大蒜B病毒CP基因的原核表达及抗血清制备

制备抗大蒜B病毒(Garlic virus B,GarV-B)CP血清,为研究侵染大蒜6种葱X病毒属(Allexivirus)病毒之间的血清学关系以及大田检测GarV-B奠定基础。该研究根据GenBank报道的GarV-B序列设计引物,扩增从六安市寿县分离获得的GarV-B外壳蛋白基因(CP)并进行序列比对分析。将GarV-B的CP基因插入表达载体pS-BET,在大肠杆菌BL21(DE3)plys E菌株中诱导表达。表达的CP经12%SDS-PAGE和5%～20%梯度SDS-PAGE两次制备电泳纯化,免疫小鼠获得抗CP血清。Western blot分析抗体的特异性,采用ELISA分析抗体能否与天然GarV-B病毒结合。结果显示:GarV-B的CP基因与目前已报道的GarV-B不同分离物CP基因核苷酸序列的同源性为89%～90%,氨基酸序列同源性为92%～93%。表明制备的抗体对GarV-B的CP具有高度特异性,且能够与天然GarV-B病毒粒子结合。因此本研究制备的抗GarV-B的CP血清可以用于该病毒的检测。     

马铃薯卷叶病毒缺失突变CP基因酿酒酵母表达载体的构建

以重组质粒pBAD-LRCP-126为模板,经PCR扩增获得了PLRV缺失突变CP基因的特异性条带。目的片段与pYES2.1/V5-His/-TOPO的连接产物转化大肠杆菌TOP10F′获得了氨苄青霉素抗性菌落,酶切与DNA测序结果确认了酵母表达载体的正确性,该表达载体命名为pYES-LRCP-126。在30℃,酿酒酵母工程菌株INVSc1(pYES-LRCP-126)经2%半乳糖诱导培养16h,SDS-PAGE显示蛋白图谱上有一条23kDa的诱导表达的蛋白条带,其大小与预期的重组CP大小相符,表明PLRV缺失突变基因在酵母菌中实现了表达。     

控释尿素对藏羊瘤胃氨氮和微生物蛋白质的影响

作者旨在探讨控释尿素对藏羊瘤胃氨氮和微生物蛋白质合成的影响。试验选4只2岁藏羊，安装永久性瘤胃瘘管，分期定量饲喂不同粗蛋白质日粮：含尿素日粮（粗蛋白质含量为10.79%）、无尿素日粮（粗蛋白质含量为10.75%）、控释尿素日粮（粗蛋白质含量为10.73%）。结果表明，含尿素日粮瘤胃pH和氨氮浓度在一天中变化较快，而无尿素日粮和控释尿素日粮变化较为平缓，控释尿素日粮微生物蛋白质合成量虽然变化幅度较大，但能量与氨氮释放同步，微生物蛋白质合成量较大，充分把食用氮转化为微生物蛋白质。控释尿素日粮与含尿素日粮、无尿素日粮存在极显著差异（P<0.01），且控释尿素在瘤胃pH、氨氮浓度和微生物蛋白质含量方面均优于含尿素日粮和无尿素日粮，从而表明采用控释尿素日粮对藏羊补饲具有良好的效果，是反刍家畜安全、高效的粗蛋白质营养日粮。     

滇黑两省黄瓜花叶病毒南瓜分离物外壳蛋白基因序列分析

 利用免疫捕捉多聚酶链式反应( Immuno-Capture PCR, IC-PCR) 方法从南瓜的两个黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus, CMV) 云南分离物(CMV-YN) 和黑龙江分离物(CMV-HLJ ) 中扩增获得约700 bp的外壳蛋白(Coat protein, CP) 基因片段, 并克隆到pGEM-T载体中。核苷酸序列测定表明, CMV-HLJ和CMV-YN两个分离物CP基因长为657 bp, 编码219个氨基酸, 两个分离物的核苷酸和氨基酸同源性分别达到96.8%和97.4%。和国外CMV亚组Ⅰ 6个分离物核苷酸序列同源性在90%以上, 氨基酸同源性在97%以上, 和亚组Ⅱ 6个分离物的同源性分别为66.4%和73.4%。和国内亚组Ⅰ10个分离物的核苷酸同源性都在89.5%以上, 氨基酸同源性在93%以上, 而和亚组Ⅱ两个分离物的同源性分别为68.3%和73.5%。序列分析结果表明CMV-HLJ和CMV-YN两个分离物属于CMV亚组Ⅰ。     

应用SSCP技术分析我国柑橘衰退病毒的混合感染

以随机采样的方式,从湖北、湖南和江西3省10县的柑橘产区收集242份温州蜜柑(CitrusunshiuMarc.)、橘(C.reticulataBlanco)、甜橙(C.sinensisOsbeck)和柚(C.grandisOsbeck)样品。对PAS-ELISA法初步检测呈阳性的样品进行柑橘衰退病毒(Citrustristezavirus,CTV)CP基因(coatingproteingene,CPgene)的RT-PCR扩增,结果来自14个样品采集地的120份样品感染了CTV,单个采样点的感染率为20.0%～71.4%,而总感染率达49.6%,表明CTV在这些地区广泛发生。单链构象多态性(single-strandconformationpolymorphism,SSCP)分析显示,120份CTV的CP基因RT-PCR的扩增产物共产生120种SSCP带型,而且存在广泛的混合感染。     

科尔沁沙地敖汉苜蓿地上生物量及营养物质累积

用分层法将苜蓿草层分成A、B、C三层。结果表明,生物量主要集中在B层,A层和C层较少。随着生长发育的进程,B层和C层生物量不断增加,A层生物量相对稳定。从营养期到结实期,B层生物量占总生物量的比例从48.15%增至64.48%,C层由9.88%增至21.06% ,A层则由40.74%降至14.16%。粗蛋白质(CP)含量随着生长的进程不断下降,而中性洗涤纤维(NDF) 含量则不断增加。CP含量从营养期的27.55%降至结实期的14.98%,NDF含量则由30.13%增至53.18%。枝条、叶、花、荚果CP和NDF含量各异,不同层枝条的CP、NDF含量差异较大。     

Dynamic QTL mapping for plant height in the hybrid population of Agropyron Gaertn.

Plant height (PH) plays a very important role for plant breeding and also serves as a model trait to dynamic development study. The dynamic quantitative trait locus (QTL) analysis for PH of Agropyron Gaertn. was carried out in a cross-pollination (CP) hybrid population of A. Gaertn. based on the phenotypic data of PH at different developmental stages in four year-sites and the constructed single-nucleotide polymorphism (SNP) genetic map. The results showed that 69 QTL and nine major QTL were detected by unconditional QTL mapping. A total of 107 QTL and 13 major QTL were found using conditional QTL mapping. Forty-seven QTL were detected by two methods. Two unconditional QTL, Qph2-5 and Qph3-4, were expressed as major and stable QTL for PH. Four major stable conditional QTL for PH, cQph4-1, cQph4-8, cQph6-2 and cQph6-7, were detected. Two conditional PH QTL, cQph3-5 and cQPh3-7, were identified in four environments over multiple stages. The gene/QTL controlling PH was expressed in a certain spatiotemporal manner. These results could also provide a reference for genetic and breeding research of related plant.     

陕北地区马铃薯Y病毒的RT-PCR检测及其序列分析

以陕北地区8个县(区)种植2~3代疑似带毒的马铃薯叶片为材料,Trizol法提取马铃薯叶片总RNA,以已公布的马铃薯Y病毒外壳蛋白(coat protein,CP)基因序列设计1对特异引物,反转录合成cDNA,RT-PCR扩增目的 DNA片段,1.5%的琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物。回收纯化CP基因片段并进行克隆和测序,采用DNAstar软件分析序列一致性。结果显示,所有马铃薯叶片中均扩增到与预期大小一致的、长度为400 bp的目的片段,表明这些马铃薯均感染了Y病毒;陕北8个县(区)马铃薯Y病毒CP基因与国内外其他地区12个样品之间的序列一致性为88.4%~99.8%,表明马铃薯Y病毒的CP基因序列比较保守,不易发生变异。RT-PCR方法可快速、准确地检测马铃薯Y病毒,从而为马铃薯茎尖剥离脱毒生产脱毒种苗(薯)提供依据。     

5～8周龄肉鹅能量和蛋白质营养需要量研究

以商品代豁眼鹅为供试动物,日粮的代谢能(M E)含量设置5个水平,分别为9.61,10.45,11.29,12.12和12.96 M J/kg,粗蛋白(CP)含量分别设为140,160,180和200 g/kg 4个水平,采用5×4因子设计进行饲养实验,研究了日粮能量和粗蛋白水平对肉鹅生产性能和胴体品质的影响。结果表明,(1)日粮M E水平对5~8周龄肉鹅平均日增重影响不显著(P>0.05),但对平均日耗料量和料重比影响极显著(P<0.01);日粮CP水平对5~8周龄肉鹅平均日耗料量和平均日增重影响均不显著(P>0.05),但对料重比影响显著(P<0.05);日粮M E水平为12.12 M J/kg,CP水平为160 g/kg时可获得理想的生产性能;(2)日粮M E和CP水平对肉鹅全净膛率,胸肌率,相对肝重和腿肌率影响均不显著(P>0.05),M E对腹脂率和皮脂率影响极显著(P<0.01),CP对腹脂率影响显著(P<0.05),对皮脂率影响不显著(P>0.05),M E水平与腹脂率和皮脂率间存在很强的正相关关系。通过本试验并结合生产实际认为,5~8周龄肉鹅适宜的能量和粗蛋白营养需要量分别为12.12 M J/kg和160 g/kg。     

区域性阴极保护技术在输气站场中的应用

结合区域性阴极保护技术在鄯乌输气管道中的应用,介绍了输气站场实施阴极保护的技术特点、区域性阴极保护设计以及测试结果.对应用过程中产生的干扰和屏蔽问题进行了分析,并针对不同站场采取相应的改进措施,排除了鄯乌输气管道出现的干扰、屏蔽等问题,为该技术在输气管道站场的成功应用提供了保障.