基于乌金猪深度发掘的优质高效新品种选育

目的揭示宣和猪PRKAG3基因外显子5多态性及其与肉质性状的关联。方法采用PCR产物直接测序法检测了120头宣和猪PRKAG3基因外显子5区域的SNP位点,借助最小二乘模型分析了各位点不同基因型及合并基因型对6个肉质性状的影响。结果宣和猪PRKAG3基因外显子5区域检出3个SNP位点,包括2个同义突变位点(T579C、T580C)和1个错义突变位点(G595A),分别以TT、TT、GA基因型和T、T、G等位基因的频率最高,且都处于Hardy-Weinberg平衡状态。T579C、T580C位点的TT和TC基因型可显著提高大理石纹(P<0.05)和降低失水率(P<0.01),分别呈显著的加性效应及加性—显性效应(P<0.05或P<0.01);G595A位点的AA基因型失水率最低(P<0.05)、熟肉率最高(P<0.05),呈显著的加性效应(P<0.05);3个位点的合并基因型TTTTGG、TCTCGG和TTTTAA分别具有最高的大理石纹、pH₁和最低的失水率(P<0.05或P<0.01),CCCCGG基因型的大理石纹和pH₁最低、失水率最高(P<0.05或P<0.01)。结论研究结果进一步确认宣和猪PRKAG3基因外显子5多态性与肌肉大理石纹、pH值和失水率显著关联,T579C、T580C位点的CC基因型和G595A位点的GG基因型具有协同降低猪肉品质的效应。     

14-3-3蛋程中的互作靶蛋白鉴定及其对外源激素的响应

【目的】籽粒灌浆对水稻产量及品质的形成至关重要。14-3-3蛋白是一种信号转导调节因子,在植物生长发育中发挥着重要调控作用。本研究通过分析14-3-3蛋白家族在籽粒灌浆过程中的基因表达模式及其互作靶蛋白,从而揭示其在籽粒灌浆过程中的功能。【方法】利用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）技术分析水稻14-3-3基因家族在籽粒灌浆过程中的表达变化模式,并从中选取GF14b及GF14e进行后续的蛋白功能分析。利用KEGG数据库对GF14b及GF14e蛋白功能motif位点进行分析;构建GST-GF14b及GST-GF14e表达载体,利用亲和层析技术分别钓取籽粒中与GF14b及GF14e互作的靶蛋白,并借助LC-MS/MS对靶蛋白进行鉴定。采用GST pull-down方法验证靶蛋白与GF14b及GF14e间的蛋白互作关系。利用Kinasephos在线程序对靶蛋白的Ser和Thr磷酸化位点进行预测;采用MapMan 3.6.0软件对靶蛋白的功能及参与的代谢过程进行分析。在籽粒灌浆期（花后15 d）,分别喷施25×10^-6mol·L^-1 ABA,10×10^-6mol·L^-1 IAA,100×10^-6mol·L^-1 GA,50×10^-6mol·L^-1 ZR和 2×10^-4mol·L^-1 BR,研究外源激素处理对籽粒灌浆过程中GF14b,GF14e及其互作靶基因表达的影响。【结果】14-3-3家族基因中,除GF14h外,其余7个家族成员在水稻籽粒中均有表达,其中GF14b及GF14e在籽粒灌浆过程中的表达水平较高且变化幅度较大。通过蛋白序列分析发现,GF14b与GF14e间具有3个相同,2个差异的motif功能位点。通过亲和层析试验,在籽粒中共鉴定到59个与GF14b和72个与GF14e互作的靶蛋白,其中有43个靶蛋白与2个成员均有互作,分别有16个和29个靶蛋白与GF14b和GF14e特异结合。随机选取2个靶蛋白进行体外蛋白互作验证,结果表明靶蛋白SUS3与GF14b和GF14e均存在互作关系,而靶蛋白PSA仅与GF14e有相互作用关系,验证了亲和层析结果的准确性。蛋白功能的分析表明,GF14b和GF14e通过与靶蛋白的结合,共同参与了籽粒灌浆过程中蔗糖转化、淀粉合成、糖酵解、TCA循环等碳代谢途径。同时,GF14b及GF14e还具有特异的调控功能,其中GF14b与核酸代谢及物质转运密切相关,而GF14e与C1代谢中的关键蛋白存在互作。此外,大部分靶蛋白均鉴定到具有潜在的Ser和Thr磷酸化位点。外源激素处理下,籽粒中GF14b和GF14e上调表达,而与淀粉合成代谢相关的靶基因（SUS2、 AGPS、AGPL、PPDK2、SBE）大部分呈下调表达的趋势。【结论】14-3-3基因家族成员GF14b和GF14e在水稻籽粒灌浆过程中的表达变化幅度较大,且会响应激素浓度的改变,并通过蛋白互作的形式负调控淀粉合成代谢相关基因的表达,从而对水稻籽粒淀粉的合成起到重要的调控作用。     

Identification of Neofabraea species causing bull's eye rot of apple in Poland and their direct detection in apple fruit using multiplex PCR

Based on partial sequence analysis of the β‐tubulin gene, 19 isolates of fungi causing bull's eye rot on apple in Poland were classified into species: Neofabraea alba, N. perennans and N. kienholzii. To the authors’ knowledge, the detection of N. kienholzii is the second in Europe and the first in Poland. Species affiliation of these fungi was confirmed by a new species‐specific multiplex PCR assay developed on the basis of previously published methods. The new protocol allowed for the specific identification of bull's eye rot‐causing species, both from pure cultures and directly from the skin of diseased or apparently healthy apples. In 550 samples of diseased fruits collected from nine cold storage rooms located in three regions of Poland, in 2011 and 2012, N. alba was detected as the predominant species causing bull's eye rot, occurring on average in 94% of the tested samples. Neofabraea perennans was found in a minority of apple samples, N. kienholzii was found only in two apple samples, while N. malicorticis was not detected in any sample tested. In tests on 120 apparently healthy fruits, only N. perennans was detected in a single sample. The results of genetic diversity analyses of bull's eye rot‐causing fungi based on the β‐tubulin gene sequence and an ISSR (inter‐simple sequence repeat) PCR assay with two primers were consistent, showing the expected segregation of tested isolates with respect to their species boundaries. However, the genetic distance between N. perennans and N. malicorticis was very low, as reported previously.     

植物内源激素对小麦叶片衰老的调控机理研究

对小麦灌浆期不同叶位叶片的５大类激素含量测定结果表明,正在衰老叶片的乙烯和脱落酸（ＡＢＡ）含量明显增加,前期和中期的功能期叶片细胞分裂素（玉米素和玉米素核苷,Ｚ＋ＺＲ）和赤霉素（ＧＡ３）含量较高,生长素（ＩＡＡ）在功能期和后期衰老的叶片中含量较高。因此可以将这４种激素分为２大类,即乙烯和ＡＢＡ诱发和促进叶片衰老,另一类的Ｚ＋ＺＲ和ＧＡ３则维持叶片功能,抑制衰老。但ＩＡＡ表现了具有前期保持叶片生长发育和后期促进衰老的双重作用,在不同叶片中,春６叶（旗叶）则比较复杂。旗叶与睛相比表现了特殊性,这可能与其特殊的功能有关。     

猪圆环病毒2型ORF3基因的克隆及原核表达

以细胞总基因组提取试剂盒抽提PCV2细胞毒株总DNA为模板,用特异性引物扩增PCV2 ORF3基因。将ORF3和表达载体pGEX-6p-1用BamH I和Sal I双酶切回收后连接,将测序验证为阳性的重组质粒命名为pGEX-6p-1-ORF3。重组质粒pGEX-6p-1-ORF3转化BL21(DE3)后用IPTG诱导表达并纯化,对获得的表达产物进行SDS-PAGE电泳、Western blot检测。结果表明:PCV2 ORF3在pGEX-6p-1中获得了高效表达,其表达蛋白主要以包涵体形式存在,其分子质量约为37 kD,且能够和PCV2阳性血清发生特异性相互作用,具有免疫学活性。     

基于FLAC^3D的某碎石土边坡地震反应分析

基于完全非线性的动力分析方法,利用FLAC3D软件对西南某碎石土边坡在地震下的稳定性进行分析。分析表明：地震作用下,边坡坡面的水平向永久位移最大,并由坡面向坡内逐渐减小;边坡的加速度时程与场地输入的PGA相比均有一定程度的放大;在边坡上随着高程的增加,水平方向向坡外的位移大小变化受边坡结构面的控制影响较大。研究结果有助于进一步探讨复杂边坡地震下的失稳机制。     

三维CAD技术在机械设计中的应用

现代计算机在技术和性能上越发成熟,再加之网络的普及和信息的智能化处理技术的提高,三维CAD技术本身也正逐步成熟,因此,正确地把握CAD技术的发展趋势对我国机械工程中的设计工作具有深远的意义.     

基于工业CT的水泵叶轮三维实体重建

为实现水泵叶轮三维实体重建,利用工业CT获取含有叶轮原型内部构造信息的高精度断层切片图像,并编程实现切片图像RAW数据格式到BMP格式的转换.在VC++6.0平台上,应用MFC、OpenGL、ADO等,通过断层图像预处理、二维图像处理及二维几何处理等数字图像处理技术去除图像噪声并显著提高了图像清晰度;编程完成了叶轮断层...     

巧用AutoCAD软件的“三维旋转”命令绘制实体课件

巧妙地应用AutoCAD软件的＂三维旋转＂命令,可以方便快捷地绘制带有倾斜结构及局部剖结构的实体课件,并用两个实例说明了具体的应用方法。     

基于3G通信与GPS技术的农机视频监控系统研究

针对现代化大农机发展的需求,研究了如何将3G通信技术与GPS定位技术相结合,建立农机视频监控系统,用于现代化大农机管理。采用WebGIS技术为基础,以B/S结构进行开发建设,为农机综合管理监控提供了新思路、新手段。