我国猪群中TTV的鉴定及其分子流行病学分析

为了确定Torque teno virus(TTV)在我国猪群中是否存在及其感染情况,本研究利用套式PCR方法首次检测了来自广东、福建和江西等7个省份的258份血液样品和组织样品.结果表明猪群中TTV1和TTV2感染总阳性卒分别为37.6%和82.6%.两者的混合感染率为38.4%.挑选部分阳性样品用套式PCR引物扩增出TTV1和TTV2的部分非编码区(UTR)片段,并将扩增出的部分UTR基因与已报道的TTV1和TTV2病毒UTR序列进行比较分析,同时我们选择了8份阳性样品进行了TTV1和TTV2的全长基因的扩增和克隆.分析结果显示TTV可分为TTV1和TTV2两大分支,其中我们分离获得的TTV1和TTV2之间的UTR核苷酸同源性分别为80.8%～98.5%和94.2%～100%,而与参考株相比同源性分别为82.7%～100%和95.5%～99.1%.本研究首次证实在我国猪群中存在TTV感染,提示我们对猪群感染的TTV是一个不容忽视的新病原.     

雌激素对去卵巢大鼠大脑皮质和海马中Bcl-2和Bax蛋白表达的影响

利用免疫组织化学超敏SP法检测SD大鼠摘除卵巢及外源性17β-雌二醇治疗后大脑皮质和海马中Bcl-2和Bax蛋白表达的变化.结果显示,摘除双侧卵巢后,大鼠大脑皮质和海马中Bcl-2不同程度降低,而Bax的表达出现不同程度的上升,17β-雌二醇治疗后,2种蛋白的表达基本恢复正常.表明雌激素能够不同程度的上调大脑皮质和海马中Bcl-2蛋白的表达,下调Bax蛋白的表达,从而对大脑皮质及海马神经元具有保护作用.     

猪圆环病毒2型云南株分离鉴定及ORF2序列分析

本研究根据GenBank中已经发表的猪圆环病毒2型基因序列,设计了2对PCV2特异性引物,从疑似断奶仔猪多系统衰竭综合征(postweaning multisystemic wasting syndrome,PMWS)感染病例中检测出3株云南省PCV2流行株,通过ve-ro细胞分离病毒,并用透射电子显微镜观察到了约17nm的病毒样粒子的存在。经同源性比较分析,3个分离株之间核苷酸同源性为99.5%～99.8%,与甘肃省PCV2分离株核苷酸同源性最低(90.7%),浙江省分离株核苷酸同源性最高(99.7%),与南美洲分离株核苷酸同源性最低(92.0%),瑞典分离株核苷酸同源性最高(99.4%),这可能与云南省猪种引进有关。     

猪圆环病毒2型感染细胞凋亡研究进展

细胞凋亡是多种因素调节的细胞主动死亡过程,细胞凋亡的两条主要通路分别是死亡受体介导的凋亡途径和线粒体凋亡途径,但它们共同的凋亡效应物为胱冬酶;理化因素如放射线、紫外线和高温等及生物学因素如基因表达产物、酶和细胞因子等都影响细胞的凋亡。肿瘤坏死因子和胱冬酶在猪圆环病毒2型感染细胞凋亡中起着非常重要的作用;p53诱导环-H2J、un氨基端激酶,NF-κB等均参与细胞凋亡。生产中,可采用猪圆环病毒2型疫苗免疫,干扰RNA的使用和减少应激等措施降低PCV-2感染,抑制细胞凋亡。     

胆酸负荷对妊娠后期绵羊母体和胎儿血浆IGF—2及其代谢物水平的影响

以绵羊及其胎儿为试验对象，研究了胆酸负荷对妊娠后期母体和胎儿血浆胰岛素样生长因子－2(in-sulin-like growth factor-2,IGF-2）及其代谢物水平的影响。将7只确知妊娠时间的绵羊分为试验组5只和对照组2只，试验前装置颈静脉瘘，在妊娠90h和104d2闪给试验组静脉灌注胆酸盐1．1mg/kg，给对照组静脉灌注等量生理盐水，妊娠120d时手术安装胎儿后肢胫前动脉血管瘘。每天采胎儿和母体的血样，分离血浆，测定血浆IGF－2和主要代谢物水平。同时测定胎儿出生时生长发育指标。结果表明：（1）试验组母羊IGF－2水平低于对照组，相反其胎儿IGF－2水平却高于对照组（P＜0．05）；（2）试验组母羊的总蛋白和乳酸水平分别比对照组35．64％；（3）试验组胎儿出生重比对照组小29．00％，胎龄短7．50d。因此认为，胆酸重复灌注可引起妊娠绵羊早产和胎儿出生重降低，而这可能与IGF－2和主要代谢物水平变化有关。     

Detection of γ-H2AX,a Biomarker for DNA Double-strand Breaks,in Urinary Bladders of N -Butyl- N -(4-Hydroxybutyl)-Nitrosamine-Treated Rats

To evaluate the potential role of DNA repair in bladder carcinogenesis, we performed an immunohistochemical analysis of expression of various DNA repair enzymes and γ-H2AX, a high-sensitivity marker of DNA double-strand breaks, in the urothelium of male F344 rats treated with N-butyl-N-(4-hydroxybutyl)-nitrosamine (BBN), a bladder-specific carcinogen. Our results clearly demonstrated that γ-H2AX aggregation was specifically generated in nuclei of bladder epithelial cells of BBN-treated rats, which was not found in untreated controls or mesenchymal cells. γ-H2AX-positive cells were detected not only in hyperplastic and neoplastic areas but also in the normal-like urothelium after BBN treatment. These data indicate that γ-H2AX has potential as a useful biomarker for early detection of genotoxicity in the rat urinary bladder. To the best of our knowledge, this is the first report demonstrating expression of γ-H2AX during bladder carcinogenesis.     

用PCR方法检测猪圆环病毒Ⅱ型

建立了一种能特异性地扩增猪圆环病毒 型 (porcine circovirus type 2 ,PCV- 2 )核酸片段的 PCR方法 ,从疑似断奶猪多系统衰竭综合征 (PMWS)的感染病例的淋巴结和脾脏中扩增出了预期长度的 PCV- 2 DNA片段 ,用限制性内切酶 Eco R 酶切鉴定了 PCR产物的特异性。 PCR产物的核苷酸序列分析表明 ,与已报道的 PCV- 2 (Gen Bank Ac-cession num ber AF0 2 72 17)相关区域的核苷酸序列同源性均大于 96 %。首次证实了我国猪群中存在 PCV- 2感染的PMWS。     

鸡Bcl-2基因的克隆及其对卵泡颗粒细胞凋亡的影响

将鸡的 Bcl- 2基因克隆到真核表达载体 JL V中 ,构建了重组质粒 JL VB。 0 .2μg/孔 JL VB重组质粒经脂质体介导转染卵泡颗粒细胞 ,应用流式细胞术等方法分析了转染 Bcl- 2基因后原代细胞和传代细胞的生长与凋亡情况。与对照组相比 ,转染后的传代细胞分裂速度较快 (P<0 .0 1) ,凋亡比率较低 ,G2 / M S期细胞比例极显著高于对照组 (P<0 .0 1)。这些结果表明 ,Bcl- 2基因具有促进细胞分裂、抑制细胞凋亡、延长细胞寿命的作用 ,这种作用是直接的。在转染时间为 12 h、DNA量为 0 .3μg/孔的条件下 ,较好的脂质体介导用量为 1.2 μL/孔。     

稳定表达猪圆环病毒2型Cap蛋白的CHO-K1细胞系的建立及免疫原性分析

建立高表达PCV2-Cap蛋白的CHO-K1悬浮稳转细胞系,鉴定蛋白的免疫原性,为开发新型且有效防治猪圆环病毒的亚单位疫苗奠定基础。构建重组质粒pEE12.4-PCV2-Cap,转染CHO-K1细胞,通过加压筛选,有限稀释,细胞悬浮驯化及Western blot检测得到高表达Cap蛋白的悬浮稳转单克隆细胞株,并对该细胞株进行发酵,纯化得到的目的蛋白,通过小鼠免疫验证其免疫原性。结果表明PCV2-Cap蛋白能够在CHO-K1细胞中正确表达;发酵过程中活细胞密度高达6×10~6个·mL^-1,细胞活力在80%以上,PCV2-Cap蛋白表达量约为370 mg·L^-1;利用间接ELISA检测小鼠免疫后血清中的抗体水平,证明了利用CHO-K1细胞生产的Cap蛋白具备良好的免疫原性。本研究成功构建了表达PCV2-Cap蛋白的CHO-K1悬浮稳转细胞系,并进一步对目的蛋白进行免疫原性分析,为猪圆环病毒亚单位疫苗的开发打下扎实的基础。     

2018年中国部分地区猪瘟病毒2.1d亚型新流行株的基因组特征分析

为了解中国猪瘟病毒（classical swine fever virus,CSFV）的分子流行病学及遗传变异情况,本研究应用RT-PCR方法对2018年采集自河南、河北、山东、黑龙江和辽宁5个省份的350份疑似CSFV感染的病料进行E2和NS5B基因扩增,并对PCR产物进行测序和序列分析。结果显示,350份样品中21份为CSFV阳性,共获得14株CSFV的E2基因序列和7株CSFV的部分NS5B基因序列。E2全基因、NS5B部分基因序列分析表明,21份阳性样品均属于近年来在中国流行的CSFV 2.1d亚型,且新发现的2.1d亚型CSFV与中国较早2.1d亚型CSFV毒株间同源性差异不大,新发现的2.1d亚型CSFV分离株在E2基因的6个氨基酸（R³¹、S³⁴、W¹⁸²、K²⁰⁵、K³⁰³、A³³¹）上具有相同的分子特征,E2蛋白中15个位点上的半胱氨酸均未发生变异。韩国2.1d亚型CSFV在E2蛋白上具有3个独特的氨基酸（N⁹⁷、K¹⁵⁹、R²⁰⁵）特征,并且发现了韩国毒株YC11WB可能作为2.1b和2.1d亚型CSFV过渡毒株的证据,流行于中国和韩国的2.1d亚型CSFV可能分别来自于本国早期2.1b亚型CSFV的衍化。本研究证实,2018年中国及周边国家CSFV较为活跃,且流行毒株依然以2.1d亚型为主,为中国科学防控CSFV提供了依据。