蜱传脑炎病毒E蛋白D Ⅲ的表达与抗体间接ELISA检测方法的建立

利用PCR技术扩增蜱传脑炎病毒(tick-borne encephalitis virus, TBEV)E蛋白第三结构域(DomainⅢ,DⅢ)基因并将其插入原核表达载体pET-30a(+),构建重组质粒pET-30a(+)-TBEV-E-DⅢ。将重组质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导目的蛋白表达,利用镍离子金属螯合亲和层析介质(Ni-NTA)纯化目的蛋白。将纯化的重组蛋白作为包被抗原,建立TBEV抗体间接ELISA检测方法。结果显示,重组蛋白TBEV E-DⅢ在大肠杆菌中主要以包涵体形式表达,蛋白表达的最佳条件为30℃、0.6 mmol/L IPTG诱导6 h; TBEV抗体间接ELISA检测方法的最佳抗原包被浓度为1 mg/L,该方法可特异性检测TBEV阳性血清,与寨卡病毒(Zika virus, ZIKV)、日本乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus, JEV)和西尼罗病毒(West Nile virus, WNV)阳性血清无交叉反应,批内和批间变异系数(CV)均小于10%。结果表明,成功表达并纯化了TBEV E-DⅢ重组...     

溶酶体酸性环境促进猪血凝性脑脊髓炎病毒的复制

为解析猪血凝性脑脊髓炎病毒(porcine hemagglutinating encephalomyelitis virus, PHEV)复制和溶酶体酸性环境的相关性,本研究以PHEV感染神经瘤母细胞(N2a细胞)为模型,利用Western blot和间接免疫荧光方法进行检测,发现PHEV感染神经细胞后溶酶体关联膜蛋白1(LAMP1)表达显著升高,病毒能与溶酶体共定位,并使溶酶体体积增大。其次,用溶酶体荧光探针Lyso Tracker Red DND-99标记活细胞溶酶体,结果发现病毒感染神经细胞后溶酶体的酸性增强。再者,用巴佛洛霉素A1(BafA1)阻止神经细胞溶酶体酸化后接种病毒,发现与未处理的细胞感染组相比,胞内病毒含量显著降低,表明抑制溶酶体酸化能够阻碍细胞内子代病毒的产生。本研究结果表明PHEV感染神经细胞后能定位于溶酶体,影响溶酶体的酸性环境,并且揭示了子代病毒的产生依赖溶酶体的酸性环境;研究结果为深入解析溶酶体与PHEV复制的相关性提供了依据。     

检测产肠毒素性大肠杆菌粘附素抗体间接ELISA的建立

为了评价仔猪大肠杆菌病K88-K99-987P-F41 四价亚单位疫苗的免疫效果,利用纯化粘附素为包被抗原,建立了检测产肠毒素性大肠杆菌粘附素抗体的间接ELISA。初步确定了各种反应条件: K88、K99、987P、F41粘附素抗原最适包被浓度依次为1∶400、1∶80、1∶40、1∶40,相应粘附素抗体最佳稀释度依次为1∶400、1∶200、1∶200、1∶200。经交叉试验、阻断试验和重复试验证实,本方法具有良好的特异性和重复性。     

非洲猪瘟EP364R蛋白的原核表达及间接ELISA方法的建立

本研究根据非洲猪瘟病毒（ASFV）Georgia 2007/1毒株的EP364R基因序列（Gen Bank登录号：FR682468.1）合成EP364R基因序列,通过PCR技术扩增目的基因EP364R,并克隆到p ET-32a（+）载体,成功构建了重组质粒p ET-32a-EP364R,鉴定正确后将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中成功诱导表达,纯化后的重组蛋白利用SDS-PAGE、Western blot进行鉴定。以纯化的p ET-32aEP364R重组蛋白为诊断抗原,成功建立了检测ASFV的间接ELISA抗体检测方法。将建立的间接ELISA检测方法与法国ID-Vet非洲猪瘟抗体试剂盒分别对临床84份血清进行检测,总符合率达89.3%,表明该方法具有良好的特异性、敏感性和重复性。为ASFV的快速诊断、流行病学调查和血清学抗体检测提供了快速实用的检测手段。     

江西省部分地区近3年鸡新城疫抗体水平调查与分析

【目的】为了解江西省养禽场的鸡新城疫病毒（NDV）免疫抗体水平状况。【方法】对2020—2022年来自江西省宜春市、上饶市、抚州市、九江市、赣州市5地区的部分养禽场1153份血清样本进行NDV抗体检测。【结果】江西省部分地区养禽场的NDV抗体阳性率91.5%。其中,宜春市、上饶市、九江市、赣州市的新城疫抗体阳性率分别为：94.7%、95.6%、88.5%、71.9%,均好于国家农业农村部规定的70%要求;仅抚州市阳性率69.4%。2020—2022年3年来江西省5市NDV免疫抗体阳性率呈现上升趋势;春、冬两季鸡群抗体阳性率较低;江西省5市各地NDV抗体平均效价均在4 Log2以上,多分布于6 Log2～9 Log2。【结论】近年来江西省家禽NDV免疫抗体水平比较高,而且呈逐步上升趋势。     

浅谈血凝和血凝抑制试验操作要点

血凝和血凝抑制(HA-HI)试验是目前禽流感监测普遍采用的试验方法,用来鉴定流感病毒分离株,检测禽血清中的感染抗体或免疫抗体,为免疫效果评估和疫情监测提供科学依据.本文就HA-HI试验操作提出几点建议,供化验室工作人员参考.     

禽流感血凝和血凝抑制试验体会

近年来,高致病性禽流感疫情在世界各地均有发生,而且越演越烈,人感染高致病性禽流感的事件越来越多。预防高致病性禽流感已成为全球性的大事。     

优异大豆种质垦丰 16 的评价与利用

垦丰16为黑龙江省农垦科学院作物开发研究所育成的大豆新品种,作为黑龙江省第二积温带主栽品种直接利用,创造了显著的社会效益和经济效益。同时该品种被多家育种单位作为亲本间接利用,目前作为亲本已经育成大豆品种12个,育成品种累计推广面积超过80万hm~2,成为黑龙江省大豆骨干亲本,垦丰16无论是生产直接利用还是作为亲本间接利用均具有重要的价值。     

山羊感染伊氏锥虫诊断方法的研究

本研究结果表明,山羊感染伊氏锥虫(Trypanosoma evansi)后,用血液压滴标本法查虫无效:小白鼠接种法在感染的检查上具有一定的价值;而间接血凝试验(IHA),因其检查结果具有早期性、重复性和可靠性,故被认为在疾病的诊断和带虫的普查上是较为理想的方法。笔者根据183头份血样的IHA测定結果,发现山羊感染锥虫6天以后,血凝效价最低为1:10,最高为1:1280;未感染锥虫的山羊血凝效价始终小于或等于1:10。因此可将1:20及其以上的血凝滴度定为感染的阳性标准,1:10为可疑,小于1:10则属阴性。