鸡蛋清溶菌酶基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达研究

研究从鸡输卵管组织提取细胞总RNA,根据Gene Bank中已发表的鸡溶菌酶基因序列,设计合成特异引物,合成cDNA序列,并以此为模版,PCR扩增鸡溶菌酶基因。用Xho I和Xba I对LYZ基因的PCR产物和真核表达载体pPIC6αA进行双酶切后转化到大肠杆菌(DH5α)中,构建成为真核重组表达载体pPIC6αA-LYZ。该载体经PstXI酶切线性化后,以电击转化方法导入到毕赤酵母宿主菌X-33中,经Blasticidin抗性筛选,得到鸡溶菌酶基因重组毕赤酵母菌株;甲醇96h(发酵罐诱导100h)诱导表达,经Wetern-blot检测分析,基因重组工程菌株摇瓶诱导表达溶菌酶的表达量约为4mg/l,发酵罐诱导表达的表达量约为10mg/l。     

酵母硒对杜寒杂交羊生长性能、血常规和血清生化指标的影响

本试验旨在探讨饲粮中添加酵母硒对杜寒杂交羊生长性能、血常规和血清生化指标的影响。选用40只体重(34kg左右)相近、健康状况良好的杜寒杂交断奶羔羊,随机分为4组,每组10只,进行单栏单只饲养。各组试验羊分别饲喂在基础饲粮中添加0(对照)、0.2、0.4和0.8mg/kg的硒(硒的形式为酵母硒)的试验饲粮,对应的试验饲粮中硒含量的实测值分别为0.074(对照)、0.307、0.491和0.846mg/kg。预试期10d,正试期20d。结果显示:随着硒添加量的增加,平均日增重呈先增加后降低的趋势,在硒添加量为0.2mg/kg时平均日增重最大。当硒添加量为0.2mg/kg时,杜寒杂交羊的料重比最低,极显著低于其他3个组(P<0.01)。当硒添加量为0.8mg/kg时,血小板计数最高,极显著高于其他各组(P<0.01)。当硒添加量为0.8mg/kg时,嗜碱性粒细胞百分数最高,极显著高于0.4mg/kg组(P<0.01)。饲粮中添加不同水平的硒对其他血常规指标均无显著影响(P>0.05)。当硒添加量为0.8mg/kg时,血清中总蛋白、尿素氮和肌酐含量均最高,显著或极显著高于其他各组(P<0.05或P<0.01)。0.8mg/kg组血清中谷丙转氨酶和谷草转氨酶的活性最高,显著或极显著高于对照组(P<0.05或P<0.01)。对照组血清中碱性磷酸酶的活性最高,与0.2mg/kg组差异不显著(P>0.05)。当硒添加量为0.8mg/kg时,血清中γ-谷氨酰转移酶的活性最高,极显著高于其他各组(P<0.01)。当硒添加量为0.8mg/kg时,血清中磷含量最高,极显著高于0.2和0.4mg/kg组(P<0.01)。当硒添加量为0.8mg/kg时,血清中铁含量最低,极显著低于对照组(P<0.01),同时0.4mg/kg组血清中铁含量也极显著低于对照组(P<0.01)。综合本试验测定指标,杜寒杂交羊饲粮中酵母硒形式硒的适宜添加量为0.2mg/kg(饲粮中硒含量的实测值为0.307mg/kg)。     

富铬酵母发酵条件优化的研究

 利用酵母菌具有较强的富集微量元素的特性,试验对产朊假丝酵母富集微量元素铬的条件进行了优化。从6株酵母菌中筛选出耐铬能力和富集铬能力均较强的CJ2作为试验菌株。试验结果表明：500 mL三角瓶中装入75 mL发酵培养基,采用一次性加铬的方式,适宜的CrCl₃·6H₂O浓度为50 μg/mL,pH值为5.5,接种量为6%,摇床转速180 r/min,28~30 ℃下培养24 h,获得的富铬酵母生物量能达到1.30 g/100 mL,铬含量能达到2 000 μg/g左右,转化率能达到50%左右。同时CJ2菌株发酵罐培养,铬酵母生物量能达到1.80 g/100 mL,铬含量能达到2 500 μg/g左右。并对普通酵母和富铬酵母中的氨基酸组成了分析。     

酵母提取物对断奶仔猪前期生长性能的影响

试验的目的是研究酵母提取物部分替代断奶仔猪饲粮中的血浆蛋白粉对断奶仔猪保育前期生长性能的影响。研究结果显示,在断奶仔猪日粮中添加酵母提取物或以不同水平替代日粮中的血浆蛋白粉,对仔猪的试验末重、平均日增重、饲料转化率和仔猪平均日采食量均有不同程度的改善作用。因此酵母提取物可以替代动物蛋白质饲料原料如血浆粉而不影响猪的生产性能。     

酵母β-葡聚糖对断奶仔猪肠道菌群的影响

随机选取28日龄体重为(7.51±0.72)kg三元杂交(杜×长×大)断奶仔猪72头,按体重和性别随机分为4个处理组,每组3个重复,每个重复6头仔猪,4个处理组在饲喂基础日粮的基础上,分别添加酵母β-葡聚糖0、0.025%、0.05%、0.1%。试验结果表明,28日龄断奶仔猪日粮中添加不同剂量的酵母β-葡聚糖均能不同程度地提高仔猪肠道中双歧杆菌、乳酸杆菌的数量,降低大肠杆菌的数量,改善了断奶仔猪肠道正常菌群结构。     

沼气发酵液中一株酵母菌菌株的鉴定与系统发育分析

从沼气发酵液中分离到一株酵母菌,根据形态学特征、生理生化特征和分子生物学方法对其进行了鉴定.克隆了该菌的18S rDNA序列(GenBank接受号:EU784644)和5.8S-ITS rDNA序列(GenBank接受号:EU784645)并进行测序,结果表明18S rDNA全长1739bp,5.8S-ITS rDNA全长569bp.以5.8S-ITS rDNA序列同源性为基础构建了相关属种的系统发育树,结果表明CXF-1与季也蒙毕赤酵母(Pichia guilliermondii)处于同一进化分支中,相似性达99.6%,因此将该菌鉴定为季也蒙毕赤酵母(Pichia guilliermondii).     

木聚糖对生物质组分水热碳化特性的影响研究

为了研究木聚糖的水热碳化特性,在间歇式反应釜中,进行反应温度为160~240℃、停留时间为120 min条件下的水热碳化实验研究,同时在220℃、120 min的反应条件下,考察了木聚糖对纤维素和木质素水热碳化过程的影响。研究发现,200℃时,木聚糖水热焦开始出现,随反应温度的升高,木聚糖水热焦产率逐渐增加,至240℃时,产率达13%;以小麦秸秆中半纤维素与纤维素和木质素混合水热碳化,木聚糖对纤维素水热焦产率影响不大,而碳质量分数从纯纤维素水热焦的42%增加至纤维素和木聚糖混合物水热焦的48%,与纯木质素水热焦相比,木聚糖和木质素混合物水热焦产率减少了23个百分点,碳质量分数变化不大;木聚糖水热焦中特征官能团随温度升高而减少,而CC、CO和芳香特征峰红外吸收逐渐增强,同时热重分析表明木聚糖水热焦热稳定性较好。傅里叶红外光谱、X射线衍射分析及热重分析表明,在水热碳化过程中,木聚糖可以促进纤维素和木质素分子结构的断裂、聚合和芳香化反应,提高水热焦的芳香特性。     

厦门局截获单带寡鬃实蝇

厦门局截获单带寡鬃实蝇１９９２年４月１日，我局机场办事处从雅加达至厦门航班入境旅检中扣留了四季番石榴果实３粒，发现有实蝇幼虫，饲养出的成虫经笔者鉴定标本并经中国科学院动物研究所汪兴鉴副研究员核实，确定为单带寡鬃实蝇Ｂａｃｔｒｏｃｅｒａｆｒａｕｅｎｆｅ...     

影响聚磷菌和聚糖菌竞争的若干因素分析

强化生物除磷系统因其除磷效率高而得到越来越多的应用,但在此系统内聚磷菌(PAOs)和聚糖菌(GAOs)之间的竞争又常常导致其除磷效果恶化。基于国内外学者对强化生物除磷系统中微生物竞争的研究成果,总结了进水碳磷比、温度、碳源和p H对PAOs和GAOs竞争的影响。结果表明:低碳磷比条件下PAOs处于优势地位,系统除磷稳定性更高,温度低于20℃时PAOs处于竞争优势,系统除磷效果更好,p H为7. 0～8. 0有利于PAOs,丙酸作为碳源时能使PAOs在与GAOs的竞争中占优势而获得较高的除磷率。     

猪伪狂犬病毒gE蛋白的酵母表达及其单克隆抗体的筛选

为获得具有生物学活性的猪伪狂犬病毒(PRV)gE蛋白及其特异性单克隆抗体,利用电转技术将pPICZαA-gE重组质粒转入毕赤酵母X-33并筛选出阳性克隆,通过SDS-PAGE、Western blot鉴定筛选出PRV gE蛋白表达菌株。通过诱导表达获得gE分泌蛋白,并利用Ni柱进行纯化,应用Western blot、Dot blot、ELISA方法对纯化蛋白进行活性鉴定。同时将纯化蛋白免疫BALB/c小鼠,细胞融合后通过免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)筛选单克隆抗体,并对单克隆抗体进行了反应性测定、效价测定及亚型鉴定。结果显示,PRV gE蛋白在毕赤酵母中成功表达,并获得了纯化蛋白,纯度达90%以上,且具有良好的生物学活性,与PRV阳性血清反应性良好;筛选到4株敏感性强、特异性良好的gE单克隆抗体,均可同时特异识别PRV gE蛋白及病毒,分别命名为2F10、4C10、9E1、10C3。综上,用酵母系统成功表达了PRV gE蛋白,并筛选到4株针对PRV gE蛋白的单克隆抗体。