豫南地区猪附红细胞体病的调查与分析

2002年6月份以来,信阳市各县区及周边地区继去年同期发生猪附红细胞体病后,再次爆发了以高热、皮肤发红、黄疸、贫血等为主要特征的疾病,导致大批猪只的淘汰和死亡。经诊断,确诊为猪附红细胞体病。     

吉林省延边地区猪附红细胞体病分子流行病学调查

为了解吉林省延边地区近三年猪附红细胞体病感染情况,本试验对不同靶基因建立的PCR方法进行了比较,应用敏感性最好的PCR方法对延边地区5个县市的237头份猪血液样本进行了检测,并对不同地区、年龄段、季节、饲养方式等采集的样本进行了比较。结果显示,延边地区5个县市猪附红细胞体病感染的平均阳性率为23.6%(56/237),统计学分析表明,猪附红细胞体感染率在不同地区、年龄之间差异不显著(P>0.05);而夏秋两季猪附红细胞体感染率显著高于冬春两季(P<0.05);猪附红细胞体病在个体农户饲养方式中的阳性率显著高于规模化养殖方式(P<0.01),说明猪附红细胞体感染受季节、饲养方式等因素的影响较大。本试验为吉林省延边地区猪附红细胞体病的防控提供了科学的理论依据。     

龙井和珲春市牛附红细胞体感染情况调查

采用压滴镜检法和血涂片染色法，检测龙井和珲春地区牛附红细胞体感染情况．共检测21头牛，检出率为100％，比较2种方法，检测出的附红细胞体平均感染率分别为55．25％，58．52％，2个地区附红细胞体的平均感染率分别为66．58％，55．11％；采用压滴镜检法检测，表现临床症状的牛与不表现临床症状的牛的附红细胞体平均感染率比为56．22：29；放养牛与圈养牛的附红细胞体平均感染率比为59．72：8．     

三种中草药提取物对猪附红细胞体的体外药敏试验

研究了骆驼蓬子、常山、狼毒3种中草药提取物体外抑制猪附红细胞体的效果.结果表明:3种中草药提取物的高剂量组(4000μg·mL-1,2000μg·mL-1)5min后均可完全使附红细胞体从红细胞上脱落,红细胞感染率均为0;中剂量组(1000μg·mL-1)5min后可以使部分附红细胞体脱落,红细胞感染率为15%～30%;低剂量组(500μg·mL-1)无明显药效作用,5min后红细胞感染率仍为70%～85%;而对照组红细胞感染率为90%以上.表明猪附红细胞体对3种中草药提取物的中高剂量组较敏感,低剂量组不敏感.     

猪附红细胞体PCR检测方法的建立

 根据已发表的部分猪附红细胞体序列设计了一对特异性引物，通过聚合酶链式反应（PCR）扩增出了一条约936 bp的基因片段，并成功地将该基因克隆于克隆载体PMD18-T，经酶切分析和PCR进一步鉴定后进行序列测定，结果表明，所克隆的目的基因与GenBank中发表的序列一致。并利用特异性引物初步建立了猪附红细胞体病PCR检测技术。     

猪附红细胞体SRP54基因的克隆及真核表达质粒的构建

为了研究猪附红细胞体信号识别颗粒54（SRP54）基因的功能,试验根据GenBank上发表的猪附红细胞体KI₃806全基因组序列（登录号为NC₀15153.1）中信号识别颗粒（SRP）蛋白基因设计合成1对特异性引物,采用PCR方法扩增猪附红细胞体SRP54基因片段,将扩增产物克隆至pMD18-T载体上,重组质粒经PCR和酶切鉴定后测序,并将SRP54基因与pVAXⅠ真核表达载体连接。结果表明:克隆的SRP54基因片段长1 173 bp,与GenBank中原序列同源性为97%,构建的真核表达质粒pVAXⅠ-SRP54经PCR和酶切鉴定正确,为猪附红细胞体SRP54基因的后续研究奠定了基础。     

附红细胞体感染小鼠Thl7细胞的表达

为分析附红细胞体感染后Thl7细胞所发挥的免疫功能。采用RT-PCRTL荧光抗体双标的方法检测小鼠脾脏IL-17的表达变化。结果显示：小鼠感染附红细胞体后,IL-17表达水平显著增高,提示Thl7细胞在附红细胞体感染后发挥了重要的免疫作用,为该病的临床诊断、治疗及预防提供了理论依据。     

Detection of Eperythrozoon wenyoni by PCR assay

The objective of this research was to develop a detection method for Eperythrozoon wenyoni infection using polymerase chain reaction (PCR) assay technique. A pair of primers was designed and synthesized according to the conservative sequence 16S rRNA. The PCR assay was performed with the primers. A 985-bp fragment was amplified by using PCR. The amplified fragments with the expected size were identified by EcoR I restriction digestion. The crossing-reaction, specific-reaction and duplicate-reaction indicated that the PCR method is a specific, sensitive, fast and effective method for diagnosing E. wenyoni infection at group level.     

新疆绵羊附红细胞体四季感染调查

[目的]系统了解新疆绵羊群体中绵羊附红细胞体的感染、流行情况.[方法]实验采用鲜血压片、血涂片染色镜检和PCR方法,检测新疆7个绵羊主要养殖区绵羊血样850份.[结果]新疆绵羊群体中附红细胞体感染率很高,采用鲜血压片、血涂片染色镜检感染率达到97;,PCR检测感染率为75;;一年四季均有感染,季节性流行不明显;区域之间感染率无明显差异;感染强度多为中、轻度感染,而重度感染有两个小高峰,分别在5月到6月和11月到12月.[结论]新疆绵羊群体中绵羊附红细胞体存在严重感染;季节转换和饲草料结构的变化是本病发生的主要诱因.     

重庆荣昌县猪附红细胞体感染情况调查及危险度分析

采用鲜血压片镜检、姬姆萨染色镜捡与基于16SrRNA—PCR检测方法,对重庆市荣昌县部分农户散养和规模养猪场进行猪附红细胞体感染的调查,并进行不同养殖规模下猪附红细胞体感染的危险度分析。结果发现,鲜血压片镜检、姬姆萨染色镜检和PCR法检测猪的附红细胞体感染率分别为61％、67％和76％;农户散养猪附红细胞体感染率（83％）显著高于规模化养猪场（68％）。危险度分析表明,农户散养猪感染附红细胞体的危险度明显高于规模养猪场,养殖规模的差异与猪附红细胞体的感染具有中等的联系强度（OR=2．32;95CI=1．99～2．69）。