应用间接荧光抗体技术诊断兔病毒性出血症

一、试验材料(一)毒(菌)种1.兔瘟肝传代毒:某生药厂肝传代毒L1/5以及对人 O 型红细胞凝集价在1:1280以上的自然野毒(肝悬液),于-25℃低温冰箱保存。2.巴氏杆菌菌种:中国兽医药品监察所提供的 C51—6菌种以及自然病例分离的巴氏杆菌。(二)异硫氰荧光素标记的绵羊抗兔球蛋白荧光抗体卫生部上海生物制品研究所产品(特异性染色单位1:16),临用前用0.01M PBS 做1:16倍的稀释。     

以CP23重组蛋白为抗原建立检测微小隐孢子虫抗体间接ELISA方法的研究

摘要：以在E.coli高效表达的微小隐孢子虫子孢子表面抗原CP23为抗原，以辣根过氧化物酶(HRP)标记的山羊抗鼠IgG为二抗，建立了检测微小隐孢子虫抗体的间接ELISA方法。经检测筛选出最佳反应条件为1μg／孔纯化的E.coli表达的CP23抗原包被酶标板，用10％免血清进行封闭，以正常E.coli裂解上清液稀释待检血清。实验表明应用CP23重组蛋白作为诊断C.parvum抗原具有特异性高、抗原易纯化和成本低等特点。     

传染性牛鼻气管炎亚单位疫苗免疫原性的研究

用犊牛睾丸细胞培养传染性牛鼻气管炎病毒（IBRV），反复冻融，差速离心提取病毒，用Triton X-100溶解，超声波处理，制成IBRV TritonX-100亚单位抗原，经SDS－PAGE电泳，其分子量在176kD-53kD之间，其中有6条清晰的蛋白带。该抗原与一定比例的白油－司盘佐剂乳化，接种育成年，经间接ELISA检测，可使接种的育成牛产生高效价的血清抗体（OD492mm=1.57)。2种不同剂量（80mg/头，40mg／头）的IBRV亚单位疫苗接种育成牛，体内抗体效价相差不显著，抗体可在体内持续12周，用IBRV TrionX-100亚单位疫苗2次接种育成牛，其体内抗体效价显著高于用灭活疫苗2次接种育成牛体内的效价。试验结果表明：提取的IBRV多肽制作的亚单位疫苗具有良好的免疫原性，且抗体持续时间较长。     

PRRSV间接免疫荧光检测法的建立和应用

以猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ATCC VR-2332株人工单独感染3头3周龄仔猪，并用PRRSV ATCC VR-2332株和猪圆环病毒2型(PCV2)联合感染2头3周龄仔猪，每日检查试验猪体温、采食情况及临床表现，并用HerdChek IDExx试剂盒测其血清抗体。PRRSV PCV2联合感染猪分别在感染后1、3周剖杀，PRRSV单独感染猪和健康对照猪分别在感染后1、2和3周剖杀，对全部试验猪的肺组织进行灌洗处理以获得肺泡巨噬细胞(PAM)．用PAM进行抹片，同时用肺组织直接进行触片做间接免疫荧光(IIF)检测。结果表明，用所获得的3株单克隆抗体均检测到人工感染猪肺组织中的PRRSV抗原。另外，用IIF检测7头临床疑似PRRS病猪的PAM抹片。其中沭阳县的2头猪呈现阳性反应；对这2头猪的肺组织进行病毒分离。在盲传到第4代时Marc-145细胞上产生明显的细胞病变，进一步证实用所获得的3株单克隆抗体检测临床样品的结果准确而可靠，且获得的3株单克隆抗体均可通过IIF用于检测猪肺组织中的PRRSV抗原。     

马立克氏病病毒pp38基因启动子和增强子的部分功能

通过 PCR技术 ,以马立克氏病病毒 (MDV) RB1B株基因组 DNA为模板 ,扩增了包括 pp38基因及其启动子 -增强子和终止子在内的 2 2 0 0 bp的核酸片段。将该片段用 Sac 和 Sph 酶定向克隆到 p U C18质粒中 ,构建成重组质粒 ;将重组质粒转染鸡胚成纤维细胞 (CEF) ,用小鼠抗大肠杆菌表达的 pp38血清作间接免疫荧光试验 ,验证 pp38基因的表达。结果 ,在转染的细胞浆中看到了绿色的荧光 ,证实了该启动子的单向启动活性     

三种猪瘟抗体检测技术的应用比较

应用猪瘟正向间接血凝法 (IHA)、斑点酶联免疫吸附试验 (Dot ELISA)以及猪瘟抗体免疫金标试纸条对规模化养猪场 1 38份不同阶段猪血清进行猪瘟免疫抗体水平的同步监测 ,检测结果 :IHA ,Dot ELISA ,金标试纸条测出经产母猪的猪瘟抗体阳性率分别为 83 3 %、80 0 %、80 0 % ,其平均值为 81 1 % ;三种方法测出后备母猪的猪瘟抗体阳性率分别为 53 3 %、53 3 %、50 0 % ,其平均值为 52 2 % ;三种方法测出 2 0日龄仔猪的猪瘟抗体阳性率分别为 69 2 %、76 9%、76 9% ,其平均值为 74 3 % ;测出 40日龄猪的猪瘟抗体阳性率分别为 76 9%、80 8%、80 8% ,其平均值为 79 5 % ;测出育肥猪的猪瘟抗体阳性率分别为 30 8%、30 8%、34 6 % ,其平均值为 32 1 %。经过统计学x2 检验 ,对于不同阶段猪三种方法两两之间检测结果均差异不显著 (P >0 0 5) ,表明上述三种方法均可用于猪瘟抗体的检测。     

植物化感作用影响因素的再认识

土壤养分、酶、微生物、本底特性,根茬还田、水分、植物根系、种植体系和种植模式与化感作用的互作关系,表明这些因子可通过对土壤养分有效性、微生物种群结构、土壤酶活性和化感物质浓度的影响而对化感作用产生直接或间接影响,这些可为通过化感作用途径构建高效农田生态系统提供新的思路.     

雏鸡服用益生素后免疫器官指数及局部体液免疫球蛋白相对含量的动态变化

用商品益生素和自制益生素分别灌服1日龄雏鸡，灌服益生素后1、4、7、10、18d测定胸腺、脾脏、法氏囊的器官指数动态变化，用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)方法测定泪液、气管液、胆汁和肠液的IgA、IgM、IgG相对含量的动态变化，结果发现服用商品益生素的雏鸡免疫器官指数在第7天高于未服用益生素的对照雏鸡，上述4种体液的IgA、IgM、IgG相对含量在服用益生素后7～10d高于未服用益生素的对照雏鸡，服用自制益生素的雏鸡上述4种体液的IgA、IgM、IgG相对含量在服用益生素后4～7d高于未服用益生素的对照雏鸡。表明益生素对雏鸡的免疫系统有一定的影响，能够促进免疫器官的生长发育，提高雏鸡呼吸道和消化道局部体液的免疫球蛋白相对含量。     

24月龄生长母水牛绝食代谢的研究

用传统开路式牛用呼吸面具对24月龄母水牛绝食产热(Fasting heat production,FHP)进行研究。结果表明:①24月龄母水牛FHP为306.013kJ/kgW0.75·d;每天排出内源尿氮(EUN)为39.66g;单位代谢体重每天排出EUN为0.48g;蛋白分解产热占总产热量为17.13%;EUN与FHP比值为1.60mg/kJ。②24月龄母水牛维持净能需要:NEm=397.817kJ/W0.75·d。