规模化猪场仔猪腹泻的发病特点与防治

仔猪腹泻是猪场常见疾病之一,其病因复杂,常给猪场造成巨大的经济损失。2011年1月—4月,对安徽、河南和江苏3省12个基础母猪存栏数在400头以上的规模化猪场发生仔猪腹泻的情况进行调查,分析了这些猪场仔猪腹泻的发病特点,并对不同的防治方法进行总结,以供广大兽医工作者参考。     

4株猪流行性腹泻病毒的HA和HI试验

为观察猪流行性腹泻病毒(PDEV)的血凝特性,进而为建立PEDVHA和HI试验,评估疫苗免疫抗体水平奠定基础,将CV777、DR13、YN13和YN144共4株PEDV毒株,在37℃下,分别用0、5、10、50、100μg/mL胰蛋白酶处理30min,然后用鸡、兔和猪红细胞进行血凝(HA)试验;用已经鉴定为PEDV抗体阳性的血清和乳清分别进行血凝抑制(HI)试验。结果显示:4株PEDV毒株只与兔红细胞发生凝集反应;CV777、DR13毒株的HA现象需要用5μg/mL的胰蛋白酶进行预处理,但是YN13和YN144毒株的HA现象不需要胰蛋白酶作用;该凝集现象能够被PEDV抗体特异性抑制。结果表明,PEDV能够凝集兔的红细胞,不能凝集鸡和猪的红细胞,因而可以用兔红细胞建立PEDV的HA和HI试验方法。     

中药抗猪流行性腹泻及作用机制

猪流行性腹泻(PED)主要侵害仔猪,发病率和病死率极高,严重影响养猪业的发展。目前,对于该病尚无有效治疗药物,细胞因子疗法、返饲等方法效果不确切。中药作为纯天然药物,含有多种有效活性成分,具有作用广泛、安全、低残留、低毒性、不易产生耐药性等优势,且已有研究证实许多单味中药及复方对猪流行性腹泻病毒(PEDV)均有抑制作用,己经成为当今最具发展前景的药物,被广泛用于PED的防控。论文就中药体外抑制PEDV的作用、临床应用,以及中药抑制或杀灭病毒,修复肠黏膜、减轻炎症反应,调控细胞干扰素信号通路,提高猪免疫力和肠内消化酶活性等作用机制进行综述。     

检测纽布病毒的Real-time RT-PCR方法的建立与应用

纽布病毒(nebovirus, NeV)是国内新发的犊牛腹泻病原,本试验目的是建立检测NeV的real-time RT-PCR方法。根据国内NeV流行株的聚合酶基因(RdRp)序列设计引物,通过反应条件和体系优化,成功建立基于TB Green检测NeV的real-time RT-PCR方法。结果显示:该方法在2.9×10~1～2.9×10~9copies·μL^-1之间呈现良好的线性关系,线性相关系数R^2=0.999 4,扩增效率为98%;该方法只特异性检出NeV,不检出常见无关病原;最低检测下限为29 copies·μL^-1;批内和批间的变异系数分别为0.89%～1.89%和0.83%～1.15%;该方法对临床样本的检出率高于文献报道的三种检测方法(P<0.05)。对2018年8—11月采自新疆和辽宁的135份奶犊牛腹泻样本中NeV的检出率为67.41%,场阳性率为100%(15/15)。所建方法的特异性和稳定性好、灵敏度高,为NeV的检测和流行病学调查提供了有力的手段。     

Gastrointestinal pythiosis with concurrent presumptive gastrointestinal basidiobolomycosis in a Boxer dog

A 2‐year‐old female spayed Boxer dog was presented for a 1‐month history of progressive hemorrhagic diarrhea with tenesmus and weight loss despite trial courses of antibiotics and diet change. Abdominal ultrasound revealed severe, focal thickening, and loss of normal architecture of the colonic wall with abdominal lymphadenomegaly. Dry‐mount fecal cytology, performed on several consecutive days, consistently revealed numerous, round, 16‐20 μm structures with basophilic, granular content, and a thin cell wall. Transmission electron microscopy identified these structures as fungi. Culture, polymerase chain reaction (PCR), and sequencing of the internal transcribed spacer, D1/D2 regions, and DNA‐directed RNA polymerase II core subunit (RPB2) confirmed the presence of Basidiobolus microsporus in the feces. Biopsies collected via ileocolonoscopy revealed marked, multifocal, chronic, neutrophilic, and eosinophilic ileitis and colitis with ulceration, granulation tissue, and intralesional hyphae (identified with Gomori methenamine silver stain). A Pythium enzyme‐linked immunosorbent assay and Pythium‐specific PCR performed on the formalin‐fixed paraffin‐embedded biopsy specimens were positive while Basidiobolus‐specific PCR was negative, thus confirming a diagnosis of pythiosis. This report describes a fatal case of colonic and intestinal pythiosis with the presence of fecal Basidiobolus sp. spores, suggestive of concurrent gastrointestinal basidiobolomycosis.     

猪流行性腹泻病毒N蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

以纯化的重组PEDVN蛋白为抗原免疫7周龄雌性BALB／c小鼠,利用淋巴细胞杂交瘤技术获得了7株稳定分泌抗重组N蛋白特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为9C1、7H8、3C10、6C4、10G9、2C10和483。7株杂交瘤细胞诱导小鼠产生的腹水抗体效价分别为1：3200、1：3200、1：6400、1：12800、1：25600、1：6400和1：12800。9C1、7H8、3C10、6C4、10G9和2C10免疫球蛋白类型均为IgM,轻链均为K链;483免疫球蛋白类型为IgG2a,轻链为K链。Westernblot试验结果显示,这7株单克隆抗体均能与天然的PEDVN蛋白发生反应。     

PEDV分离株S1基因的重组杆状病毒真核表达

为了研究猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)分离株(PEDV/LA/2014/02)纤突蛋白(S1)的真核表达及其反应原性,本研究利用杆状病毒真核表达系统表达出重组His-PEDV-S1蛋白。利用在线软件分析PEDV S1基因在sf9细胞内的稀有密码子,经优化密码子后的基因进行人工合成,合成后的PEDV S1基因被克隆至杆状病毒的穿梭载体(pFastBac HT A)中,转化大肠杆菌DH10Bac感受态细胞进行重组,PCR方法验证后将重组成功的杆状病毒基因组转染sf9细胞,获得包装成功的杆状病毒,该病毒进一步接种sf9细胞,显微镜观察重组病毒引起的细胞病变,RT-PCR方法验证PEDV S1基因的mRNA表达水平,SDS-PAGE、Western blotting方法验证重组PEDV S1蛋白的表达及其反应原性。结果显示,试验成功构建了重组穿梭质粒pFastBac HT A-PEDV-S1(pSL598),成功包装表达了PEDV S1的重组杆状病毒,重组杆状病毒能使sf9细胞出现细胞变大、胞内有空泡等典型病变,PEDV S1基因的mRNA获得表达,重组蛋白His-PEDV-S1在sf9细胞中得到表达,蛋白质大小为83 ku左右,主要存在于细胞沉淀中,表达的重组蛋白能与小鼠抗His抗体和猪抗PEDV阳性血清反应,说明该蛋白具有较好的反应原性。本研究为研制PEDV新流行毒株新型亚单位疫苗和防控该毒株的流行提供了材料。     

1株多重耐药致病性大肠杆菌的分离鉴定与分子分群

2017年1月,新疆博乐某牛场犊牛群出现腹泻疫情,本试验旨在调查病因并制定相应的防控措施。采集6头腹泻犊牛的肛拭子和新鲜粪便样本,先用Speed V-Diar4^TM试纸进行轮状病毒、冠状病毒、隐孢子虫和大肠杆菌F5(K99)的检测,再对样本进行病原菌的分离鉴定和分子分群,最后对分离菌进行致病力及耐药性的检测。结果显示,所有粪便样本的试纸检测结果均为阴性,从6份样品中共得到6株大肠杆菌和1株爱德华氏菌,分子分群PCR检测结果显示6株大肠杆菌中A群占83.3%(5/6),F群占16.7%(1/6)。半数致死量结果显示,只有1株大肠杆菌(菌株XJ-B1)具有致病性,可致小白鼠腹泻和死亡。药敏试验结果显示,7株分离菌对这18种抗生素产生不同程度的耐药性,其中致病性大肠杆菌XJ-B1耐药程度最严重,对β-内酰胺类、磺胺类和多肽类抗生素耐药,为多重耐药菌。由此可见,这株致病性大肠杆菌可能是引起本次犊牛腹泻的病因之一,也是本试验首次分离到牛源的F群大肠杆菌,该菌的多重耐药性增加了临床治疗的难度,而本试验结果为该牛场治疗此次犊牛腹泻提供了依据。     

嗜酸乳杆菌发酵复方中药成分变化对腹泻小鼠的影响

为对比研究中药复方经发酵前后其成分变化对小鼠腹泻的影响,本研究采用高效液相色谱检测中药复方发酵前后成分的变化,以大肠杆菌K88所致腹泻小鼠为动物模型,对比研究中药复方发酵液与中药复方水提液对腹泻小鼠腹泻率、腹泻指数、免疫器官指数、肠道菌群及细胞因子IFN-γ、IL-4的影响。结果显示,中药复方发酵液中保留时间为16 min处的主要特征吸收峰消失,主要成分发生了转变,产生了一种新的特征吸收峰。饲喂试验显示发酵组小鼠腹泻指数与腹泻率显著低于中药水提组(p<0.05);中药复方发酵液在降低小鼠盲肠内大肠杆菌数量,提高双歧杆菌及嗜酸乳杆菌数量方面优于中药复方水提液;发酵组小鼠胸腺指数与肝脏指数显著高于水提组(p<0.05)。中药复方发酵液在提高IFN-γ/IL-4比值方面优于中药复方水提液。结果表明,中药复方经过发酵后成分发生了变化,形成了新的物质,对腹泻小鼠产生了有益的影响,应用效果优于中药复方水提液,为其在治疗腹泻方面的应用奠定基础。