苯乙醇胺A单克隆抗体的研制及ELISA检测方法的建立

为制备苯乙醇胺A(phenylethanolamine A,PA)单克隆抗体,建立一种针对苯乙醇胺A的快速、简便、灵敏度高的检测方法,本试验采用重氮化法将制备的苯乙醇胺A衍生物分别与牛血清白蛋白(BSA)和卵清白蛋白(OVA)进行偶联作为免疫原和包被原。利用弗氏佐剂充分乳化免疫原(PA-BSA),按常规免疫程序免疫6～8周龄的雌性BALB/c小鼠,选择血清抗体效价较高的小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞以PEG法进行细胞融合。结果显示,经3次细胞亚克隆筛选后,最终筛选出一株可稳定分泌抗苯乙醇胺A单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为D6H8,利用此细胞以小鼠体内诱生法制备抗体。经鉴定,D6H8腹水抗体亚型为IgG1,轻链为κ链;纯化后的抗体与沙丁胺醇、盐酸克伦特罗、盐酸异丙肾上腺素和盐酸去氧肾上腺素均无明显的交叉反应(CR<0.18%),表明该抗体特异性良好。利用此抗体建立针对苯乙醇胺A药物残留检测的间接竞争ELISA方法,结果表明,腹水抗体效价为1∶12 800,猪肉中苯乙醇胺A添加浓度在5～1 000 ng/mL时线性关系良好,标准工作曲线为y=0.3861x-0.1845 (R^2=0.990),其IC₅₀为58.88 ng/mL,LOD为3.83 ng/mL,回收率在85.96%～104.32%之间。综上所述,本试验成功建立了检测苯乙醇胺A药物残留的间接竞争ELISA方法,该方法灵敏度高、稳定性较好。     

牛病毒性腹泻/黏膜病毒敏感MDBK细胞克隆与鉴定

研究采用有限稀释法将MDBK细胞进行克隆,并放大培养。将2种生物型(致细胞病变型和非致细胞病变型)的牛病毒性腹泻/黏膜病毒混匀,接种克隆的MDBK细胞并收获毒液。采用间接免疫荧光技术检测病毒含量,筛选BVDV敏感细胞。试验成功获得4株单克隆细胞,其中C3株对病毒高度敏感且产毒稳定,确定为BVDV敏感细胞株。     

甘肃省部分规模场猪PCV-2抗体检测与分析

[方法]采用间接ELISA方法,对采自21个规模养猪场的629份血清,进行PCV-2抗体检测。[结果]8个PCV-2免疫场抗体阳性率母猪为82.93%,生长猪为82.22%,育肥猪为86.21%;13个未免疫场中抗体阳性率为69.23%。猪群抗体阳性率依次为母猪69.79%,保育猪34.91%,肥育猪97.30%,仔猪16.67%。[结论]母猪、生长猪和育肥猪免疫抗体阳性率之间没有明显差异。未免疫场不同生长阶段的猪均存在较为普遍的感染,阳性率呈先下降后上升的趋势,其中以肥育猪群感染最为严重,仔猪感染率最低。不同生长阶段PCV-2感染抗体阳性率存在明显差异。     

变异型PEDV北京分离株ELISA检测法的建立

[目的]为基层养殖场的批量样本检测以及猪流行性腹泻病(PED)的快速诊断提供更为有效的方法.[方法]利用原核表达系统表达了猪流行性腹泻病毒(PEDV) S1部分基因序列,建立用于检测变异型PEDV北京分离株的间接酶联免疫吸附测定方法.[结果]经试验检测表明,该ELISA检测方法敏感性较高、重复性良好、特异性显著、有良好的稳定性和较长的保存期,且临床样本检测与市场上试剂盒比较符合率较高.[结论]此方法可以作为临床免疫检测变异株PEDV的方法,为PEDV抗体检测试剂盒和基因工程疫苗的开发提供了依据.     

电、毒、炸鱼将按10倍计算间接损害 《非法捕捞案件涉案物品认(鉴)定和水生生物资源损害评估及修复办法(试行)》实施

为依法惩治非法捕捞水产品行为,强化水生生物资源保护,推进渔业水域生态文明建设,农业农村部研究制定了《非法捕捞案件涉案物品认(鉴)定和水生生物资源损害评估及修复办法(试行)》(以下简称《办法》)。《办法》规定了涉案物品认(鉴)定的适用情形、认(鉴)定评估机构条件、鉴定评估方式、依据标准、时限等。《办法》自2021年1月22日起实施。     

Preparation and Specific Identification of Single Factor Serum of Subgroup K Avian Leukosis Virus gp85

This study was to prepare a diagnostic serum to rapidly diagnose subgroup K avian leukemia virus (ALV-K).The ALV-K were inoculated in DF1 cells and extracted DNA from infected cells to amplify ALV-K-gp85 (1 005 bp) and ALV-K-gp85 (fragment) (510 bp) genes by PCR.Their correct reading frames were inserted into pET-28a(+) expression vector,then transformed into BL21 (Rosetta) strain.The expressed proteins were used to immune Kunming White mice to prepare antiserum.Recombinant fusion proteins of 39.85 and 22.01 ku were successfully obtained and showed good immunogenicity.Indirect immunofluorescence assay (IFA) showed that the two sera could react with ALV-K,but could not react with ALV-A,ALV-B and ALV-J.The experiment prepared the single factor serum that could be used to specifically diagnosis subgroup K avian leukemia for the first time,at the same time,the single factor serum laid the foundation for rapid diagnoses of subgroup K avian leukemia.     

绵羊肺炎支原体PCR检测方法的建立

绵羊肺炎支原体（Mycoplasma ovipneumoniae，MO）是引起羊支原体性肺炎主要的病原体之一，感染后主要表现为咳嗽、喘气、渐进性消瘦以及肺间质增生性炎症等临床症状。由于本病感染后常呈慢性表现，康复羊可长期带菌，故控制和消灭本病比较困难。MO感染造成的直接损失是羔羊死亡率增加，间接损失是慢性营养消耗、体重减轻、     

我国鸡白血病防控技术研究取得突破

<正>山东农业大学的科研人员日前在国际上首先研制出J亚群鸡白血病病毒特异性单克隆抗体及其相应的间接免疫荧光诊断技术。这一技术将有效防控鸡白血病这一严重危害养鸡业发展的重要疾病。     

河南省畜间弓形虫血清学调查报告

为了查明我省人、畜、禽弓形虫病的感染和流行现状,为本病的综合防制提供科学依据,我们于1988～ 1993年,应用间接血凝试验(IHA)对我省40个县322个乡的人、畜、禽共16种动物进行了弓形虫抗体检测,共抽查10329份血清样品,发现阳性1213份,阳性率为11.74%。其中包括人血清541份,阳性率为4.6%;猪7913份,阳性率为13.45%;猫60份,阳性率为41.675;犬76份,阳性率为3.9%;羊713份,阳性率为9.96%;黄牛255份,阳性率为3.53%;奶牛80份,阳性率为2.55;兔230份,阳性率为2.87%;马