Effective Synthesis and Antifouling Activity of Dolastatin 16 Derivatives

Some derivatives of dolastatin 16, a depsipeptide natural product first obtained from the sea hare Dolabella auricularia, were synthesized through second-generation synthesis of two unusual amino acids, dolaphenvaline and dolamethylleuine. The second-generation synthesis enabled derivatizations such as functionalization of the aromatic ring in dolaphenvaline. The derivatives of fragments and whole structures were evaluated for antifouling activity against the cypris larvae of Amphibalanus amphitrite. Small fragments inhibited the settlement of the cypris larvae at potent to moderate concentrations (EC₅₀ = 0.60-4.62 μg/mL), although dolastatin 16 with a substituent on the aromatic ring (24) was much less potent than dolastatin 16.     

在毕赤酵母中利用口蹄疫病毒(FMDV)2A实现dTomato和串联MagaininⅡ基因的共表达

抗菌肽(antibacterial peptides)是生物体内经诱导产生的一种具有生物活性的多肽,是天然免疫的重要组成部分.为了提高抗菌肽的表达量以及很方便地检测抗菌肽的表达情况,本研究利用口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV) 2A将荧光蛋白dTomato基因和3个串联的MagaininⅡ基因融合到一个开放阅读框中(open reading frame,ORE),融合的基因被置于pPIC9K载体醇氧化酶基因(AOX1)启动子的下游,构建分泌型重组酵母表达载体pPIC9K-dTomato -2A-3M,将线性化的重组酵母表达载体通过电击法转入毕赤酵母(Pichia pastoris )GS115中,经G418筛选和PCR鉴定得到阳性转化子,然后将其转至摇瓶,在30℃、0.5％甲醇的条件下进行诱导表达,连续诱导3d.SDS-PAGE电泳图谱显示,在31 kD(dTomato)和9.5kD(3M)处有蛋白条带出现,在荧光显微镜下观察酵母表达上清发出红色荧光,对大肠杆菌(Escherichia coli)和金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)抑菌试验结果表明,重组抗菌肽串联的MagaininⅡ具有明显的抑菌效果.结果表明,由2A连接的融合基因(荧光蛋白dTomato和串联的MagaininⅡ)在毕赤酵母中成功的进行了表达,FMDV 2A在其C端剪切多聚蛋白,得到dTomato和串联的MagaininⅡ两个独立而有活性的蛋白,为小分子抗菌肽的表达提供一个高效的检测方法.     

奥利亚罗非鱼促性腺激素释放激素cDNA的克隆及原核表达

促性腺激素释放激素(gonadotropin-releasing hormone,GnRH)是下丘脑分泌产生的神经激素,对脊椎动物生殖的调控起重要作用。本研究通过RT-PCR方法从奥利亚罗非鱼丘脑中扩增出长约400 bp的目的序列GnRH,并将其克隆到T载体中,经酶切鉴定、序列测定分析后表明其与尼罗罗非鱼和乌颊海鲷具有较高的同源性,处于同一个进化分支上;而与日本青、金鱼、拟鲤、壁虎等的同源性较低。将此cDNA片段定向克隆到表达载体pMAL-c2x中构建重组表达质粒pMAL-GnRH,转化到大肠杆菌TB1中,0.3M IPTG诱导4 h后成功表达出与预期大小相符的约56 kD的融合蛋白。表明大肠杆菌表达系统可以成功地体外表达奥利亚罗非鱼GnRH,为进一步制备抗体了解其免疫调节作用奠定基础。     

稻瘟菌基因组规模分泌蛋白的预测分析

利用信号肽分析软件SignalP v3．0，亚细胞器蛋白定位软件TargetP v1．01，GPI-锚定位点软件big—PI Predictor和跨膜螺旋结构软件THMM-2．0这4个软件分析预测稻瘟菌12595个蛋白序列中有1134个分泌蛋白。编码这些蛋白的可读框（ORF）最小值为78bp，最大值为7849bp，平均1231bp。引导它们的信号肽长度介于15—45个氨基酸之间，平均为21个氨基酸。435个分泌蛋白具有功能描述，主要是与代谢有关的酶类。分析了其中降解细胞壁组分和与致病相关的酶类，提示在稻瘟菌侵染水稻不同阶段产生的关键酶及基因的功能需进一步研究。     

超声协助提取维药芹菜籽蛋白多肽类物质的研究

采用单因素和正交试验,以磷酸盐缓冲溶液提取并用硫酸铵沉淀芹菜籽中的多肽类成分,且以不同条件下硫酸铵沉淀（80％）的多肽量为考察指标,来确定活性多肽的超声波提取最佳条件。结果表明,芹菜籽中多肽的最佳提取条件为：磷酸盐缓;中溶液pH9．0,超声提取30min,液固比5．0：1（ml：g）,提取的多肽具有较好的清除ABTS自由基的能力。关键词芹菜籽;活性多肽;超声波提取;最佳条件;抗氧化活性     

外源抗菌肽在转基因鱼腥草中的表达及抗茎腐病研究

[目的]鉴定转基因鱼腥草中外源抗菌肽的表达,分析抗茎腐病的能力。[方法]通过SDS—PAG电泳和Westernblot方法检测转基因鱼腥草植株中外源抗菌肽的表达,接种不同浓度的立枯丝核菌孢子,比较转基因植株与非转基因植株的染病情况。[结果]外源抗菌肽能在转基因鱼腥草中表达;立枯丝核菌的最佳侵染孢子浓度为3×105．／ml,观察时间以3d为宜,转基因鱼腥草较非转基因鱼腥草的抗茎腐病能力增强。[结论]外源抗茵肽的表达能增强转基因鱼腥草植株的抗茎腐病能力。     

碱性蛋白酶酶解波纹巴非蛤制备小分子肽

以波纹巴非蛤为原料,用碱性蛋白酶酶解波纹巴非蛤肉蛋白制备小分子肽,并运用响应面方法设计优化波纹巴非蛤酶解的工艺条件。结果表明:在pH值6.5、液固比为3∶1、酶含量为2.50%、酶解温度为50.4℃、酶解时间122.60 min的条件下,小分子肽的提取率最高、为63.04%。     

低氧条件下甘肃鼢鼠鼻黏膜内含SP及CGRP的免疫反应纤维长度变化

运用免疫组织化学方法对比了常氧条件下与低氧条件下甘肃鼢鼠鼻黏膜内含P物质(SP)及降钙素基因相关肽(CGRP)的神经纤维平均长度的变化情况。结果表明,甘肃鼢鼠在低氧条件下,鼻腔嗅黏膜内含SP及CGRP的免疫反应纤维的平均长度与常氧条件下的比率分别为0.97和1.09,呼吸黏膜的比率分别为1.20和1.22,明显小于SD大鼠的相应比率,但差异均未达极显著水平(0.01相似文献   

杂合抗菌肽Cec Md-CheRc的分子设计及其克隆载体的构建

为了获得具有高抗菌活性和低溶血活性的抗菌肽,利用家蝇抗菌肽Cec Md和中国林蛙抗菌肽Chensirin,设计出杂合抗菌肽Cec Md-Che Rc,并构其克隆载体。选取Cec Md的N端和Chensirin的C端氨基酸序列组成杂合肽,通过互联网和计算机软件,分析比较杂合肽的特征参数并进行结构预测。采用重复序列PCR方法合成2条杂合肽Cec Md-Che Rc I和Cec Md-Che Rc IV的基因,并连接到克隆载体pMD18-T上。分析发现杂合抗菌肽中Cec Md-Che Rc I疏水性最强,Cec Md-Che Rc IV净正电荷数最高;两者N端为疏水性α螺旋结构,C端为亲水性α螺旋结构;两者疏水性氨基酸大体分布在螺旋轮的一侧,其余氨基酸分布在另一侧;带正电荷的氨基酸主要分布在亲水面上。2条杂合肽的基因大小分别为133 bp和124 bp;PCR、双酶切和测序鉴定表明成功地构建了克隆载体pMD18-T/Cec Md-Che Rc I和pMD18-T/Cec Md-Che Rc IV,为后续研究奠定了基础。     

大豆肽的生理功能和制备工艺

大豆肽是大豆蛋白质的水解产物,主要功能性营养物质包括多肽、寡肽、游离氨基酸和糖类,其相对分子质量低,易于消化吸收。丰富的小肽能调节矿物质、脂类代谢,降低胆固醇,提高免疫力。文章综述了大豆肽的生理功能和制备工艺。