棘豆链格孢P5CR基因的克隆及表达分析

在一些可合成苦马豆素(SW)的真菌中，吡咯啉-5-羧酸还原酶(P5CR)可催化哌啶酸(PA)的生物合成。为了研究P5CR基因对真菌苦马豆素合成的影响，本试验克隆了小花棘豆内生真菌棘豆链格孢(Alternaria oxytropis) OW7.8的P5CR基因，并对其进行生物信息学预测；利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术分析不同培养时间(23 d、26 d、29 d、32 d)下处理组[培养基添加L-哌啶酸(L-PA)]和对照组菌丝体中P5CR基因表达水平；利用高效液相色谱-质谱联用(HPLC-MS)技术检测菌丝体中苦马豆素水平。预测结果显示，P5CR基因序列从ATG到TAG为1 179 bp,开放阅读框(ORF)长954 bp,有1个内含子，编码317个氨基酸，分子量为33 297.32 D,等电点为6.14,是稳定疏水性蛋白，无信号肽，可能有跨膜结构域，二级结构主要以随机卷曲为主。qRT-PCR结果显示，随培养时间延长，处理组P5CR基因表达水平先下降后上升，对照组P5CR基因表达水平逐渐下降。HPLC-MS结果显示，处理组菌丝体中苦马豆素水平均高于对照组(P<0.0...     

镉胁迫对黄鳝醛酮还原酶基因表达的影响

采用RACE-PCR技术获取黄鳝醛酮还原酶(Eakr)基因5′cDNA末端和3′cDNA末端，采用基因特异性引物扩增其内含子序列，获得其基因结构；将黄鳝养殖在15 mg/L CdCl₂的曝气水中，分析Cd²⁺处理对Eakr基因表达的影响；采用液体培养和斑点展示法，比较重组Eakr基因菌株和阴性对照菌株在Cd²⁺暴露下的存活率及生长活力。研究结果表明，Eakr基因全长4468 bp,包含1026 bp的开放阅读框，编码341个氨基酸，5′端非编码区74 bp, 3′端非编码区195 bp。荧光定量PCR检测发现，Eakr基因在黄鳝的脑、血细胞、心脏、肠道、肾脏、肝脏、肌肉、性腺、皮肤、脾脏、胃中均有表达，在肝脏中表达水平最高(P<0.05)。Cd²⁺胁迫下，肝脏中Eakr基因与Nrf2基因mRNA表达水平均显著上升；在各检测时间点，Eakr基因表达水平相比对照组均差异极显著(P<0.001),而Nrf2基因表达水平在处理后6、9、12 h差异极显著(P<0.001);含Eakr基因的...