湘西北某规模化猪场母猪子宫内膜炎金黄色葡萄球菌的分离鉴定及耐药性分析

为查明湘西北某规模化猪场母猪子宫内膜炎的主要病原菌,对8头患病母猪子宫化脓性分泌物中病原菌采用培养、鉴别、纯化、革兰氏染色和生化试验等方法进行分离与鉴定;并对分离菌采用药物纸片琼脂扩散法进行药敏试验。结果表明,分离出8株金黄色葡萄球菌。28种抗菌药中金黄色葡萄球菌对头孢唑啉、多黏菌素B、丁胺卡那等3种药物表现为中介,中介率为10.71%,金黄色葡萄球菌对其他25种药物均产生耐药性,耐药率为89.29%。说明金黄色葡萄球菌是引起该场母猪子宫内膜炎化脓感染的主要致病菌之一,临床上金黄色葡萄球菌对多种抗菌药产生了耐药性,应引起高度重视。     

奶牛隐性乳房炎三种致病菌的多重PCR检测方法的建立

为建立快速并能同时检测无乳链球菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌3种奶牛隐性乳房炎致病菌的方法,根据无乳链球菌16S rRNA基因、金黄色葡萄球菌NUC耐热基因、绿脓杆菌ETA基因序列并参考文献各合成一对特异性引物,通过对PCR反应各项参数的调整优化,建立多重PCR检测体系,并同时进行灵敏性试验和特异性试验。结果显示:该检测方法可以同时扩增出无乳链球菌270 bp、金黄色葡萄球菌153 bp和绿脓杆菌375 bp的特异性片段以及细菌16S rRNA 1 500 bp的通用片段,而对于其他的6种病原菌只能扩增出1 500 bp的通用片段,具有较强的特异性。三种特异性引物扩增条带与GenBank上的细菌基因序列同源性为99%。增菌培养24 h,该体系对无乳链球菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌的最低灵敏度分别为8×10⁴、4×10⁴、1.5×10⁵ CFU·mL^-1。本研究建立的检测方法能够完成无乳链球菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌的快速检测,对于生产上奶牛隐性乳房炎的鉴别诊断和快速检测具有重大意义。     

复合纳米抗菌肽防治羊皮下脓肿病的效果

抗菌肽具有抗菌谱广、不易产生耐药性、无残留等优点,而金黄色葡萄球菌是羊和兔皮下脓肿病的主要病原菌之一。通过对羊皮下脓肿组织样本分离到的金黄色葡萄球菌进行体外抗菌肽抑菌活性检测,同时建立试验兔金黄色葡萄球菌皮下脓肿模型,使用抗菌肽进行防治,最后在羊场开展抗菌肽防治羊皮下脓肿病的试验。结果发现抗菌肽对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度为3 900μg/mL,抑菌圈直径达到40 mm,抗菌效价U=1.3×10⁷。试验兔防治试验发现,预防组：预防性饲喂抗菌肽能避免金黄色葡萄球菌皮下脓肿病的发生;治疗组：饲喂抗菌肽可使致病后的试验兔14 d内康复。抗菌肽防治羊皮下脓肿病发现,预防试验：预防组发病率为0.6%(n=834),而对照组发病率为12.4%(n=780);治疗试验：发病后采用抗菌肽结合简单外科手术治疗,14 d内治愈率达95.5%(n=110),3个月内复发率为0,而未用抗菌肽,仅采用简单外科手术治疗,14 d内治愈率为36.4%(n=110),3个月内复发率为77.3%(n=110)。说明抗菌肽具有较好的防治羊皮下脓肿病的效果。     

PCR检测乳品中金黄色葡萄球菌

【目的】利用PCR技术,无需增菌，直接检测乳品中的金黄色葡萄球菌。【方法】通过溶剂提取的方法从人工样品中提取模板，以金黄色葡萄球菌耐热核酸酶基因（nuc）为靶基因，经过PCR扩增得到279 bp的产物。经过DNA测序证实该产物为目的扩增产物。采用PCR方法实际检测了乳品中的金黄色葡萄球菌，同时，与国标GB 4789.10-94方法及两种快速检测致病性金黄色葡萄球菌测试片Petrifilm RSA.Count Plate 及Baird-parker+RPF Agar进行了比较。【结果】PCR方法的灵敏度高，全脂乳和脱脂乳检测的检出限为10 CFU/ml，奶酪检测的检出限为55 CFU/g，可在6 h内完成对乳品中金黄色葡萄球菌的检测，比目前普遍采用的先增菌再进行PCR检测的方法缩短了12～24 h。与国标方法相比，PCR方法的符合率为94.3％，敏感性为100％。【结论】采用溶剂提取制备模板的方法可有效的用于PCR直接检测(无需增菌)乳及乳制品中的金黄色葡萄球菌。     

香芹酚对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(USA300)抑菌机制的研究

【目的】研究香芹酚对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)(USA300)的抑菌效果及其作用机制。【方法】测定香芹酚对MRSA标准菌株USA300的抑菌活性,并通过考察其对电导率、DNA外渗量、SDS-PAGE蛋白谱带、乳酸脱氢酶的含量、细菌形态结构以及生物被膜形成能力的影响探究香芹酚的抑菌机制。【结果】香芹酚的MIC为128～256μg/m L,MBC为512μg/mL;与对照组相比,2 MIC香芹酚作用于USA300 1 h后,菌悬液电导率上升5.57%±0.40%、DNA外渗量增加16.27±1.86μg/mL以及乳酸脱氢酶含量增长40.49%±2.77%;作用10 h后,可溶性蛋白质含量增多61.13%±7.63%;512μg/mL的香芹酚可以损伤USA300的细胞壁;亚抑菌浓度下,64μg/mL香芹酚作用于USA300后,形成的生物被膜减少68.86%±0.53%。【结论】香芹酚主要通过损伤USA300的细胞壁、增加细胞膜的通透性来抑制USA300的生长繁殖。     

乙酸乙酯沙蚕提取物对金黄色葡萄球菌抑菌活性研究

为探讨沙蚕体内生物活性物质的抑菌活性,采用乙酸乙酯溶剂对沙蚕体内生物活性物质进行提取,提取物对金黄色葡萄球菌进行药敏试验。结果表明,乙酸乙酯沙蚕提取物对金黄色葡萄球菌均有一定的抑菌活性,其最小抑菌浓度(MIC)为0.195 mg/ml。     

深圳地区金黄色葡萄球菌的耐药性监测与分析

目的:了解本地区金黄色葡萄球菌的耐药变迁及其在不同感染部位的耐药性差异。方法:用Kirby-Bauer法对180株临床分离的金黄色葡萄球菌进行药敏试验。结果:(1)未发现耐万古霉素和替考拉宁的金黄色葡萄球菌,甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌(MRSA)与甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA)对8种所测药物的耐药性差异显著(P<0.05)。(2)不同标本来源的菌株对药物的耐药性存在差异。(3)MRSA的检出率由2001年的35.0％,上升到2003年的53.6％,而金黄色葡萄球菌对氯霉素和复方磺胺甲(?)唑的耐药率则有下降趋势。结论:本地区未发现耐万古霉素和替考拉宁的金黄色葡萄球菌;不同标本来源的菌株对药物的耐药性存在差异,临床医生治疗时应注意区别;MRSA的检出率有上升趋势,需引起医疗工作者的高度重视;金黄色葡萄球菌对氯霉素和复方磺胺甲(?)唑的耐药率保持在较低水平。     

巴氏杀菌乳中金黄色葡萄球菌的生长预测模型构建

巴氏杀菌乳中金黄色葡萄球菌污染可能会产生肠毒素,对人体健康造成危害。分别监测在4、10、16、20、24、28 ℃储藏条件下金黄色葡萄球菌在巴氏杀菌乳中的生长数据,采用Modified Gompertz模型、Logistic模型、Huang模型和Baranyi模型构建金黄色葡萄球菌动力学一级模型,采用平方根模型和Arrhenius模型建立二级模型以描述温度与相对最大生长速率(μ_max)的关系。结果显示,各温度下Modified Gompertz模型的拟合度更优,决定系数(R²)>0.98,均方根误差(RMSE)<4.6,为最合适的一级模型。二级模型中,Arrhenius模型的拟合度更优(R²=0.99,RMSE=0.60)。相较于平方根模型,外部验证显示Arrhenius模型的精确度因子(A_f)和偏差因子(B_f)分别为1.39和0.87,较接近于1,说明预测效果更好。研究结果可为巴氏杀菌乳中金黄色葡萄球菌的风险评估提供数据基础,为乳品货架安全期预测提供科学依据。     

傅立叶变换红外光谱技术对2种葡萄球菌的快速分类鉴定

[目的]建立金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌2种菌的傅立叶变换红外光谱数据库及FT-IT分类鉴定方法。[方法]应用FT-IR技术对2种葡萄球菌进行指纹图谱数据采集,应用化学计量学分析方法对光谱进行分析。[结果]建立2种葡萄球菌的标准FT-IR光谱数据库,用于FT-IR技术对2种可疑目标葡萄球菌进行鉴定;建立一种基于主成分分析的聚类分析模型,可成功地区分2种葡萄球菌。[结论]傅立叶变换红外光谱分析方法简便、快速、易操作,结果重现性好,是一种区分金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌的有效方法。     

牛源金黄色葡萄球菌突变株的筛选、鉴定及其免疫原性的研究

 【目的】诱变牛源金黄色葡萄球菌山东分离株(zfb),筛选、鉴定弱毒性突变株,并研究其在鼠上的免疫交叉保护性。【方法】牛源金黄色葡萄球菌山东分离株zfb,经N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)化学诱变,经生长特性、回复突变、毒力检测、LD50、多种特征性酶检测、小鼠中免疫保护性等实验比较研究了突变株与亲本株的生物学特性,筛选得到遗传性状稳定β－溶血素缺失的弱毒性突变株。【结果】弱毒性突变株Hx与亲本株相比：其β－溶血性状完全缺失,生长缓慢,耐热核酸酶、血浆凝固酶等胞外蛋白的产量减少,在活体条件下可产生荚膜,半数致死量(LD50)10－1.83&#8226;mL-1远低下于亲本株的10－4.33&#8226;mL-1。亲本株保护检测,免疫接种过的鼠的半数致死量是未接种过的6—50倍。非亲本株保护检测,免疫接种过的鼠的半数致死率是未接种过的5—60倍。【结论】突变株Hx的β－溶血素缺失,毒性减弱,对金黄色葡萄球菌攻击具有较高免疫保护性。