,而已知突变型模板呈亮绿色,且色差明显,肉眼可辨。用建立的可视化检测BMP15基因B2突变的技术检测50个小尾寒羊基因组DNA （随机向其中20个样本中加入构建的BMP15基因B2突变型模板）,将可视化检测的突变型样本编号与混合样本时记录的编号对比,结果表明该技术能够准确检测绵羊BMP15基因的B2突变,且准确率高达100%。将构建的BMP15基因B2突变型的模板进行梯度稀释,对本试验可视化检测体系的灵敏度进行检测,发现ARMS可视化检测技术的灵敏度达到0.006 ng/μL。因此,本研究建立的技术能够可视化地检测绵羊BMP15基因B2突变,且准确率高,有望为高繁殖力绵羊的选育提供技术支持。     

冬季养猪几种常见疾病的预防

1流感猪流感病毒是具有高度传染性的呼吸系统传染病,特点为发病急骤。该病的发病率高,各个年龄、性别和品种的猪都有易感性,死亡率在8%左右。初冬及冬末气候突变,易造成猪舍潮湿,猪受寒,加之猪体内寄生虫的侵扰,导致流感病毒与猪流感嗜血杆菌共同作用而致病。病猪和带毒猪是猪流感的传染源,患病猪痊愈后带毒8星期左右。