牛肠毒素性产气荚膜梭菌的分离及鉴定

对黑龙江省3个地区牛场疫牛进行临床诊断，剖检结果为小肠出血性肠炎和心内外膜严重出血等症状，进行了细菌的分离培养、涂片镜检、生化试验和动物感染试验。结果表明：分离菌株均为革兰氏阳性粗短杆菌，严格厌氧，在血平板上具有双溶血环，能发酵葡萄糖、麦芽糖、蔗糖和暴酵牛乳，肠毒素检测试验阳性，厌气肉肝汤培养物0．2mL小白鼠尾静脉注射，2～10h可使其致死。试验结果表明3个分离株均为产气荚膜梭菌。     

C型产气荚膜梭菌外毒素致小鼠肠道损伤的转录组分析

旨在探索产气荚膜梭菌外毒素造成机体炎性损伤及免疫调控紊乱的毒性机制,为产气荚膜梭菌病的致病机理研究提供理论基础。将C型产气荚膜梭菌强毒株C59-2培养上清腹腔注射BALB/c小鼠,采集小肠样本进行转录组测序,筛选差异表达基因,并对其进行GO功能注释和KEGG通路富集分析。结果显示,共获得40.99 Gb有效碱基,筛选后共得到795个差异表达基因,其中,229个基因表达上调,566个基因表达下调,对随机选取的10个基因进行q-PCR验证,其相对表达量与转录表达谱一致。GO功能注释主要涉及G蛋白偶联核苷酸受体活性和G蛋白偶联嘌呤核苷酸受体活性等。KEGG通路富集分析发现,主要富集在TNF信号通路、IL-17信号通路、p53信号通路、FOXO信号通路、Toll样受体信号通路、NF-κB信号通路等。产气荚膜梭菌外泌毒素侵入机体,会激活TNF等炎性信号通路,进而造成肠道发生炎性损伤甚至坏死。     

产气荚膜梭菌型特异性多重PCR的研究

建立了一种简单且具有型特异性的产气荚膜梭菌的多重PCR诊断方法.结果表明,该PCR特异性好,只有产气荚膜梭菌呈现阳性,被检验的其他7种梭菌以及大肠杆菌、葡萄球菌和多杀性巴氏杆菌均为阴性.该PCR具有较高的敏感性,最小检测量为4.2×105 CFU/mL,单个菌落稀释10倍后也能被检测出,适用于医院、防疫和兽医诊断等部门,具有重要的公共卫生意义.     

多重PCR检测圈养牛、猪和羊源魏氏梭菌

采用多重PCR对圈养源魏氏梭菌的α，β，ε，ι毒素基因进行了检测，结果证实该方法具有很高的特异性。通过对山东德州、枣庄、泰安、蒙阴曾经流行过魏氏梭菌病的猪场、牛场和羊场的162个粪便样品进行检测，检出率为19．1％，均为A型。应用该方法鉴别魏氏梭菌血清型快速、简便，结果对于预防治疗均具有重要的指导作用。     

羊魏氏梭菌PCR方法的建立及初步应用

根据羊魏氏梭菌A、B、C、D、E型共有的α毒素基因,设计了1对引物,通过对PCR反应条件进行优化,建立了羊魏氏梭菌PCR检测方法。该方法扩增条带大小为255 bp,最低核酸检测量A型为0.39 ng/L、B型为0.62 ng/L、C型为0.52 ng/L、D型为0.87 ng/L、E型为0.92 ng/L,而对羊大肠杆菌、羊链球菌、金黄色葡萄球菌、羊多杀性巴氏杆菌的扩增结果均为阴性。应用该PCR方法对54份临床样本进行检测,PCR检测结果高于细菌学和生化检测结果。结果表明,该PCR方法具有很好的特异性和敏感性,可用于临床羊魏氏梭菌病的早期快速诊断。     

牛魏氏梭菌病概述

魏氏梭菌(Clostridium welchii),又称产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens),是引起牛的猝死病的主要病原,对养牛业的危害极大。本文简要介绍了牛魏氏梭菌病的病原、流行病学、临床症状、病理变化、诊断和防制。     

Tylosin-responsive chronic diarrhea in dogs

Fourteen dogs had shown chronic or intermittent diarrhea for more than 1 year. Diarrhea had been successfully treated with tylosin for at least 6 months but recurred when treatment was withdrawn on at least 2 occasions. Tylosin-responsive diarrhea (TRD) affects typically middle-aged, large-breed dogs and clinical signs indicate that TRD affects both the small and large intestine. Treatment with tylosin eliminated diarrhea in all dogs within 3 days and in most dogs within 24 hours. Tylosin administration controlled diarrhea in all dogs, but after it was discontinued, diarrhea reappeared in 12 (85.7%) of 14 dogs within 30 days. Prednisone given for 3 days did not completely resolve diarrhea. Probiotic Lactobacillus rhamnosus GG did not prevent the relapse of diarrhea in any of 9 dogs so treated. The etiology of TRD, a likely form of antibiotic-responsive diarrhea (ARD) is unclear. The following reasons for chronic diarrhea were excluded or found to be unlikely: parasites, exocrine pancreatic insufficiency, inflammatory bowel disease, small intestinal bacterial overgrowth, enteropathogenic bacteria (Salmonella spp., Campylobacter spp., Yersinia spp., or Lawsoni intracellularis), and Clostridium perfringens enterotoxin and Clostridium difficile A toxin. A possible etiologic factor is a specific enteropathogenic organism that is a common resident in the canine gastrointestinal tract and is sensitive to tylosin but difficult to eradicate. Additional studies are required to identify the specific cause of TRD.     

魏氏梭菌类毒素疫苗研制及其免疫家兔抗体消长规律

本研究分别从山东省的莱芜、泰安、潍坊的三个养兔场发生疑似梭菌性下痢的病兔体分离到三株魏氏梭菌，鉴定为A型。利用该分离菌株和A型魏氏梭菌标准株（CVCC37）所产外毒素经甲醛灭活并加入氢氧化铝胶佐剂吸附浓缩后制备了A型魏氏梭菌类毒素疫苗。对该疫苗分别进行了安全性检验、有效免疫剂量试验和接种家兔1～23周血清中抗毒素（Ab）消长规律研究。结果表明，魏氏梭菌外毒素用03％甲醛32h能够彻底灭活，并最大可能地保持其抗原性；制备的魏氏梭菌类毒素疫苗无毒副作用，安全可靠；用野毒株和标准株制备的类毒素疫苗对家兔的有效免疫剂量为2mL／只，免疫保护效果可靠；采用野毒株和标准株制备的类毒素疫苗接种家兔后第二周血清抗毒素效价迅速升高，到第四周达最高峰。分别为6．6一和7．125log2，较高抗体滴度维持约17周后缓慢下降，至23周时血清平均抗毒素滴度仍维持在4．0-和3．4log2以上，所以，该类毒素疫苗的免疫保护期可以设定为6个月。     

仔猪产气荚膜梭菌肠毒血症病原诊断及疫苗研究V.疫苗的制备、检验和田间试验

将试验确定的产毒力强的产气荚膜梭菌A型、C型菌种,选用复合培养基,经培养、灭活脱毒、浓缩和冷冻干燥,制备多批肠毒血症A型、C型和AC型二价干粉灭活疫苗.采用免疫攻毒或中和试验方法对研制的疫苗进行效力检验,疫苗100%合格,达到<规程>规定的标准.在13个省进行大规模田间试验的结果表明,所研制的疫苗性能良好,安全有效.母猪接种疫苗后无一例不良反应发生,并且仔猪生后健康,能够有效地预防和控制该病的发生和流行.     

产气荚膜梭菌多重PCR定型方法的建立及其应用

建立了多重PCR检测产气荚膜梭菌α、β、ε和ι毒素基因的方法。该方法具有良好的特异性和敏感性,只有产气荚膜梭菌呈现阳性,被检验的其他梭菌以及大肠杆菌、葡萄球菌均为阴性;将肉汤菌液样品10倍系列稀释后进行检测,检测灵敏度达到1.2×104CFU/mL。收集40份牛粪便样品,进行PCR检测,32份样品中成功扩增出589 bp的α毒素基因片段,阳性率为80%。结果显示,建立的多重PCR检测方法可取代血清中和试验,用于产气荚膜梭菌分型,同时表明A型产气荚膜梭菌在当地奶牛场中较为普遍。