柔嫩艾美耳球虫含HD结构域蛋白特性和功能初步研究

鸡球虫病是由艾美耳球虫引起的一种危害严重的肠道寄生虫病,每年都会给世界各地的养禽业带来巨大的经济损失。目前,该病主要依靠抗球虫药物进行防治,但由于药物的长期及不合理使用导致鸡球虫几乎对所有使用过的抗球虫药均产生耐药性。为研究球虫耐药性产生的分子机制,本实验室前期对柔嫩艾美耳球虫地克珠利耐药株、马杜拉霉素耐药株以及敏感株进行了转录组测序并获得了敏感株与耐药株的差异表达基因,发现柔嫩艾美耳球虫含HD域蛋白（EtHDCP）在耐药株中上调表达。本研究以柔嫩艾美耳球虫敏感株孢子化卵囊cDNA第一链为模板,成功克隆出EtHDCP基因,构建了原核表达重组质粒pGEX-4T-EtHDCP,并成功诱导表达了重组蛋白rEtHDCP。利用qRT-PCR和Western blot对柔嫩艾美耳球虫敏感株不同发育阶段的转录和翻译水平进行分析,结果显示,EtHDCP在第二代裂殖子的转录和翻译水平高于其他三个阶段（未孢子化卵囊、孢子化卵囊和子孢子）。同时利用Western blot分析了EtHDCP在柔嫩艾美耳球虫敏感株、地克珠利耐药株、马杜拉霉素耐药株中的翻译水平,结果显示,EtHDCP在耐药株中的蛋白翻译水平显著高于敏感株。间接免疫荧光定位结果显示,该蛋白主要定位在子孢子和裂殖子的表面以及裂殖子的胞质内。入侵抑制试验表明,抗rEtHDCP多克隆抗体可有效抑制子孢子对宿主细胞的入侵。这些结果说明该蛋白可能参与了虫体在宿主细胞内的生长发育、耐药性的产生以及子孢子入侵宿主细胞的过程。     

Effects of Artemisia annua and Foeniculum vulgare on chickens highly infected with Eimeria tenella (Phylum Apicomplexa)

Background

Intensive poultry production systems depend on chemoprophylaxis with anticoccidial drugs to combat infection. A floor-pen study was conducted to evaluate the anticoccidial effect of Artemisia annua and Foeniculum vulgare on Eimeria tenella infection. Five experimental groups were established: negative control (untreated, unchallenged); positive control (untreated, challenged); a group medicated with 125 ppm lasalocid and challenged; a group medicated with A. annua leaf powder at 1.5% in feed and challenged; and a group treated with the mixed oils of A. annua and Foeniculum vulgare in equal parts, 7.5% in water and challenged. The effects of A. annua and oil extract of A. annua + F. vulgare on E. tenella infection were assessed by clinical signs, mortality, fecal oocyst output, faeces, lesion score, weight gain, and feed conversion.

Results

Clinical signs were noticed only in three chickens from the lasalocid group, six from the A. annua group, and nine from the A. annua + F. vulgare group, but were present in 19 infected chickens from the positive control group. Bloody diarrhea was registered in only two chickens from A. annua group, but in 17 chickens from the positive control group. Mortality also occurred in the positive control group (7/20). Chickens treated with A. annua had a significant reduction in faecal oocysts (95.6%; P = 0.027) and in lesion score (56.3%; P = 0.005) when compared to the positive control. At the end of experiment, chickens treated with A. annua leaf powder had the highest body weight gain (68.2 g/day), after the negative control group, and the best feed conversion (1.85) among all experimental groups.

Conclusions

Our results suggest that A. annua leaf powder (Aa-p), at 1.5% of the daily diet post-infection, can be a valuable alternative for synthetic coccidiostats, such as lasalocid.     

雏鸡感染柔嫩艾美耳球虫后脂质过氧化物的变化

为了探讨柔嫩艾美耳球虫 (E.tenella)对感染雏鸡的损伤机制 ,本试验给 10日龄海兰白公雏鸡口服柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊 8× 10 4个 /只 ,在感染后 2、4、6、7、9、12、16和 2 1d分别各取 5只雏鸡剖检 ,取盲肠并采血 ,观察盲肠病理组织学变化 ,测定盲肠组织及血清中的丙二醛 (MDA )、超氧化物歧化酶 (SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH- Px)的水平。结果表明 ,雏鸡在感染 E.tenella后 2～ 4d,盲肠开始出现损伤 ,同时 SOD和 GSH- Px活性也开始下降 ;感染后 4～ 7d,盲肠粘膜上皮和肠腺上皮细胞大量变性、坏死崩解 ,发生严重损伤时 ,盲肠及血清中 MDA含量显著增加 ,并持续到 9d,同时 SOD和 GSH- Px活性也显著下降 ;感染 9d后 ,损伤的盲肠组织及 MDA、SOD和 GSH- Px水平逐渐恢复 ,至 2 1d基本达到正常     

免疫调节剂对球虫感染鸡的免疫学指标的影响

为探讨免疫调节剂对鸡球虫病的免疫反应调节作用 ,设计并进行了免疫调节剂对球虫感染鸡的免疫学指标影响的研究。测定指标包括 :淋巴细胞玫瑰花环细胞形成率 ,淋巴细胞转化率 ,红细胞免疫复合物花环形成率 ,红细胞 C3b受体花环形成率 ,脾脏重 /体重相对重 ;血清中 Ig G,Ig M,Ig A的 EL ISA P/ N值。结果各项免疫学指标的差异显著。表明胸腺素、黄芪多糖和卡介苗等免疫调节剂可提高球虫感染鸡的淋巴细胞玫瑰花形成率、淋巴细胞转化率。     

复方中药制剂“球宁”对感染柔嫩艾美耳球虫雏鸡红细胞免疫功能的影响

用青蒿、常山等组成复方中药制剂“球宁”,并对其进行超微粉碎加工成微粉制剂。按不同比例添加与饲料中,饲喂人工感染柔嫩艾美耳球虫的雏鸡,以磺胺喹啉钠为对照,在感染后8d剖杀,检测血浆中红细胞C3b受体(RBC-CR1)花环率和免疫复合物(RBC-IC)花环率,以观察“球宁”及其微粉制剂对人工感染柔嫩艾美耳球虫的雏鸡的红细胞免疫功能的影响。结果,粗粉组(2%)、微粉组(2%)、微粉组(1%)三组的红细胞C3b受体花环形成率比阳性对照组有明显提高(p<0.05);红细胞免疫复合物(RBC-IC)花环形成率比阳性对照组有所降低(p<0.01)。说明所试药物能改善红细胞的免疫粘附功能,显著降低血浆中免疫复合物的含量,降低球虫病对机体的损伤。     

江苏丹阳等县猪球虫调查报告

本文报导了江苏省丹阳等三县猪球虫的种类以及不同年龄猪的球虫感染率。共查276头猪,球虫阳性的95头,阳性率为34.4％。从276头不同年龄的猪共检到1科2属11种球虫卵囊,其中艾美尔属Eimeria9种:猪艾美尔球虫E.suis,蒂氏艾美尔球虫E.debiecki,光滑艾美尔球虫E.cerdonis,粗糙艾美尔球虫E.scabra,四川艾美尔球虫E.szechuanensis,豚艾美尔球虫E.porci,最小艾美尔球虫E.perminuta,新蒂氏艾美尔球虫E.neodebrleki,有刺艾美尔球虫E.spinosa。等孢属I sospora两种,即猪等孢球虫I.suis,阿拉木图等孢球虫I.almataensis。其中猪艾美尔球虫,光滑艾美尔球虫,豚艾美尔球虫,最小艾美尔球虫,新蒂氏艾美尔球虫,有刺艾美尔球虫和猪等孢球虫7种为国内首次报道。     

生物技术在鸡球虫免疫研究中的应用

就近几年开发的球虫疫苗和球虫免疫中所涉及的分子细胞生物学、分子免疫学和功能基因组学的相关技术进行了阐述。     

斯氏艾美耳球虫体外脱囊过程中孢子囊余体的形态学和组织化学研究

本研究观察了斯氏艾美耳球虫Eimeria stiedai子孢子体外脱囊过程中孢子囊余体的变化,并用组织化学技术研究了其化学特性。发现在子孢子脱囊的初期,即斯氏体离去和子孢子脱出之前,孢子囊余体已分散到整个孢子囊内,呈颗粒状,运动性强。第1个子孢子脱出后,余体颗粒密集于第2个子孢子周围,活动剧烈。脱囊完成后,余体颗粒向一起集中,在孢子囊钝端形成圆球状体,周围似乎有膜包围,此时巳失去运动性。组织化学研究证明,斯氏艾美耳球虫孢子囊余体含有多量的多糖、脂肪及蛋白质。同时还发现,孢子囊余体内有较强的酸性磷酸酶活性。     

孔雀球虫种类调查研究

对郑州动物园15只孔雀（pavo)的粪便进行了检查，结果发现它们主要感染鸟等孢球虫Isospora Iacazei Labbe,1893；偶见有梅氏艾美尔球虫Eimeria mayurai Bhatia et Pande,1966和曼德勒艾美尔球虫E.mandali Banik et Ray1964。对这些球虫已孢子化卵囊作了描述、摄影绘图，并列出了检索表。