柔嫩艾美耳球虫耐药株与鸡3种球虫的同工酶的研究

对不同离子载体抗生素具有抗药性的柔嫩艾美耳球虫和药物敏感的柔嫩区美耳球虫、布氏匀美耳球虫和堆型艾耳球虫的孢子化卵囊,采用聚安凝胶垂直板电泳,进行了乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）、葡萄糖磷酸异构酶（ＧＰＩ）和葡萄糖－６－磷酸脱氢酶（Ｇ６ＰＤ）等同工酶华不同离子载体抗生素具有抗药性的柔嫩艾美耳球虫和药物同工酶酶谱可以反应出球虫种间差异;而柔嫩艾耳球虫抗性虫株的ＬＤＨ酶谱是２条带,敏感虫株是３条带,抗性株比敏感株     

堆型艾美耳球虫cSZ1基因的克隆与分析

[目的]分析堆型艾美尔球虫cSZ1基因序列,为研制球虫疫苗提供候选抗原。[方法]根据堆型艾美尔球虫基因序列,设计合成引物,RT-PCR扩增堆型艾美尔球虫长春株cSZ1基因并测序。[结果]与GenBank中发表的堆型艾美尔球虫cSZ1基因序列相比,堆型艾美尔球虫长春株cSZ1基因发生了5个核苷酸变异,两者的核苷酸序列同源性为99.47%,两者编码区的核苷酸序列同源性为99.61%。堆型艾美尔球虫长春株cSZ1基因ORF内有2个变异位点。其中,A185G变异导致了所编码氨基酸由缬氨酸变为异亮氨酸。[结论]cSZ1基因编码蛋白可以作为球虫疫苗的候选抗原。     

海口市文昌鸡球虫病流行调查

为了解海南省海口市文昌鸡球虫病的流行情况,采用群体采样法分别从该市文昌鸡主要养殖地区采集新鲜鸡粪,检查粪样。对阳性粪样采用饱和盐水漂浮和离心沉淀法进行卵囊分离,以质量分数为2.5%的重铬酸钾培养保存。显微镜下观察卵囊,进行虫种鉴定,并统计各调查点的鸡球虫种类、感染率和感染强度。检查雏鸡(15~42日龄)、中鸡(43~84日龄)和大鸡(85~130日龄)粪样各120份。结果显示,鸡球虫的感染率分别为75.8%、78.3%和26.7%。共检出7种球虫,均属艾美耳属,分别为毒害艾美耳球虫(Eimeria neca-trix)、堆型艾美耳球虫(Eimeria acervulina)、巨型艾美耳球虫(Eimeria maxima)、柔嫩艾美耳球虫(Eimeriatenella)、和缓艾美耳球虫(Eimeria mitis)、哈氏艾美耳球虫(Eimeria hagani)和早熟艾美耳球虫(Eimeriapraecox)。结果表明,鸡球虫在海口市文昌鸡主要养殖地区普遍存在,有的调查点感染强度很高,养殖户的科学防治意识不强。     

5株堆型艾美耳球虫顶质体rpoB基因的扩增及序列分析

以5株堆型艾美耳球虫为研究对象,对其顶质体rpoB基因的部分序列进行了PCR扩增、测序及序列分析,并与GenBank上发表的柔嫩艾美耳球虫及其他顶复门寄生虫相关序列进行比较,研究顶质体的遗传变异情况。结果表明,从堆型艾美耳球虫不同来源虫株均获得了469bp的目的片段,应用DNAStar软件进行序列对比发现,5株堆型艾美耳球虫的顶质体rpoB序列完全一致,与柔嫩艾美耳球虫相应序列的相似性为92.75%,而与刚地弓形虫和疟原虫的相似性分别为67.23%和64.62%。首次报道了堆型艾美耳球虫rpoB序列,显示rpoB基因序列保守,不同来源堆型艾美耳球虫虫株的序列没有差异,为进一步研究艾美耳球虫的群体遗传学奠定了基础。     

鸡柔嫩艾美耳球虫3-1E和CDPK双抗原DNA疫苗的免疫保护效果观察

将构建的含鸡柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)CDPK和3-1E双抗原的真核重组质粒proEC,在14日龄和21日龄分别免疫AA肉鸡,28日龄感染5×104个E.tenella孢子化卵囊,观察其免疫保护效果.结果显示,攻虫后1周,与proC组相比,proEC组能显著增强淋巴细胞转化和血清抗体水平(P＜0.05);与proE组和proC组相比,proEC组卵囊产量最低但差异不显著(P＞0.05),其相对增重低于proE组和proC组.结果表明,proEC双抗原DNA疫苗对E.tenella攻虫表现出一定双抗原协同保护效应.     

γ——射线辐射对兔球虫孢子化卵囊致病性及免疫原性的影响

本试验研究了不同剂量(5KR、15KR、25KR、35KR、45KR)的γ-射线辐射对家兔的E.stiedai球虫的孢子化卵囊致病性及免疫原性的影响。结果证明:γ-射线辐射可以降低E.stiedai球虫的致病性,同时也减弱它的免疫原性。其程度取决于辐射剂量。通过辐射卵囊和未受辐射卵囊的比较试验,認为用辐射致弱的球虫卵囊作为疫苗来預防球虫病是可能的。     

柔嫩艾美耳球虫泛素蛋白功能初步研究

泛素是真核生物中普遍存在的一种小分子蛋白,广泛参与细胞内蛋白质的平衡代谢过程,对维持细胞内环境的稳态具有重要作用.为研究泛素在柔嫩艾美耳球虫中的功能,本研究利用PCR方法克隆了柔嫩艾美耳球虫泛素(EtUb)基因,将其亚克隆至原核表达载体pET28a(+),转入大肠杆菌BL21,诱导表达制备rEtUb蛋白,用纯化的重组蛋...     

柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)BJ株SO7重组抗原的免疫试验

将柔嫩艾美耳球虫（Ｅｉｍｅｒｉａ ｔｅｎｅｌｌａ）ＢＪ株Ｓ０７基因插入ｐＴｈｉｏＨｉｓＢ载体中,构建了１个表达载体,命名为ｐＴｈｉｏＨｉｓＳ０７。将此表达载体转入大肠杆菌ＤＨ５ａ,经ＴＰＴＧ诱导表达后,用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ检测表达产物。结果表明,含ｐＴｈｉｏＨｉｓＳ０７质粒原工程菌具有明显的表达产物,表达效率为１７．１％。用超声波粉碎仪裂解含重组抗原的工程菌,加入钾加矾作佐剂,用２个剂量（１０、１０     

柔嫩艾美耳球虫感染对鸡盲肠中一些正常厌氧微生物菌群动态的影响

通过对鸡感染柔嫩艾美耳球虫时盲肠中常见正常厌氧微生物的变化情况进行检测研究发现:鸡在感染球虫后第7、10、14天时盲肠中类杆菌(Bacteriodes)的数量显著减少(P<005),而梭状芽孢杆菌(Clostridium)则显著增多;在球虫感染后的第7、10天时,盲肠中的消化球菌(Peptostreptocuccus)和真杆菌(Eubacterium)呈显著下降(P<005)。上述结果从一个方面阐明了柔嫩艾美耳球虫感染导致对某些其它感染抵抗力下降的机制。     

鸡柔嫩艾美耳球虫不同抗药性虫株的种内多态性研究

应用RAPD技术进行柔嫩艾美耳球虫4个单一抗药性虫株与1个敏感株的基因组DNA多态性分析，发现4个抗药性虫株及敏感株之间的相似值均大于99%；OPAO3引物对抗盐霉素株扩增出一条约500bp的特异条带，OPH02引物对抗克球粉株和抗盐霉素株均扩增出了约1kb的第三条主带，这些特异条带的出现很可能与球虫抗药性基因有关，有可能用于抗药性虫株的诊断与鉴定。