大鲵虹彩病毒流行株的分离及其主衣壳蛋白编码基因序列比较分析

大鲵虹彩病毒(giant salamander iridovirus, GSIV)是近年中国大陆新发现的引起人工养殖大鲵(Andrias davidianus)大规模死亡的病毒病原。为了揭示大鲵虹彩病毒流行株的基因型差异, 本研究对2010–2012年采集自全国不同大鲵养殖区域的患虹彩病毒病的大鲵样本进行了分子检测、病毒分离培养以及病毒主衣壳蛋白(major capsid protein, MCP)基因测序与比对分析。结果显示, 采自陕西、湖北、湖南、浙江、江西、福建等省的10个样本检测为阳性, 通过细胞培养获得10株病毒流行株。对该10株流行株MCP基因的测序与比对分析发现, 核苷酸序列相似性达到99.7%~100%, 其推测的氨基酸序列无明显差异, 证实中国大鲵虹彩病毒流行株属同一基因型。系统进化树分析结果表明, 所选大鲵虹彩病毒与蛙病毒分别聚为一枝, 但其亲缘关系较近。本研究结果旨为大鲵虹彩病毒病的疫苗研制及其免疫防控技术研究奠定基础。

     

对虾白斑综合征病毒囊膜蛋白VP110在中国明对虾鳃细胞中结合蛋白的鉴定与特性

为了鉴定对虾白斑病综合征病毒(WSSV)囊膜蛋白VP110在中国明对虾(Fenneropenaeus chinensis)鳃细胞中的结合蛋白, 运用pET-32(a)+载体构建了1段含RGD模体的截短VP110原核重组表达质粒, 转化大肠杆菌诱导表达后获得分子量为41 kD的截短重组VP110蛋白(rVP110)。以rVP110作为诱饵蛋白, 运用pull-down实验结合蛋白质谱分析鉴定rVP110结合蛋白, 结果显示, 中国明对虾鳃细胞中的肌动蛋白和精氨酸激酶(arginine kinase,AK)与rVP110具有结合作用。利用PCR扩增中国明对虾AK编码基因, 将其与表达载体pGEX-4T-1连接后转化大肠杆菌诱导表达获得重组AK蛋白(rAK), 通过pull-down实验进一步证实rAK可与rVP110发生结合。克氏原螯虾(Procambarus clarkia)体内中和实验结果显示, rAK对WSSV感染克氏原螯虾具有一定的中和作用, 能延缓螯虾的死亡进程。另外, 中国明对虾在人工感染WSSV后, 荧光定量PCR检测结果显示, AK基因表达水平显著上调, 18 h时达到峰值, 然后下降至正常水平; 酶底物法检测结果同样显示, 鳃细胞中AK酶活性在感染WSSV后发生显著上调。本研究旨在为深入了解WSSV囊膜蛋白VP110在WSSV感染宿主过程中的作用提供基础依据。

     

用地高辛标记的PCR－ELISA技术快速检测转基因鱼

取含有小鼠重金属螯合蛋白（mMT)基因启动子及人生长激素（hGH)基因的鱼样品，以Qiagene核酸纯化技术对鱼组织DNA进行纯化。常规PCR检测显示，mMT启动基因和hGH基因的PCR产物分别为240bp和130bp，与设计相符。PCR产物的核酸测序结果证实其扩增产物具特异性。地高辛-PCR（Dig-PCR)标记反应显示，2个基因均产生1条Dig标记的特异产物带。Dig-PCR-ELISA检测敏感性试验显示，对mMT启动子和hGH基因的检测敏感性可达10^-3，与常规PCR结合琼脂糖胶电泳检测方法相比，检测敏感性可提高至100-1000倍。试验证明，针对mMT和hGH基因所建立的Dig-PCR-ELISA技术特异可靠。     

水产饲料动植物蛋白源替代体系及其与养殖鱼类食性的关系

蛋白源替代是水产饲料领域研究的重要内容之一。本文概述了当今水产饲料动植物蛋白源替代体系的构成和应用,并对其进行详细分类和特点阐述,选取其中具有代表性的蛋白源进行总结,重点揭示水产饲料动植物性蛋白源在不同食性鱼类的研究进展及替代效果差异较大原因,以期为水产饲料配方的科学设计提供理论依据。     

油料加工和综合利用技术研究进展

油料作物是油脂和蛋白质的重要来源,在保证油脂和蛋白质的有效供给、改善食物结构、促进养殖业和加工业发展等诸方面均居重要地位。目前改变不利于人类健康的油料加工工艺,优化有效精炼过程,减少废弃物并对其进行无害化、资源化处理,开发高附加值油料加工产品,都对油料加工产业提出越来越高要求。概述了油脂加工工艺技术、油料饼粕利用技术、油料资源化利用技术和油料脂质活性成分利用技术的研究进展以及存在的问题, 展望了今后的发展方向和思路, 以期为油料加工和综合利用技术的发展提供参考。     

水流对三疣梭子蟹幼蟹运动行为和代谢的影响

在实验室条件下,观察了水流刺激对不同体重（小、中、大3种规格的体重分别为13．348g±1．751g、21．71g±1．247g、30．308g±3．009g）的三疣梭子蟹Portunus trituberculatus幼蟹运动行为的影响,研究了幼蟹在水流刺激（23cm／s）1h及恢复12、24h时的耗氧率、氨氮排泄率、氧氮比和血蓝蛋白含量的变化。结果表明：小、中、大3种规格幼蟹最大耐流流速分别为23．0、26．7、31．0cm／s,水流刺激对幼蟹的运动行为影响显著。当流速为23．0cm／s时,3种规格的幼蟹均在水槽底部顶流爬动;流速高于23cm／s时,小规格组幼蟹趴于拦网区不动。幼蟹的耗氧率和氨氮排泄率随体重增大而降低,在水流刺激1h后,3种规格幼蟹的耗氧率、氨氮排泄率和血蓝蛋白含量均下降,而氧氮比升高;静水中恢复12h,其氧氮比恢复至正常,耗氧率、氨氮排泄率和血蓝蛋白含量升高,至24h恢复到正常水平;与对照组相比,水流刺激1h后和恢复12h时幼蟹的耗氧率、氨氮排泄率差异显著（P〈0．05）,恢复24h后无显著差异（P〉0．05）。     

蚕丝蛋白溶液处理后生菜幼苗在高温胁迫下的生理生化变化

以瑞比特生菜为材料,4叶1心期幼苗于光照培养箱（20℃,9000Lx）中每天叶面喷施1次20～200mg／L质量浓度的蚕丝蛋白溶液,连续3d,以喷蒸馏水对照,然后置于高温胁迫条件下（昼温／夜温：40℃／30℃）生长3d,测定叶片各项生理生化指标。结果表明,经蚕丝蛋白溶液处理的幼苗,在高温胁迫下,超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化物酶（POD）、过氧化氢酶（CAT）活性和可溶性蛋白含量均高于对照,而丙二醛（MDA）含量低于对照,其中以50mg／L大分子丝素蛋白和100mg／L小分子丝素蛋白质量浓度处理效果最好。蚕丝蛋白可能具有缓解高温胁迫对生菜幼苗造成的破坏作用。     

芽孢杆菌的筛选及其在豆粕发酵中的应用

筛选出耐酸耐胆盐且产蛋白酶、淀粉酶性能较好的优势芽孢杆菌菌株,以期制备高效复合益生素或应用于豆粕发酵。首先,对分离并镜检出的17株菌株进行耐酸耐胆盐特性初筛,而后对筛出的3株菌株进行耐酸耐胆盐梯度复筛,随后检测其发酵豆粕的蛋白酶和淀粉酶活性以及对抗原蛋白的降解能力。最后通过16SrRNA扩增比对鉴定筛选的菌种,进而通过MEGA4.0构建系统进化树进行分析。成功筛选出1株耐酸耐胆盐、产蛋白酶和淀粉酶,且能高效降解豆粕抗原蛋白的解淀粉芽孢杆菌B9。     

Transformation of Upland Cotton （Gossypium hirsutum L.） with gfp Gene as a Visual Marker

The green-fluorescent protein (gfp) gene was evaluated as a screening marker during cotton (Gossypium hirsutum L.) transforming and plant regeneration.High expression of GFP (green-fluorescent protein)...     

利用醇溶蛋白分析小麦强优势组合亲本遗传差异

利用A－PAGE方法对小麦（黑麦）异源重组系异源2号组配的22个强优势杂交组合的亲本进行了醇溶蛋白分析。结果表明,醇溶蛋白图谱能将除绵农2号和绵农3号外的所有亲本区分开。电泳共分离出44条相对迁移率不同的谱带。其中,37条具多态性,每个材料可分离出17～27条谱带。父本异源2号与其强优势组合母本间醇溶蛋白遗传距离相对较小,平均值为0．34。根据醇溶蛋白遗传距离聚类结果,1B／1R和非1B／1R易位系被分别聚在不同（亚）类中,多数系谱相同或相近的品种（系）能被聚在一起。醇溶蛋白遗传距离与亲本各性状表型差异及F1杂种优势间相关均不显著,难以用于预测杂种优势。