一株丁酸梭菌的分离鉴定及其益生特性研究

本研究探索了丁酸梭菌分离株的益生特性，旨在为其在仔猪日粮中的应用提供理论依据。利用常规方法分离丁酸梭菌并进行纯培养，经生化检测和16S rRNA基因测序，对分离菌株进行鉴定；采用活菌计数法和牛津杯法研究分离株培养上清对3种致病菌的抑制作用、分离株黏附猪小肠上皮细胞（IPEC-J2）的特性及其对致病菌黏附细胞的抑制作用；采用细胞计数法研究分离株对IPEC-J2生长的影响；采用ELISA检测分离株处理细胞后培养上清液中细胞因子水平。结果表明，本研究成功分离到一株丁酸梭菌。与对照组相比，丁酸梭菌培养上清对3种致病菌生长抑制效果均显著（P<0.05）；丁酸梭菌可黏附于IPEC-J2，并且黏附效果最佳的感染复数（MOI）为50，最适处理时长为3 h；丁酸梭菌对3种致病菌黏附IPEC-J2均具有显著抑制作用（P<0.05）；丁酸梭菌MOI为1、10和50时细胞生长正常、形态完好，MOI为100时IPEC-J2生长受到显著抑制，同时出现部分细胞死亡；MOI为1时细胞因子水平无差异，MOI为10、50和100时细胞因子水平均显著增高（P<0.05）。综上所述，本研究分离的一株丁酸梭菌具有较好的益生特性，为其在生产中的应用提供了理论依据。     

Endoscopically Visualized Lesions,Histologic Findings,and Bacterial Invasion in the Gastrointestinal Mucosa of Dogs with Acute Hemorrhagic Diarrhea Syndrome

Background

Etiology of hemorrhagic gastroenteritis (HGE) syndrome in dogs is unknown and histopathologic and microbial investigations have only been performed post mortem.

Objective

To identify characteristic intra vitam endoscopic and histologic mucosal lesions, as well as bacterial species, within the mucosa of dogs with HGE.

Animals

Ten dogs diagnosed with HGE were included. Eleven dogs with gastroduodenoscopy and different intestinal diseases were used as controls for microbial changes. Dogs pretreated with antibiotics or diagnosed with any disease known to cause bloody diarrhea were excluded from the study.

Methods

In this prospective study, gastrointestinal biopsies were collected from 10 dogs with HGE. Endoscopic and histologic changes were assessed according to WSAVA guidelines. Biopsies from the stomach, duodenum, ileum, and colon were investigated by histology and by immunohistochemistry for the presence of Clostridium spp. and parvovirus. The first duodenal biopsy taken with a sterile forceps was submitted for bacterial culture.

Results

Acute mucosal lesions were only found in the intestines, not in the stomach. Clostridium spp., identified as Clostridium perfringens in 6/9 cases, were detected on the small intestinal mucosa in all dogs with HGE, either by culture or immunohistopathology. In the control group, C. perfringens could only be cultured in one of 11 dogs.

Conclusions and Clinical Importance

The results of this study demonstrate an apparent association between C. perfringens and the occurrence of acute hemorrhagic diarrhea. The term “HGE,” which implies the involvement of the stomach, should be renamed as “acute hemorrhagic diarrhea syndrome.”     

家兔A型魏氏梭菌病病因及防治报告

本文通过对河北省A、B两兔场暴发家兔A型魏氏梭菌病病因的调查分析和治疗试验,得出如下结论:(1)该病诱因是饲料营养失调,高能量、高蛋白、低纤维,速成后肠碳水化合物过度负荷所致。长途运输、饲料更换、冷潮刺激等也是该病的诱因。(2)该病死因主要是由于魏氏梭菌外毒素导致神经系统中毒、肠道粘膜严重损伤和极度脱水所致。(3)该病主要症状是急性水样腹泻,体温正常或偏低。病变主要是肓肠出血和胃粘膜溃疡。(4)采取大剂量口服青、链霉素、补液、解毒和收敛等综合措施,可控制病情发展,并使轻症群治愈率76.67%,重症群52.63%,病危群9.38%。     

丁酸盐降解菌和氢营养菌共培养物的研究(英文)

采用亨盖特厌氧技术,对处理屠宰和柠檬酸废水的两个实验室厌氧消化器中丁酸降解菌和氢营养菌进行了研究。观察到两个消化器中的丁酸盐降解菌的组成相同。丁酸盐转化为甲烷的过程由四种细菌共同完成。其中包括一种降解丁酸盐的产氢产乙酸细菌和一种利用乙酸盐的产甲烷菌及两种形态完全不同的利用H_2～CO_2的产甲烷菌。对分离到的一株丁酸降解菌SAl菌株的鉴定表明该阴应属沃而夫氏互营单胞菌(Syntrophomonas wolfei)。     

腐败梭菌无毒重组α毒素的表达与免疫保护性分析

本研究旨在获得腐败梭菌无毒重组α毒素,并评价其免疫保护性。对已知的腐败梭菌α毒素编码基因进行优化设计和人工合成,获得了缺少第212-222位共11个氨基酸编码序列的基因片段（GCSA_Δ11）。将该基因克隆至原核表达载体pET-30a（+）中进行表达与纯化。利用Western blot方法检测获得的重组α毒素（rCSA_Δ11）与腐败梭菌天然毒素抗血清的反应性,并采用小鼠检测其毒力。随后,以rCSA_Δ11制备疫苗免疫家兔,按照《中华人民共和国兽药典》（2015年版）规定的方法检测家兔血清的中和抗体效价。结果表明,rCSA_Δ11可溶表达比例可达46%,且能与腐败梭菌天然毒素抗血清反应。进一步的试验结果显示,rCSA_Δ11丧失了对小鼠的毒力,0.1 mL的一免兔血清可中和8~12个小鼠最小致死量（MLD）的腐败梭菌天然毒素;二免兔血清可中和32~45个小鼠MLD的腐败梭菌天然毒素。1个家兔MLD的腐败梭菌天然毒素攻毒后,对照组家兔4/4死亡,免疫组家兔得到了100%（4/4）的保护。综上表明,无毒性的rCSA_Δ11保留了良好的免疫保护性,从而为腐败梭菌病基因工程亚单位疫苗的研制提供了重要的试验数据。     

重组C型肉毒梭菌毒素的表达与免疫保护性分析

本研究旨在获得重组C型肉毒梭菌毒素蛋白,并评价其免疫保护性。将麦芽糖蛋白（MBP）和C型肉毒梭菌毒素重链C末端（CH_C）的编码基因序列进行优化和串联,获得基因片段GMBPCH_C。将GMBPCH_C克隆至pET28a-（＋）后转化大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞,分别在15和37℃两种温度条件下诱导表达。利用Ni-IDA亲和层析方法对可溶性表达的目的蛋白进行纯化,从而获得重组蛋白rMBPCH_C。将rMBPCH_C与Montanide ISA 201佐剂混合制备成疫苗,免疫4只家兔,剂量为100 μg/只。根据《中华人民共和国兽药典》（2015年版）规定的方法检测一免后21 d及二免后14 d家兔血清的中和抗体效价。同时,在二免后14 d对家兔进行攻毒。结果表明,rMBPCH_C在37℃的诱导温度下,主要以包涵体的形式表达;在15℃的诱导温度下,可溶性表达的比例可达50%。一次免疫后,免疫组4只家兔血清对C型肉毒梭菌天然毒素（简称天然毒素）的中和效价均可达到1（0.1 mL血清中和1个小鼠最小致死量（MLD）的天然毒素）。二免后,家兔血清的中和抗体效价可达到4~8。用10个家兔MLD的天然毒素攻毒后,免疫组家兔得到了100%（4/4）的保护,而用1个家兔MLD的天然毒素攻毒后,对照组家兔100%（2/2）死亡。以上结果说明,rMBPCH_C具有良好的免疫原性,从而为C型肉毒梭菌病基因工程亚单位疫苗的研制提供了重要的试验数据。     

一例赤猴魏氏梭菌感染的诊断

2019年11月贵州省某野生动物园2只赤猴(Erythrocebus patas)突然发病死亡,送检其中1只到贵州大学动物医院进行诊断。通过临床症状、病理剖检、实验室染色镜检、细菌分离培养、生化鉴定及动物回归试验,确诊本次疾病为魏氏梭菌(Clostridium welchii)感染。     

Effect of Inoculation with Anaerobic Nitrogen-Fixing Consortium on Salt Tolerance of Miscanthus sinensis

A functional community of bacterial endophytes, an anaerobic nitrogen-fixing consortium (ANFICO), was previously isolated from grasses. In the present study, we investigated another function of ANFICO. The grass Miscanthus sinensis was inoculated with an ANFICO that included Clostridium sp. Kas201-1 and Enterobacter sp. B901-2 and was more tolerant to salinity stress than uninoculated or B901-2-inoculated plants. Microscopic observations using an immunostaining technique revealed the presence of endophytic colonization by the clostridia and the maintenance of a substantial clostridial population until the end of plant cultivation. We conclude that endophytic Clostridium sp. Kas201-1 accompanying Enterobacter sp. B901-2 enhances the salinity tolerance of the host plant.     

丁酸梭菌对肉鸡钙磷代谢和胫骨指标的影响

试验通过在基础日粮中添加丁酸梭菌,研究其对肉鸡钙磷代谢和胫骨指标的影响。选择1日龄180只健康AA肉鸡,随机分入3个处理组,每个处理组6个重复,分别为对照组、抗生素组（ATB）和丁酸梭菌组（CB）。对照组饲喂基础日粮,ATB组在基础日粮中添加5 mg/kg黄霉素、75 mg/kg金霉素和20 mg/kg吉他霉素,CB组在基础日粮中添加2.5×10⁸ CFU/kg丁酸梭菌,试验期42 d。结果显示,与对照组相比,①CB组肉鸡血清钙（Ca）、磷（P）含量差异不显著（P>0.05）,21日龄ATB组肉鸡血清钙含量显著提高（P<0.05）;②21日龄CB组肉鸡胫骨强度显著提高（P<0.05）;42日龄CB组肉鸡胫骨磷含量极显著提高（P<0.01）;③21日龄CB组肉鸡排泄物中磷含量极显著降低（P<0.01）,并与ATB组无显著差异;42日龄CB组肉鸡排泄物中钙含量极显著提高（P<0.01）,排泄物中磷含量显著提高（P<0.05）。综合上述结果,在AA肉鸡基础日粮中添加2.5×10⁸ CFU/kg丁酸梭菌有利于改善肉鸡的胫骨发育,改善肉鸡对钙、磷的吸收利用,能有效降低21日龄肉鸡钙、磷排泄量,但并未降低42日龄肉鸡排泄物中钙、磷含量。