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151.
根据NCBI上输血传播性病毒(Torque-Teno virus,TTV)犬基因组序列(Cf-TTV10,GenBank登录号:AB076002)设计嵌套引物,从犬血清与粪便中鉴定出TTV。199份犬血清样品中检出阳性率为14.6%(29/199),158份犬粪便样品的检出率为12.7%(20/158),通过基因分析与鉴定确定为同一型,验证了从粪便样品和血液样品的提取检测的犬TTV阳性率基本保持一致(P>0.05),为下一步进行TTV的传染特性和分子流行病学的研究提供了基础。 相似文献
152.
一种改进的尖孢镰刀菌的实时荧光定量PCR检测方法 总被引:1,自引:0,他引:1
为实现荧光定量PCR对土壤病原真菌数量更为高效、灵敏的检测,本研究将液体培养的孢子悬浮液和长年耕作的水稻土制作成孢子浓度为4×10~1~4×10~6 spore/g的带菌土,采用MoBio PowerSoil@DNA Isolation Kit提取模拟带菌土壤总DNA,引入常规PCR预扩增包含qPCR目标序列的1 446bp片段,以预PCR产物为模板进行qPCR,构建荧光定量PCR标准曲线。研究结果表明:以试剂盒提取的带菌土壤总DNA为模板绘制的qPCR标准曲线相关系数r为0.985,检测下限为4×10~3 spore/g土;引入预PCR后,qPCR标准曲线相关系数r为0.974,检测下限为4×10~2 spore/g土,较未引入时提高了10倍,结合不同土壤病原真菌的特异性引物,该检测方法可为土壤病原真菌的有效定量检测提供技术支撑。 相似文献
153.
为快速鉴别诊断猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪轮状病毒(PoRV)和猪嵴病毒(PKV),根据PEDV的M基因、TGEV的N基因、PoRV的VP6基因和PKV的3D基因序列设计4对特异性引物,通过PCR扩增目的片段并构建重组质粒,建立了一种可同时检测4种病毒的RT-PCR诊断方法,该方法可特异性扩增这4种病毒的相应片段,而对猪瘟病毒(CSFV)、猪圆环病毒2型(PCV-2)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)均无扩增,最低检出量分别为1.33×10^4、1.33×10^3、1.33×10^4、1.33×10^5copies/μL。应用该方法对临床55份猪腹泻样品进行检测,结果检测出14份PEDV、1份PoRV和27份PKV,未检出TGEV,其中PEDV和PKV混合感染9份。上述结果表明,建立的多重RT-PCR检测方法快速、特异、敏感,可用于以上4种腹泻病毒的临床检测和流行病学调查。 相似文献
154.
本文阐述了PCR(基因扩增 )技术的原理、基本操作方法 ,及其在兽医生物制品疫苗污染病毒检测中的应用。着重介绍了应用PCR技术检测新城疫病毒和瘟病毒的方法 ,具有快速、敏感、特异性高等优点 ,对兽医生物制品的研究、生产和临床应用具有一定的指导意义 相似文献
155.
应用逆转录套式PCR检测新城疫病毒核酸 总被引:7,自引:1,他引:6
选择DNV融合蛋白保守的编码区域,设计并合成了一对外引物和一对内引物,建立并优化了检测新城疫病毒核酸的逆转录套式PCRI地,通过检测NDV感染的实验客观存在病料和临床病料,结果表明,逆转录套式PCR法最低能鉴别出约0.3pg的NDV RNA,攻毒后第8天还能从非免疫鸡和SPF鸡泄殖腔拭子中检出DNV,第8天非免疫鸡泄殖腔拭子中NDV的最大检出率为5/10,第8天SPF鸡泄殖腔拭子中NDV的最大检出率为6/10,对非免疫鸡和SPF鸡的泄殖腔中NDV最佳检出时间均在攻毒后第5天。逆转录套式PCRY应运地临床样品中DNV的最大检出率为6/7,经核酸杂交验证,该法具有很高的特异性和敏感性,也比较简便快速,为从分子水平探讨NDV的发病机理、临床早期快速诊断提供了新的研究手段。 相似文献
156.
157.
马铃薯类病毒(PSTVd)非放射性标记cDNA探针制备及其在检测上的应用 总被引:4,自引:0,他引:4
利用含PSTVd单体克隆的重组质粒pGEM PSTVd,通过PCR扩增技术,用生物素标记制备cDNA探针,进行杂交反应检测PSTVd,其中通过化学颜色反应进行判读灵敏度可达50pg,而用化学发光反应进行判读灵敏度可达5pg,分别是R-PAGE检测灵敏度的26倍和260倍,且2种反应特异性和专化性较强。cDNA核酸斑点杂交反应(NASH)检测PSTVd方法准确、灵敏度高,一次检测样品数量多,且对异地样品检测非常方便,是以往其它检测方法的有效补充。 相似文献
158.
Onivaldo Randig Frédéric Leroy Philippe Castagnone-Sereno 《European journal of plant pathology / European Foundation for Plant Pathology》2001,107(6):639-643
Random amplified polymorphic DNA fingerprinting was performed on single females of root-knot nematodes, Meloidogyne spp., using a new procedure for DNA isolation. One-fourth of the total DNA amount isolated from a single female proved to be sufficient as a template in a polymerase chain reaction. Electrophoretic patterns of the amplified fragments were reproducible between replicates from a single female or sister females from the same progeny, and identical to those obtained with genomic DNA purified from a large number of nematodes. Moreover, a comparative analysis over three successive generations showed stability of the amplification patterns, thus demonstrating the utility of this procedure for epidemiological and ecological studies on root-knot nematodes. 相似文献
159.
A. Bertaccini J. Fránová S. Paltrinieri M. Martini M. Navrátil C. Lugaresi J. Nebesárová M. Simkova 《European journal of plant pathology / European Foundation for Plant Pathology》1999,105(5):487-493
During the summer 1996, twelve of twenty-eight leek plants located in a garden near eské Budjovice, South Bohemia exhibited symptoms typical of diseases associated with phytoplasmas. In summer 1998 similar symptoms were detected in leek plants in a field used for seed production located in Romagna, North Italy. In both cases the plants were established in the spring of the previous year. Plants showed flower abnormalities: stamen elongation, anther sterility, pistil proliferation, as well as poor, if any, seed production. Phytoplasma-like structures were detected by scanning and transmission electron microscopy in phloem sieve elements in the Czech diseased plants, but not in healthy ones. Nested-PCR amplifications of extracted DNA with phytoplasma-specific oligonucleotide primer pairs confirmed the presence of phytoplasmas in these plants at low concentrations. Restriction fragment length polymorphism analyses of amplified ribosomal sequences allowed the identification of detected phytoplasmas: all the samples from the Czech Republic contained aster yellows related phytoplasmas (16SrI-B) while in the Italian samples aster yellows related phytoplasmas (16SrI-B) together with stolbur related phytoplasmas (16SrXII-A) were identified. This is the first report of detection and identification of a phytoplasma disease of leek in the Czech Republic and Italy. 相似文献
160.
Abstract We examined 12 formalin-fixed paraffin-embedded feline skin tumours which had the histopathological features of fibropapillomas for the presence of papillomavirus (PV) DNA using touchdown polymerase chain recation (PCR), DNA sequencing and nonradioactive in situ hybridization. Nine of the tumours contained a 102-bp PCR product demonstrated using consensus PV primers that amplify a portion of the L1 gene. The nucleotide sequences are closely related, but not identical to that of ovine PV type 2, rabbit oral PV and reindeer PV. The deduced amino acid sequences had strong homologies with the major capsid protein L1 of deer PV, bovine papillomavirus (BPV) 1 and BPV 2, and European elk PV. Although PV antigens were not detected in any of the tumours by immunohistochemistry, PV DNA was demonstrated in individual mesenchymal cells or cell nests of 4/12 tumours by in situ hybridization. A nonproductive infection of mesenchymal fibroblast-like tumour cells with a papillomavirus would explain the lack of PV antigen expression and the absence of PV DNA in the hyperplastic epithelium. Because these tumours and their pathogenesis are similar to equine sarcoids, we suggest that they should be reclassified as 'feline sarcoids' instead of fibropapillomas. 相似文献