高盐胁迫下大弹涂鱼MHC Iα基因对病毒拟似物poly(I:C)的免疫反应

主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex, MHC)是一类编码细胞表面糖蛋白的基因,在所有硬骨鱼的适应性免疫系统中起着至关重要的作用,而关于 MHC 基因的研究一直是鱼类分子免疫学和鱼类抗病辅助育种的研究热点之一。本研究首次分析了大弹涂鱼(Boleophthalmus pectinirostris) MHC Iα基因的 cDNA 序列特征,构建了系统发生树,评估了大弹涂鱼 MHC Iα基因 mRNA在健康个体不同组织中的表达差异,研究了注射病毒拟似物 poly(I:C)后 MHC Iα基因在机体主要免疫器官肝和脾的表达情况。结果显示,大弹涂鱼 MHC Iα基因具有由1101 个碱基组成的开放阅读框(ORF),共编码 366 个氨基酸残基,具有 3 个蛋白激酶 C-磷酸化位点、1 个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点和 1 个 N-糖基化位点。系统发育分析显示与大弹涂鱼 MHC Iα基因亲缘关系最密切的是河川沙塘鳢(Odontobutis potamophila)。RT-PCR 分析显示, MHC Iα基因 mRNA 在不同组织中均有表达,其中肾和脾组织中表达量最高,鳃和肠组织中表达次之。大弹涂鱼在腹腔注射 poly(I:C)后,肝和脾组织中 mRNA 表达量明显上升,在12 h 时, MHC Iα基因 mRNA 表达量在肝和脾中均达到峰值。本研究结果表明, MHC Iα基因参与了大弹涂鱼在高盐胁迫下的免疫应答。     

不同方法提取大豆基因组DNA的效果比较

[目的]采用不同方法对大豆基因组DNA进行提取,为大豆基因组DNA的提取提供参考。[方法]采用CTAB法、SDS法和高盐低pH值法对大豆基因组DNA进行提取,对提取的DNA进行光密度、紫外光谱、琼脂糖凝胶电泳和DNA限制性内切酶图谱等的检测。[结果]光密度和光谱检测结果表明,SDS法的提取量和纯度均优于CTAB法和高盐低pH值法;琼脂糖凝胶电泳检测结果表明,SDS法提取的基因组DNA谱带较CTAB法和高盐低pH值法提取的基因DNA谱带粗、亮、重复性好;限制性内切酶检测结果表明,3种方法所得基因组DNA均能被胁谢Ⅲ和EcoRI酶切,但SDS法所得基因组DNA的酶切效果最好。l结论ISDS法的提取效果明显优于CTAB法和高盐低pH值法。     

从植物种子中快速获取高质量DNA的方法(英文)

[目的]该研究旨在寻求一种从植物干种子中简单快速提取高质量基因组DNA的有效方法。[方法]将种子打磨成粉,取100mg粉末加入高盐提取液抽提基因组DNA。采用超微量分光光度计检测、PCR及酶切的方法检验DNA的得率和质量。[结果]从100mg7种常见作物种子粉末中可以得到619.67~1811.21ng基因组DNA,A260/A280比值在1.87~2.07之间,其纯度和质量适合进行PCR及酶切分析。通过普通PCR方法分别对7种作物的特异性内源基因片段进行扩增,结果均能扩增到明显的目的条带。用EcoRV和HindIII两种核酸内切酶能对所得的DNA充分酶切。[结论]该方法能快速地从干种子中提取到高质量的DNA。     

蓖麻种子总RNA提取方法比较

以成熟蓖麻种子为材料,分别用TRIquick Reagent试剂提取法、TRIquick醋酸钠改进法、TRIquick高盐改进法提取总RNA,经琼脂糖凝胶电泳,采用紫外分光光度法测定总RNA纯度并进行RT-PCR检测.结果表明,采用高盐缓冲液改良法能提取出质量高、完整性好而且无胶状不溶物的RNA,该方法简便快速,是一种经济高效的蓖麻种子总RNA提取方法.     

3株中度嗜盐菌的分离鉴定与生长特性研究

将湖北省荆州拍马造纸厂的高盐污水,采用平板划线法筛选并纯化培养后,得到3株单菌落,通过观察菌落的颜色、形状和鞭毛等特征,将菌液进行革兰氏染色试验、需氧性试验和淀粉水解等生理生化试验,可将这3株菌株初步鉴定为盐单胞菌属(Halomonas),都属于中度嗜盐菌。耐盐度试验结果显示,3株菌株能在1.5%~20.0%NaCl中生长,且最适生长浓度为12.0%。pH生长试验表明最适生长pH为7.0。     

盐响应信号途径SOS与植物K+吸收关系

【目的】在盐胁迫条件下研究SOS突变体K+吸收的变化,旨在解析植物高盐胁迫响应与K+吸收的关系。【方法】以SOS信号途径的3个主要基因sos1、sos2、sos3突变体和野生型拟南芥（WT）为试验材料,在含有不同Na+/K+浓度比例的培养基上处理试验材料,观察各突变体与WT的表型差异,进行根系扫描、测定植物的RGR（相对生长率）,植株体内Na+、K+的含量,计算植株体内Na+/K+浓度比值,同时,利用qRT-PCR分析K+转运体基因AKT1、AKT2、SKOR在突变体和WT间的表达差异。【结果】不同浓度K+进行处理时,突变体和WT之间没有明显差异;在30 mmol•L-1 NaCl处理下,植株形态、RGR和体内Na+/K+浓度比值,体内K+浓度的测定结果显示,当K+浓度从0.2 mmol•L-1 增加到60 mmol•L-1 时,K+浓度增加缓解了高盐胁迫对突变体生长的抑制作用。所有植株体内的Na+/K+值降低,体内K+浓度提高。在相同处理条件下,突变体的Na+/K+值高于WT,WT体内K+浓度高于突变体;当K+浓度升高到80 mmol•L-1 时,突变体的生长又重新受到抑制。所有植株体内的Na+/K+值升高,体内K+浓度降低。3个K+转运体AKT1、AKT2、SKOR的real-time PCR分析结果显示,在30 mmol•L-1 NaCl处理时,在低钾条件下（0.2 mmol•L-1 K+）AKT1和SKOR表达比较低,而高钾条件下（20.05 mmol•L-1 K+或者60 mmol•L-1 K+）AKT1、AKT2、SKOR的表达量没有明显差异,这3个基因的表达方式在突变体之间没有明显的差异。【结论】在中度盐胁迫条件下,外界K+浓度增加可以缓解盐胁迫对植物生长造成的抑制作用,但是当外界一价阳离子的总浓度高于110 mmol•L-1时,拟南芥的生长重新受到抑制。SOS信号途径对植物K+吸收没有直接的调节作用。     

高盐方法提取蒙古黄芪基因组DNA比较分析

为了提取高质量的蒙古黄芪(Astragalus membranaceus)基因组DNA,采用高盐十二烷基硫酸钠(SDS)法、高盐溴化十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法和高盐低pH值法,结果表明高盐CTAB法获得的黄芪基因组DNA纯度高,能用于PCR扩增和限制性内切酶酶切,是提取黄芪基因组总DNA的最佳方法。     

高盐低pH值法提取玉米基因组DNA的研究

优化建立了基于玉米叶片的高盐低pH值法提取玉米基因组DNA,经琼脂糖电泳检测表明,提取的DNA主带清晰、无降解现象、质量好,满足基于SSR标记的5色荧光电泳检测系统。此方法比目前提取植物基因组DNA常用的CTAB法和SDS法具有成本低、步骤简单、不使用酚、氯仿、异戊醇等有毒有机试剂的优点,是提取玉米基因组DNA的一种较好的方法。     

美人蕉对泰达高含盐再生水景观河道水体净化效果研究

通过空白对照和种植美人蕉2组处理系统,研究了美人蕉对泰达景观河道含盐再生水的净化效果以及水力停留时间(H RT)对水体净化效果的影响。结果表明,H RT对水体中污染物COD、TN、NH3-N、NO3-N、TP、PO4-P的净化效果有明显的影响,各主要污染物去除率随H RT的变化范围为COD的去除率19.64%~45.09%,TN的去除率为17.52%~63.05%,NH3-N的去除率为23.24%~82.47%,NO3-N的去除率为15.67%~62.43%,TP的去除率为24.20%~61.59%,PO4-P的去除率为20.69%~62.26%。水体中TDS含量在4500~6786 m g/L范围内对美人蕉及其水处理系统的净化效果没有影响;美人蕉系统的pH值均比空白对照组的低。由于美人蕉根系和微生物的吸收与分解作用,在水体中种植美人蕉能明显改善水质净化效果,对水体pH值控制也有一定作用。     

药用植物大黄种子基因组DNA的提取方法研究

通过传统CTAB法、改良CTAB法、高盐低p H法、改良SDS法、试剂盒法等5种方法,对大黄种子进行基因组DNA提取,为了筛选一种适合大黄种子基因组DNA的提取方法,同时用紫外分光光度法和琼脂糖凝胶电泳对5种方法所提的DNA进行检测,并将5种方法所提取的DNA进行PCR扩增检测。结果表明,高盐低pH法提取的DNA得率最好,时间较短,价格便宜,PCR扩增条带清晰,能满足分子标记的要求。