Transgene expression for Gladiolus plants grown outdoors and in the greenhouse

Transgene expression was evaluated for Gladiolus plants transformed with either the CaMV 35S, double CaMV 35S, rolD, or Arabidopsis UBQ3 promoter controlling the uidA or bean yellow mosaic virus coat protein gene in either the sense or antisense orientation to determine differences in expression for plants grown in the greenhouse and outdoors for two years. There was more variability in GUS expression when plants were grown outdoors than in the greenhouse for two years. Four of the six transformed plant lines with the UBQ3, rolD, and CaMV 35S promoters grown outdoors showed significant differences in GUS expression from year to year as compared to two of the six lines with the UBQ3 and rolD promoters grown in the greenhouse. When grown the same year, two plant lines with the CaMV 35S and one line with the rolD promoter showed 2–16× higher levels of GUS expression outdoors than in the greenhouse, and one plant line with the UBQ3 promoter had 31× higher GUS expression in the greenhouse instead of outdoors. Three of six plant lines transformed with the bean yellow mosaic virus coat protein gene in either the sense or antisense orientation under control of the double CaMV 35S promoter showed obvious transgene expression as compared to three lines that did not show expression or negligible expression for both years when plants were grown both outdoors and in the greenhouse. This study verified long-term gene expression, rather than silencing, for Gladiolus plants when grown outdoors and in the greenhouse from year to year.     

潍坊萝卜中芜菁花叶病毒分离物的分子特性及CP基因的表达

 从表现红心病的潍坊萝卜块根上得到一芜菁花叶病毒( Turnip m osaic virus, TuMV) 分离物(TuMV-Ra) , 通过RT-PCR获得了该分离物的外壳蛋白(CP) 基因, 对其进行了序列测定, 并将其核苷酸序列及推导出的氨基酸序列与GenBank中登录的其它20个TuMV萝卜分离物的相应序列进行比较和分析。结果表明, TuMV-Ra与这20个分离物CP基因核苷酸序列的同源性为89.9% ～99.0% , CP氨基酸序列同源性为94.8%～99.7%; 其中与中国浙江杭州萝卜的两个分离物HZLB1、HZLB2同源性最高, 核苷酸序列的同源性为98.7%和99.0% , 氨基酸序列同源性为99.0%和99.7%。TuMV-Ra与1999年从表现相同症状的潍坊萝卜得到的分离物CHINA-WF CP基因核苷酸同源性为93.66% , 氨基酸同源性为96.53% , 说明病毒发生了比较大的变异, 而且变异的位点主要在CP的N末端。将TuMV-Ra CP基因克隆到原核表达载体pET-22b ( + ) , 在大肠杆菌BL21 (DE3) 中表达出分子量为38 kD的融合蛋白。Western blotting分析证明TuMV-Ra CP在大肠杆菌中得到了正确表达。     

日粮蛋白质水平对4岁马鹿产茸性能的影响

为探讨马鹿日粮蛋白质水平和蛋白质 /代谢能比值对其产茸性能的影响 ,采用 3个蛋白质水平 (分别为Ⅰ :7 60 % ,Ⅱ :1 1 60 % ,Ⅲ :1 5 60 % )日粮的单因子设计 ,将选出的 2 0头健康和上年产茸量相近的 4岁马鹿随机分配到 3个日粮处理组中 (Ⅰ组为 8头 ,其他两组各为 6头 ) ,进行饲养试验。试验结果表明 ,蛋白质水平及蛋白质 /代谢能比值分别为 1 1 60 %、1 3 74g/MJ的日粮处理对产茸性能 (茸重、茸日增重、料茸比等 )的影响效果较好 ,但各组间差异不显著 (P >0 0 5 )。     

微小隐孢子虫子孢子表面蛋白CPl5／60编码基因核酸疫苗的研究

将编码CPl5／60的基因插入真核表达载体pcDNA3( )中构建重组质粒pcDNA3-15／60，然后经鼻粘膜免疫怀孕成年山羊，观察其免疫应答的产生情况及其对后代的保护力。结果为抗CPl5／60抗体存在于免疫山羊的血浆和初乳中。pcDNA3-15／60经鼻粘膜免疫的怀孕山羊产生的免疫力能传给子代，使子代对微小隐孢子虫(Cryptosporidium parvum)感染产生保护。CPl5／60-DNA免疫母羊的后代比非免疫母羊的后代排出卵囊少且排卵时间短。这就表明重组质粒pcDNA3-15／60可作为隐孢子虫候选核酸疫苗。     

以CP23重组蛋白为抗原建立检测微小隐孢子虫抗体间接ELISA方法的研究

摘要：以在E.coli高效表达的微小隐孢子虫子孢子表面抗原CP23为抗原，以辣根过氧化物酶(HRP)标记的山羊抗鼠IgG为二抗，建立了检测微小隐孢子虫抗体的间接ELISA方法。经检测筛选出最佳反应条件为1μg／孔纯化的E.coli表达的CP23抗原包被酶标板，用10％免血清进行封闭，以正常E.coli裂解上清液稀释待检血清。实验表明应用CP23重组蛋白作为诊断C.parvum抗原具有特异性高、抗原易纯化和成本低等特点。     

卵黄中脂肪酸含量的变化对鸡胚组成的影响

对孵化过程中,卵黄囊中各种脂肪酸的含量变化和鸡胚或出壳雏鸡机体的水分、脂肪和蛋白质的含量变化关系进行了两次试验。试验1于入孵的第6,9,12,15,18和21 d测定胚胎或出壳雏的湿重和干重、水分、粗蛋白质和粗脂肪的含量。试验2于入孵的第6,9,1 2,15和18 d测定胚胎的干重、湿重、卵黄脂类和脂肪酸的含量。结果表明试验1:胚体水分含量和胚体蛋白含量呈正相关,但和干胚重、体脂肪含量呈负相关。试验2卵黄中脂类含量和湿胚重、胚胎水分含量、卵黄中亚油酸含量呈正相关。而卵黄中脂类含量和干胚重、相对卵黄重呈负相关。相对干胚重(以入孵蛋重为基础)表现出和硬脂酸呈负相关,孵化过程中胚胎的水分、粗脂肪、粗蛋白含量受来自卵黄脂肪的影响是不同的。胚胎摄取的硬脂酸和亚油酸对胚胎的干物质组成和卵黄的花生四烯酸浓度的影响是不同的。     

番木瓜环斑病毒外壳蛋白基因在大肠杆菌中的表达

番木瓜环斑病毒（PRV）外壳蛋白（CP）基因cDNA克隆到pUC18上构型建成大肠杆菌（Escherichia coli)表达载体，Western blot检测结果表明该表达载体在E.clidDH5α中有两种特异蛋白表达，分子量为34kd的蛋白与推测的表达产物大小相符，且与PRVCP的一个“组分”大小相似；而分子量为16kd的蛋白可能是34kd蛋白的降解物或者是PRV CP基因不完全表达产物。     

芜菁花叶病毒两分离物的CP基因及HC-Pro基因的比较

芜菁花叶病毒杭州分离物(HZWT)和昆明分离物(YNQC)在7种寄主上的致病性相似.利用IC-RT-PCR对两分离物的CP和HC-Pro基因进行PCR扩增,扩增产物克隆后进行序列测定,CP基因序列长度均为864个核苷酸,编码288个氨基酸;HC-Pro基因序列长度均为1374个核苷酸,编码458个氨基酸.两分离物的CP和HC-Pro基因的核苷酸同源率分别为99.3%和94.5%,氨基酸同源率分别为100%和98.7%.HZWT和YNQC的CP基因与已报道的TuMV其他分离物的核苷酸序列同源率为89.2%～99.3%,氨基酸同源率分别为88.5%～99.7%;HC-Pro基因与TuMV其他分离物的核苷酸序列同源率分别为80.6%～97.0%,氨基酸同源率分别为95.0%～99.6%.     

四川地区猕猴桃病毒1的RT-PCR检测及外壳蛋白基因序列分析

为了明确近期新西兰报道的侵染猕猴桃的新病毒——猕猴桃病毒1(Actinidia virus 1,AcV-1)在四川地区猕猴桃上的发生情况及其分子特性,采用RT-PCR对来自四川6个地区疑似感染病毒的90份猕猴桃主栽品种‘红阳’和‘金果’的叶片样品进行检测。结果表明,22份样品为AcV-1阳性,检出率为24.4%。将获得的5个AcV-1分离物和已报道的新西兰分离物K75的外壳蛋白(coatprotein,CP)基因序列进行比对,结果表明,分离物间核苷酸序列和氨基酸序列的相似性分别为84.8%～97.1%和89.7%～99.6%,其中除邛崃分离物HYH5与新西兰分离物K75的核苷酸序列相似性较高(97.1%)外,其余4个分离物均低于91%。系统进化分析结果显示,这些分离物主要聚集在3个分支上,分离物HYH5与新西兰分离物K75位于同一分支,其余分离物位于另外2个分支。     

日粮能量、蛋白水平对生长期蛋鸡生产性能影响规律的研究

选用2周龄海兰白W-36母鸡2000只,研究日粮代谢能(ME)和粗蛋白(CP)水平对生长期蛋鸡生产性能的影响规律。试验分2～8周龄、8～14周龄、14～18周龄和18周龄至50%开产4个阶段进行。试验鸡随机分为10组,每组4个重复,每重复50只鸡。采用3×3(ME×CP)完全随机设计,形成9个试验组,其中,中能中蛋白组ME和CP水平为海兰鸡饲养标准(100%);其它试验组的ME和CP水平分别比中能中蛋白组高或低5%(105%或95%);对照组采用我国鸡的饲养标准(NY/T33—1986)。结果表明:①日粮ME对体重(BW)、采食量(FC)、单位体增重消耗的CP(CPC)、存活率(Livability)和开产日龄(Onset)均有显著影响,随ME水平的提高,鸡的8周龄、14周龄、18周龄BW显著提高(P<0.05);各阶段FC、CPC和2～8周龄、8～14周龄的Livability显著下降(P<0.05),Onset显著提前(P<0.05)。②CP水平在一定范围内(与海兰饲养标准提供的CP水平之比,即RelCP为95%～105%),对BW、FC、单位体增重消耗的ME(MEC)、Livability没有显著影响(P>0.05);但极低的蛋白水平(14～18周龄,对照组CP12%,RelCP85.71%)使得鸡的18周龄BW显著降低(P<0.05),14～18周龄的FC显著提高(P<0.05);CP水平在一定范围内对Onset有显著影响,14～18周龄极低蛋白水平显著提前了Onset;随着CP水平的提高,CPC显著提高(P<0.05)。③试验研究出了日粮ME、CP与BW、FC、Livability以及Onset的回归关系公式。④综合考虑鸡的生产性能和养鸡经济效益,实际生产中不应该选择高能日粮[相对能量水平(RelME)105%]。但是,究竟是选择中能日粮(RelME100%)还是低能日粮(RelME95%),应该根据当时的原料市场价格来决定。日粮蛋白水平以低蛋白(RelCP95%)为宜。