青蒿素与柳氮磺吡啶对柔嫩艾美尔球虫感染的疗效观察

为了探讨青蒿素（artemisinin,ART）和柳氮磺吡啶（sulfasalazine,SASP）单独给药与联合给药对鸡球虫病的防治效果。试验选用50只1日龄黄羽肉鸡,正常饲养至1周龄时分为5组,2周龄时除空白组外,ART组、SASP组、ART＋SASP组和感染对照组分别以105个/羽的剂量接种柔嫩艾美尔球虫（Eimeria tenella,E.tenella）孢子化卵囊,各给药组于攻虫前3d开始给药至试验结束。试验结束后对各组的抗球虫指数（anticoccidial index,ACI）、卵囊的孢子化率、血清NO含量、脏器指数及血清生化指标等数据进行统计。结果表明,ART、SASP以及两者联合用药均能显著提高鸡群的ACI,并使卵囊的孢子化率降低,缓解了球虫感染所致的NO水平升高,且联合用药效果更明显。这提示ART与SASP联合应用在E.tenella感染的防治中具有增效作用。各组鸡群之间血清生化参数无显著性差异,说明该2种药物均无明显毒副作用。     

不同地理株及其杂交株柔嫩艾美耳球虫细胞免疫水平研究

本文首先培育了5个不同虫株柔嫩艾美耳球虫(Emeria tenella):3个不同地理株吉林株[J]、山东株[S]、黑龙江株[H]和2个杂交株F1(山东株×黑龙江株)、F2(F1×吉林株).将300只AA肉鸡鸡雏随机分成6组,每组50只,12日龄时分别用不同株柔嫩艾美耳球虫进行免疫,首免剂量为1 × 104卵囊.24日龄时攻虫,剂量为1×104卵囊.攻虫后10日龄时翼下静脉采血1 mL检测学液中的CD4 ,CD8 的数量,以此判断柔嫩艾美耳球虫的细胞免疫功能,结果证明:杂交株柔嫩艾美耳球虫CD4 ,CD8 的数量远远高于其它组,F2组更高.各组的CD4 ,CD8 的数量依次为F2＞F1＞S＞H＞J. CD4 ,CD8 的数量的比值也不同.即各组的细胞免疫功能不同,从数值上反应出,F2株细胞免疫水平最高,其次是F1,再次是山东株,黑龙江株和吉林株最低.     

3种药物对河北秦皇岛鸡球虫分离株的疗效试验

85只海兰褐蛋公雏随机均分为5组,每组17只,于14日龄,除白对照组外,每只鸡接种1.2×105个河北秦皇岛柔嫩艾美耳球虫卵囊,同时选择球敌(0.2 mL/L)、力克球(0.5 g/L)和氨丙啉(0.6 g/L)3种常用抗球虫药,通过饮水给药的方式,观察了其对球虫的疗效,试验期为9 d。结果表明,球敌和氨丙啉的抗球虫指数(AC I)分别为186.63和181.62,属高效抗球虫药,其中球敌促生长作用显著,整个试验期内的增重分别比红对照组、白对照组、力克球组和氨丙啉组提高65.16%(P<0.01)、6.63%(P>0.05)、28.59%(P<0.01)和13.31%(P>0.05)。而氨丙啉抑制卵囊繁殖和减轻肠道病变的效果明显,但连续应用,对后期鸡的增重有抑制作用。力克球的AC I为157.77,判为低效抗球虫药。3种药物对Hb含量和脾脏、胸腺及法氏囊相对质量无显著影响。     

毒害艾美球虫纯种分离的初步鉴定和致病性研究

采用从寄生部位分离和单卵囊感染技术,对现场采集的鸡球虫混合种进行单种纯化,获得了毒害艾美球虫(Eimeria necatrix)。该种卵囊呈卵圆形,经测240个卵囊,平均为19.06±1.54×16.50±1.26 μm,形状指数1.16。测120个孢子囊,平均为11.27±0.70×6.21±0.51μm。无卵囊残体和孢子囊残体,未观察到卵膜孔和极帽。最短孢予化时间为19小时,感染后最早排出时间143小时,最大裂殖体68.75×66.25μm。用此卵囊1万、5万、10万和20万个分别感染10日龄伊莎公鸡,结果感染5～20万个卵囊组的死亡率为41.67～50.00％,感染组的肠道病变记分为1.33、3.42、3.67和3.83,其平均增重与不感染对照组差异极显著(P<0.01)。E.necatrix对鸡致病性很强,在生产上需高度重视,做好预防工作。     

柔嫩艾美耳球虫对盐酸氟乙基硫胺素耐药性的诱导

为评估盐酸氟乙基硫胺素产生抗药性的倾向,采用药物浓度递增法,在实验条件下进行柔嫩艾美耳球虫耐药性的诱导研究。每组动物用10只快大黄肉鸡,每只鸡接种1×105个孢子化卵囊,以50 mg/kg盐酸氨丙啉和盐酸氟乙基硫胺素为起始诱导浓度连续传代,以病变记分、存活率和卵囊数三项指标综合判定耐药性。经过10次传代,盐酸氨丙啉对敏感虫株的ACI为192.6,而对耐药虫株的ACI为109.1;经过12次传代,盐酸氟乙基硫胺素对敏感虫株的ACI为197.5,而对耐药虫株的ACI为110.6,对盐酸氨丙啉耐药虫株的ACI为163.2;结果表明成功地诱导出对盐酸氨丙啉、盐酸氟乙基硫胺素完全耐药的虫株。盐酸氟乙基硫胺素产生耐药速度慢于盐酸氨丙啉,与盐酸氨丙啉有部分交叉耐药性。     

利用BiFC技术研究柔嫩艾美耳球虫顶膜抗原1结构域Ⅰ与棒状体颈部蛋白2互作关系

为了验证柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)顶膜抗原1结构域Ⅰ(apical membrance antigen 1 domain I,E tAMA1-DⅠ)与棒状体颈部蛋白2(rhoptry neck protein 2,EtRON2)的互作关系,以柔嫩艾美耳球虫子孢子cDNA为模板,PCR扩增出492 bp的E tAMA1-DⅠ片段和1395 bp的E tRON2片段,并与pGEM-T-easy载体连接构建相应重组质粒。获得的阳性重组质粒及双分子荧光互补技术的真核表达载体pBiFC-VN155和pBiFC-VC155用E c oRⅠ和B g I II进行双酶切,将E tAMA1-DⅠ、E tRON2分别与pBiFC-VN155、pBiFC-VC155连接,构建真核重组质粒pBiFC-VN155-E tAMA1-DⅠ和pBiFC-VC155-E tRON2。将2个真核重组质粒分别转染BHK细胞进行表达,经间接免疫荧光鉴定,可在BHK细胞中成功表达。将2个真核重组质粒共转染至BHK细胞中,同时将pBiFC-bJunVN155和pBiFC-bFos(deltaZIP)VC155、pBiFC-bJunVN155和pBiFC-bFos(delta)VC155共转染至细胞中分别作为阳性和阴性对照组。BiFC结果发现真核重组质粒共转染组和阳性对照组的BHK细胞均产生绿色荧光,而阴性对照组无荧光,表明E tAMA1-DⅠ与E tRON2蛋白之间存在互作关系。本研究结果为深入研究E tAMA1及E tRON2在球虫入侵过程中的功能与作用机制奠定基础。     

紫茎泽兰处理鸡柔嫩艾美耳球虫后差异基因筛选和分析

为获得紫茎泽兰处理鸡柔嫩艾美耳球虫后差异基因,将0.5%紫茎泽兰提取液作用于鸡柔嫩艾美耳球虫卵囊孢子化过程,采用抑制消减杂交技术（SSH）筛选处理后卵囊的差异表达基因,通过GO和COG功能预测分析,并采用实时荧光定量PCR验证差异表达的基因。结果显示,采用SSH成功构建了紫茎泽兰处理前后鸡柔嫩艾美耳球虫卵囊的cDNA消减文库,获得86条ESTs序列,经拼接和聚类后得到31条独立基因（Unigenes）,其中有23个基因有功能注释,8个基因没有功能注释,另外有4个基因没有同源性匹配。为进一步验证文库的特异性,从中随机选取3个差异表达基因,运用实时荧光定量PCR技术验证表面抗原13、3-羟酰辅酶A脱氢酶和细胞色素P450基因在紫茎泽兰处理前后的表达差异,结果显示,3个基因在经紫茎泽兰处理的鸡球虫孢子化卵囊中的表达量明显低于未处理组,说明紫茎泽兰对柔嫩艾美耳球虫卵囊具有一定的活性抑制作用。本试验获取了紫茎泽兰作用柔嫩艾美耳球虫卵囊的主要调控基因,为将紫茎泽兰研发成环境杀虫剂奠定了良好的理论基础,也可为球虫致弱疫苗或基因缺失疫苗的靶标筛选研究提供参考。     

青蒿散抗鸡球虫药效研究

为探讨青蒿散对鸡柔嫩艾美耳球虫（E.tenella）的防治效果,本试验选取90只健康黄羽肉鸡,分为6组,除空白对照组外,其余各组（感染对照组、药物对照组及青蒿散低、中、高剂量组）试验鸡均经口感染6×10⁴个柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊,各试验组在接种前一天开始用药至试验结束。记录各组试验鸡的眼观病变、组织病理学检查、相对增重率、盲肠病变记分、血便记分、每克粪便中的卵囊数（OPG）、卵囊值及抗球虫指数（ACI）指标,评价青蒿散不同给药浓度的抗球虫效果。结果显示,空白对照组、感染对照组、药物对照组及青蒿散低、中、高剂量组的抗球虫指数分别为200.00、72.23、157.19、82.89、125.32和137.06,与感染对照组相比,药物对照组和青蒿散各剂量组的眼观病变、组织病理学检查均有所缓解,青蒿散能减轻病鸡盲肠的肿胀和出血等症状,且病鸡精神状态较感染对照组好;与感染对照组相比,各给药组的平均增重均有所升高,盲肠病变、卵囊值及血便情况减少。综上所述,青蒿散能缓解柔嫩艾美耳球虫侵染鸡盲肠所致的病理症状和组织病变,减少粪便中卵囊的排出数量,有一定的抗球虫效果,且给药浓度越高抗球虫效果越好,具有剂量依赖性。     

柔嫩艾美耳球虫长春株克隆的建立

从柔嫩艾美耳球虫长春株(由单卵囊接种建立)挑选出单孢子囊,制备成单孢子囊胶囊,给鸡接种后建立5个克隆,传代后提取DNA,用已筛选的13条随机引物进行PCR扩增。结果表明:每个克隆均获得RAPD图谱,有特异条带。5个克隆中C2和C3相似值为0.993 1,C4和C5相似值为0.992 7,C1与C2和C4的相似值分别为0.931 6和0.875 3。鉴别结果表明C1为1个克隆,C2和C3为1个克隆,C4和C5为1个克隆,说明柔嫩艾美耳球虫卵囊中的4个孢子囊的基因组成不一致。     

复方中药制剂“球宁”对感染柔嫩艾美耳球虫雏鸡血浆SOD、MDA含量的影响

用青蒿、常山等组成复方中药制剂“球宁”,并对其进行超微粉碎加工成微粉制剂。按不同比例添加于饲料中,饲喂人工感染柔嫩艾美耳球虫(Eim eria tenella)的雏鸡,以磺胺喹啉钠为对照,在感染后第8天扑杀,检测血浆中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)的含量。结果表明,“球宁”用药各组与阳性对照组相比均能增加雏鸡血浆SOD含量,降低血浆MDA含量。说明所试中药可以增加机体清除自由基的能力,减少自由基对机体的损伤,从而保护机体。