山羊成纤维生长因子受体（FGFR1）基因的多态性检测

选择与羊同源性较高的牛FGFR1基因组序列（NM_001110207）设计3对特异性引物,采用DNA池PCR直接测序法快速检测黔北麻羊FGFR1基因的多态性,并以内蒙古白绒山羊和关中奶山羊比较,结果表明：在引PCR产物中只有黔北麻羊检测到多态,分别处于外显子5和内含子5的T133C和C211T的碱基突变,而其他2个品种...     

CnAβ基因对大鼠RBL-2H3细胞脱颗粒的影响

过敏是人和养殖动物常见的疾病,而且发生的频率呈现逐渐增加的趋势.为了深入了解过敏反应的机制,本研究利用CRISPR/Cas9基因编辑技术,构建钙调磷酸酶A beta(calcineurin A beta,CnAβ)基因敲除的大鼠RBL-2H3细胞株,并探讨CnAβ基因对RBL-2H3细胞生长及脱颗粒的影响.选取大鼠Cn...     

海豚Prion基因的克隆与序列分析

动物海绵状脑病是一种动物中枢神经系统发生的一系列致命性神经退行性变化的疾病，包括人的新型变异型克雅氏病（v-CJD）、库鲁病（Kuru）等，动物的羊痒病（Scrapie）、牛海绵状脑病（BSE）、鹿慢性消耗性疾病（CWD）等多种疾病。 Prusiner教授提出，该类疾病的感染因子是一种不含有核酸的淀粉样蛋白颗粒，并命名为Prions（Proteinaceous infectious particles）。目前的研究表明，朊蛋白疾病的传播是由于哺乳动物食用了含有Prion蛋白感染因子的饲料而导致发病，如牛食用了含有痒病因子的肉骨粉发生疯牛病。然而，痒病致病因子只能传染给牛，不能传染给人类；但是经过中间宿主牛以后，该致病因子便可以传染给人类。对于这种现象的产生目前还不明确，有专家指出可能与Prion蛋白不同株系基因序列的变化有关。因此对动物海绵状脑病种间屏障的研究具有重要的意义。     

饲粮蛋白质源对断奶仔猪小肠全基因组转录谱的影响

为探讨饲粮蛋白质源影响断奶仔猪小肠发育的分子机制,本试验利用猪全基因组表达谱芯片分析不同蛋白质源饲粮下断奶仔猪（断奶 ０、３、７和 １４ｄ）小肠转录谱,２４头仔公猪随机分为 ２个处理,处理 １采用乳源蛋白质 ３０％替代饲粮总蛋白质,处理 ２采用全植物蛋白质源饲粮。结果表明：１）处理 １获得 ３７０个差异表达基因（Ｐ＜０．０５）,采用序列试验聚类分析,共获得２６个表达模式,其中有 ３个显著表达模式,模式 ５和 １１显著性水平最高（Ｐ＜０．０１）。处理 ２获得 ２６３个差异表达基因（Ｐ＜０．０５）,序列试验聚类分析得到 ２６个表达模式,其中模式 ３和 ２２显著水平最高（Ｐ＜０．０１）。２）基因共表达网络构建和分析一定程度上揭示了不同蛋白质源饲粮对肠道发育的分子调控机制,以及两者之间的差异。通过基因芯片数据,从 ２种蛋白质源饲粮处理下的基因调控网络中筛选出 １２和 ９个具有重要影响和研究价值的基因,以及 ９个在 ２个处理中网络调控地位发生改变的共表达基因。通过基因芯片数据,从 ２种蛋白质源饲粮处理下的基因调控网络中筛选出 １２和 ９个具有重要影响和研究价值的基因,以及 ９个在 ２个处理中网络调控地位发生改变的共表达基因。总之,本试验筛选出了一些在不同饲粮蛋白质源影响断奶仔猪肠道发育和功能过程中可能具有深入研究意义的候选基因。     

基因工程技术在免疫应用中的研究进展

基因工程技术在兽医领域中的免疫应用,为疾病的预防和治疗开辟了新的途径,成为一项新的具有远大发展前景的技术体系。１新一代疫苗─—基因工程疫苗 随着分子生物学和基因工程技术的发展,新一代动物疫苗应运而生。基因工程疫苗的出现解决了常规疫苗在预防畜禽传染病方面许多自身难以克服的缺陷,如弱毒苗由于变异或与野毒株发生基因重组而产生的毒力返强;灭活苗免疫保护期短,存在灭活不当造成疾病传播的问题;有些病原微生物由于变异而产生多种血清型等。１．１基因工程活载体疫苗：活载体疫苗是以活病毒为载体,将致病性病原体的外源…     

用PCR检测副溶血性弧菌耐热溶血素基因

根据副溶血性弧菌的耐热溶血素基因（ｔｄｈ）设计了２对引物，经聚合酶链式反应（ＰＣＲ）检测，所有１８株神奈川试验阳性副溶血性弧菌均呈阳性反应，而６株神奈川试验阴性副溶血性弧菌呈阴性反应，其他９种（３４株）弧菌和８株其他革兰氏阴性菌也呈阴性反应。检测敏感性可达２ＣＦＵ的副溶血性弧菌。     

卵形巴贝斯虫AMA1基因的克隆与原核表达

为了解卵形巴贝斯虫AMA1基因蛋白特性及免疫活性,本试验用卵形巴贝斯虫特异性引物进行PCR扩增,克隆到pGEX-4T-1中构建BoAMA1重组pGEX-4T-1表达载体,经IPTG诱导表达后,进行SDS-PAGE、Western Blot分析。结果显示,克隆的基因片段长1 042 bp,编码347个氨基酸,与GenBank中相应基因序列(KT312793)的同源性为99.8%。SDS-PAGE分析和Western Blot分析表明,BoAMA1蛋白分子质量约为68 ku,具有较好反应原性。本试验为卵形巴贝斯AMA1基因疫苗研究奠定了基础。     

H5亚型禽流感病毒HA基因在重组杆状病毒中的表达及检测

利用杆状病毒表达系统对H5亚型禽流感病毒HA基因在sf9细胞中的表达进行了研究。首先将pUCm—T—H5HA质粒用BamHⅠ及NotⅠ酶切，获得HA基因片段，同时杆状病毒转座载体质粒pFastBacⅠ也用BamHⅠ及NotⅠ酶切，然后用T4DNA连接酶连接，构建了重组质粒pFastBac—H5HA。再将该重组质粒转化DH10Bac感受态细菌，在体内进行重组，并经三重抗性与蓝白斑筛选，得到杆状病毒重组质粒Bacmid—H5HA。将Bacmid—H5HA转染sf9细胞，获得重组杆状病毒，经SDS—PAGE和Western blotting检测表明，HA蛋白在重组杆状病毒中获得表达。     

H5N1亚型禽流感病毒NS1基因的原核表达及其ELISA检测方法的建立

采用RT-PCR技术扩增了禽流感病毒（AIV）A／Goose／HLJ／p46／2003（H5N1）的NSl基因，将其克隆于融合蛋白表达载体pMAL-c2X上，转化DH5α大肠埃希氏菌感受态细胞，经BamHⅠ和HindⅢ双酶切鉴定及序列分析，表明筛选到了重组质粒pc2X-NS1。SDS-PAGE电泳结果显示，重组质粒转化TB1大肠埃希氏菌后，经0．3mmol／L的IPTG诱导，融合蛋白MBP-NS1得到大量表达，融合蛋白以可溶形式存在，分子质量约为67ku。Western-blotting检测结果表明，融合蛋白MBP-NS1能够与H5N1亚型AIV活病毒感染康复鸭血清发生特异性反应，而不能够与H5N1亚型AIV灭活疫苗免疫鸭血清发生反应。试验初步建立了以纯化的融合蛋白MBP-NS1为包被抗原的间接ELISA检测方法，为AIV灭活疫苗免疫家禽与AIV感染家禽的鉴别诊断奠定了基础。     

新兴猪IL-18成熟蛋白基因的克隆与序列分析

根据GenBank上登录的猪白细胞介素18(pIL-18)基因序列，设计了1对特异引物。利用RT-PCR对从3周龄新兴仔猪脾细胞中提取的总RNA进行了扩增，获得了约500bp的片段。将该片段克隆、鉴定、测序，证实已获得了新兴猪IL-18成熟蛋白基因片段，其大小为474bp，编码157个氨基酸，与GenBank上登录的猪IL-18成熟蛋白基因序列完全一致。