6株肠艾美耳球虫繁殖力的比较研究

[目的]为肠艾美耳球虫的早熟选育及兔球虫疫苗的研制提供理论依据。[方法]采用6个不同地区肠艾美耳球虫的孢子化卵囊经口接种45日龄无球虫兔,接种剂量为1×104个卵囊/只,并对6株肠艾美耳球虫的繁殖力进行比较。[结果]衡水株排卵量最多,张家口株次之,胶南株排卵量最少。睢宁株的排卵量接近胶南株,如皋株、通江株相近,在感染后第8.5～9天均有排卵,各虫株的排卵高峰期相似,第13天排卵量达到峰值,第21天接近0。[结论]不同地理株肠艾美耳球虫的排卵量不同,但排卵高峰相一致。     

柔嫩艾美耳球虫棒状体颈部蛋白2基因真核表达载体的构建及在293T细胞中表达

为构建柔嫩艾美耳球虫棒状体颈部蛋白2(Eimeria tenella rhoptry neck protein 2,EtRON2)基因的重组质粒pCAGGS-EtRON2,并转染293T细胞进行表达,以柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊cDNA为模板,经PCR扩增其核心编码区的一部分,将其克隆至pGEM-Teasy载体,构建pGEM-Teasy-EtRON2质粒,双酶切出目的片段后与相应酶切的真核表达载体pCAGGS连接,构建真核表达质粒pCAGGS-EtRON2。该重组质粒经酶切和测序鉴定后转染293T细胞进行表达,分别用免疫印迹和间接免疫荧光鉴定EtRON2基因的表达情况。所构建的真核表达质粒pCAGGS-EtRON2经过双酶切鉴定,可见一条大小约为1172 bp的目的条带,测序结果与GenBank所登录序列完全一致;免疫印迹实验可见大小约为43 kDa的目的蛋白条带,间接免疫荧光实验可以检测到特异性红色荧光。研究结果表明已成功构建了EtRON2的真核表达质粒pCAGGS-EtRON2,并在真核细胞中获得表达,为深入研究EtRON2的生物学功能奠定了基础。     

斯氏艾美耳球虫ADF基因部分序列的克隆与分析

为了获得我国斯氏艾美耳球虫长春株ADF基因并分析其与柔嫩艾美耳球虫长春株相应序列的同源性,试验根据GenBank中公布的柔嫩艾美耳球虫ADF基因序列设计引物,采用RT-PCR方法获得我国斯氏艾美耳球虫长春株ADF基因部分序列,然后将其克隆到pMD18-T载体中,应用DNAStar软件对测得序列进行序列分析。结果表明:斯氏艾美耳球虫长春株ADF基因大小为357 bp;经DNAStar分析,我国斯氏艾美耳球虫长春株与柔嫩艾美耳球虫长春株ADF核苷酸序列和氨基酸序列同源性均为99.2%。说明ADF基因在进化过程中高度保守。     

ADF-IL-2基因重组卡介苗的构建及免疫保护效果

构建柔嫩艾美尔球虫ADF基因和鸡IL-2基因的重组卡介苗,并研究其免疫保护性.将柔嫩艾美尔球虫的ADF基因和鸡的IL-2基因串联后连接到至穿梭表达载体pMV261和整合表达载体pMV361中电转化卡介苗,制备重组卡介苗pMV261-ADF-IL-2和pMV361-ADF-IL-2,将构建的基因重组卡介苗分别以不同免疫途径接种雏鸡,研究其对柔嫩艾美耳球虫的攻毒的免疫保护效果.结果显示,成功构建重组rBCG pMV261-ADF-IL-2和pMV361-ADF-IL-2,且rBCG滴鼻免疫组的免疫效果较好,其抗球虫指数分别为176.08和172.89.结果表明,构建的基因重组卡介苗pMV261-ADF-IL-2和pMV3 61-ADF-IL-2对柔嫩艾美尔球虫卵囊的攻击具有一定的保护作用.     

常山提取物对人工感染鸡柔嫩艾美耳球虫病疗效的观察

为了探讨常山提取物对鸡球虫病的治疗效果,通过人工感染鸡柔嫩艾美耳球虫后在饲料中添加一定比例的药物,试验设常山提取物组(分别为200、100、50 mg/kg饲料)、鸡球虫散组(300 mg/kg饲料)、地克珠利组(1 mg/kg饲料)、感染对照组和健康对照组.结果显示,与感染对照组比较,所有给药组试验鸡盲肠和十二指肠肿胀明显减轻,血液性内容物明显减少,抗球虫指数分别为171.98、169.18、169.01、163.84和166.74,均达到中等抗球虫水平.结果表明,常山提取物具有良好的抗球虫效果,且作为一类中药组分,具有绿色环保、低毒低残留的特点,有望成为新型抗球虫药物.     

柔嫩艾美耳球虫早熟株的初步选育及免疫原性的测定

为选育柔嫩艾美耳球虫的早熟株和了解其免疫原性,本试验通过鸡体的传代培养,初步得到了柔嫩艾美耳球虫早熟株P9。以早熟株免疫雏鸡后,以亲本株P0半数致死量攻毒,以确定其免疫原性。结果表明:P9的潜隐期由P0的141h缩短至131.5h,免疫后攻毒显示该早熟株具有良好的免疫原性。     

几种抗球虫药对鸡柔嫩艾美耳球虫病疗效的对比分析

为研究目前各种球虫药的抗药性提供参考,对试验鸡群混饲给药、自由采食,采用人工感染方式进行试验,设立药物组和对照组。药物组分成5组,受试药物添加剂包括1%海南霉素钠预混剂、12%盐霉素预混剂、20%莫能菌素预混剂、25%尼卡巴嗪预混剂、0.5%地克珠利预混剂。通过显示,这五种抗球虫药对鸡柔嫩艾美耳球虫都有效,其中以海南霉素的MIC值最高,敏感性最好,其次是莫能菌素、尼卡巴嗪。     

柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)BJ株SO7基因的克隆和序列分析

对柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)BJ 株 SO7基因进行了克隆和测序分析。以纯化的 E.tenella BJ 株7h 孢子化卵囊的总 RNA 为模板,应用 RNA 反转录酶(M-MLV)合成 cDNA,再用 Taq DNA 聚合酶进行PCR 扩增出 BJ 株 SO7基因.用常规基因克隆方法把 BJ 株 SO7基因插入 pGEM-T 克隆载体,选取正方向插入子的一个阳性克隆进行酶切分析及插入片段的全序列测序分析。结果表明:该序列全长862个核苷酸,有一个开放性读框(65～713nt),可编码216个氨基酸(22.4kD)。SO7-BJ 与国外株 SO7比较,同源性为99%,突变的8个核苷酸中,4个为有义突变.开放性读框中有仅2个核苷酸突变,其中1个为有义突变,使推测氨基酸 Cly 变为 Cys。     

柯氏艾美耳球虫发育史的研究

柯氏艾美耳球虫的内生发育包括２代无性繁殖和１代有性繁殖,第１代裂殖生殖阶段的时间为感染后至４８ｈ,第２代裂殖生殖阶段的时间为感染后４８￣８４ｈ,配子生殖阶段始于感染后７６ｈ。感染后９０￣１３８ｈ在肠绒毛中发现成熟的配子体,感染后９６ｈ在回肠肠腺中发现卵囊,至１３８ｈ仍可见。最短孢子化时间为９￣１２ｈ。柯氏艾美耳球虫的宿主特异性强,不感染虎皮鹦鹉、八哥、鹌鹑和雏鸡。