奶牛性别控制人工授精的操作要点

奶牛性控技术是根据牛精液中X染色体和Y染色体的DNA含量不同,采用流式细胞仪对其进行有效分离,将含X染色体的精液分装冷冻后用于人工授精,其后代产母犊率达90%以上,实现了奶牛快繁扩群的目的。由于用于生产性控冻精的种公牛是经过后测或验证的,因此其后代产奶量高,加快了牛群遗传改良速度,对转变奶牛生产潜力、提高养殖效益具有现实意义。     

鸡13号染色体比较图谱的改进（完善）

鸡13号染色体(GGA13)与人类5号染色体(HSA5)的一部分构成比较图谱。用GGA13特异性微卫星标记扫瞄Wageningen鸡细菌人工染色体(BAC)文库。所选BAC克隆最终被测序，57个STS位标被用来构建克隆重叠群。在GGAl3上衷情共检测到了204个BAC克隆，这些克隆约20％是重叠的。基因检测采用双向式方法院。首先从已经不定位的鸡BAC亚克隆序列开始，通过BLAST数据库工具，检测人类和小鼠折同源基因。第2步在人在HSA5q23-q35区域寻找与鸡同源的人类基因。接着用荧光原位杂交(FISH)或SNP方法将鸡的同源基因定位。本研究的比较图谱改进之处在于，使GGAl3上定位的基因数从14增加到20；GGAl3染色体定位的基因有人类HSA5q23-q35，小鼠Mull、Mull3、Mul8染色体上的同源基因。     

超强毒法氏囊病毒GX8／99株细胞克隆化毒的致病性试验

本试验以一株传染性法氏囊病症毒超强毒广西株（GX8/99）的细胞克隆化毒感染28日龄SPF雏鸡进行致病性试验，以确定GX8/99株原始毒与细胞克隆化毒的致病性的变化，结果表明GX8/99株细胞克隆化毒在适应细胞后仍能引起一定的组织学病变，免疫指数也较正常雏鸡有所变化，但病变程度远远小于原始毒攻毒组，且对鸡致死率明显降低。说明GX8/99株细胞克隆化毒致病性有降低的趋势。     

盐碱胁迫对华蒲公英质膜ATP酶和5'-核苷酸酶的影响

研究华蒲公英(Taraxacum sinicum Kitag.)分别在4种盐碱(NaCl、Na2SO4、Na2CO3、NaHCO3)胁迫下,PM-ATPase活性和质膜5′-AMPase活性变化,探讨华蒲公英在不同盐碱胁迫下生理生化的变化,并对其耐盐碱性进行评价.结果表明:华蒲公英体内PM-ATPase和质膜5′-AMPase活性都随着盐浓度的增加先升高后降低,但不同种类盐碱胁迫下存在差异;在盐碱胁迫下,华蒲公英根系首先对逆境作出了积极地反映,而叶片对盐碱胁迫的调节能力强于根系;华蒲公英耐盐碱顺序为NaCl＞Na2SO4＞NaHCO3＞Na2CO3.     

荞麦花粉甲醇提取物对羟基自由基致DNA损伤的保护作用

【目的】研究荞麦花粉甲醇提取物的抗氧化作用。【方法】以羟基自由基诱导2-脱氧核糖和pBR322DNA氧化损伤为模型,研究荞麦花粉甲醇提取物对羟基自由基致DNA氧化损伤的保护作用。【结果】荞麦花粉甲醇提取物的还原力,Fe2+的络合能力和对羟基自由基的清除能力均与其在反应体系中的含量成正相关。【结论】荞麦花粉是一种有效的羟基自由基清除剂;且在体外环境,对羟基自由基氧化损伤的pBR322 DNA有保护作用。     

白头翁汤及其主要成分对LPS诱导内皮细胞分泌NO、E-selectin和IL-8的影响

拟探讨白头翁汤及其主要成分对细菌内毒素(LPS)导致的机体炎症等病理损伤的治疗作用.培养内皮细胞至单层融合状态,加入内毒素刺激,3h后加入高、中、低3种浓度的8种药物,继续培养21 h后收集细胞上清液,用ELISA方法测定NO、E-selectin和IL-8的含量.结果显示,白头翁汤高剂量组、白头翁素高剂量组和小檗碱高剂量组的NO含量极显著低于LPS对照组(P＜0.01),白头翁汤中剂量组、白头翁素中剂量组、小檗碱中剂量组和秦皮乙素高剂量组显著低于LPS对照组(P＜0.05);白头翁汤高剂量组和药根碱高剂量组的E-selectin含量极显著低于LPS对照组(P＜0.01),白头翁皂苷B4高剂量组、小檗碱高剂量组和药根碱中剂量组显著低于LPS对照组(P＜0.05);秦皮乙素高剂量组的IL-8含量极显著低于LPS对照组(P＜0.01),白头翁汤高剂量组、秦皮甲素高剂量组和中剂量组、秦皮乙素中剂量组显著低于LPS对照组(P＜0.05).结果提示白头翁汤及其主要成分具有明显的抗细菌内毒素作用,可在由NO、E-selectin和IL-8介导的机体炎症等病理损伤过程中发挥治疗作用.     

Association of Polymorphisms in the 5'Regulator Region of the VIPR-1 Gene with Chicken Broodiness

本研究旨在探索血管活性肠肽Ⅰ型受体(Vasoacitve intestinal peptide type Ⅰ receptor,VIPR-1)基因5'调控区(-496～-1 bp)多态性及其单倍型效应对鸡就巢性的影响,寻找影响肉鸡就巢性的分子标记,为降低或者剔除肉鸡就巢行为的育种研究提供相应依据.采用测序技术对498只清远麻鸡VIPR-1基因5'调控区进行多态性检测及基因型分析,利用最小二乘均数对VIPR-1基因5'调控区的多态位点与就巢性状进行相关分析,利用PHASE软件对多态位点进行单倍型分析.结果,VIPR-1基因5'调控区存在12个多态性位点,G-359T、G-266T、A-134G、A-94G、C-72G对18～43周龄的就巢持续天数影响达到显著水平(P＜0.05),A-94G位点对18～54周龄的就巢率的影响达到显著水平(P＜0.05);构建的单倍型对18～54周龄的就巢持续天数的影响达到极显著水平(P＜0.01).最小二乘分析结果表明,CCTGGGAAC,CAG/TTGGGGAAGCAC型个体的就巢持续天数比其它单倍型个体极显著的延长(P＜0.01).结果表明,VIPR-1基因5'调控区(-496～-1 bp)可能存在影响鸡就巢行为的分子标记,CCTGGGAAGCAG/TTGGGGAAGCAC型个体对鸡就巢性具有较大的遗传效应,可作为分子标记应用于家鸡就巢行为的筛选.     

蔗糖密度梯度法定量口蹄疫完整病毒粒子（146S）的特异性研究

为验证蔗糖密度梯度法检测口蹄疫完整病毒粒子（146S）的特异性,选择pH值6．0、5．0、4．0PBS酸解处理3批提纯后的146S灭活抗原液,并将酸解后样品进行146S检测,发现8至11级份OD259峰值消失,146S含量由酸解前的1．77、6．60、3．67μg／mL至酸解后完全不能检测到。同时对3批不含病毒的细胞液按抗原纯化灭活工艺处理后进行146S检测,结果显示3批细胞液在8至11级份均没有明显吸收峰,而且其OD259值与PBS空白对照OD259值基本平行一致,说明不含病毒的细胞液对检测结果没有明显干扰。试验证明,蔗糖密度梯度法定量FMD病毒液中146S含量具有很好的特异性。     

pVAX1/SjTSP2 DNA疫苗免疫预防小鼠日本血吸虫病的效果评估

为评估SjTSP2分子作为日本血吸虫DNA疫苗候选抗原分子的潜力,本实验扩增了编码该分子的DNA片段,构建了重组真核质粒pVAX1/SjTSP2,检测其在哺乳动物细胞中表达情况后,通过基因枪轰击法免疫小鼠,应用ELISA、流式细胞术等检测重组质粒诱导的免疫反应,计算减虫减卵率,评估对小鼠日本血吸虫病的免疫保护效果。间接免疫荧光试验结果显示该质粒能在293T细胞中表达。质粒免疫小鼠诱导了显著升高的特异性IgG抗体和IFN-γ、IL-4等细胞因子。小鼠免疫保护试验结果表明,免疫组小鼠虫荷数较PBS对照组增加12.4%(P=0.368),但肝组织虫卵减少10.01%(P=0.486)。说明制备的DNA疫苗能刺激小鼠产生较强的免疫反应,但诱导的免疫保护作用并不理想,为血吸虫DNA疫苗研究提供了参考数据。     

PEDV和TGEV双基因共表达载体pVAXD-PS1-TS的构建及体外表达

采用RT-PCR扩增猪传染性肠胃炎病毒（TGEV）SC-H株S基因N端主要抗原位点片段（大小约为1 916bp）和猪流行性腹泻病毒（PEDV）SC-L株S1基因（大小约为2 367bp）,插入pMDl9-T simple载体,经酶切与测序鉴定后,构建重组质粒pMD19-T-TS与pMD19-T-PS1。从T载体上将PS1、TS基因切下,以亚克隆方法插入双启动子真核表达载体pVAXD,构建能同时表达TGEV S基因和PEDV S1基因的重组质粒pVAXD-PS1-TS。对重组质粒进行PCR与酶切鉴定后,以脂质体转染法转染COS7细胞,间接免疫荧光检测转染后细胞外源基因的表达情况。结果表明,重组质粒构建正确且能够在COS7细胞中得到表达,转染的细胞呈现特异性荧光。真核表达质粒pVAXD-PS1-TS的成功构建为进一步研究PEDV和TGEV的二联核酸疫苗奠定了基础。