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鉴于ε–聚赖氨酸収酵过程对抗生素压力条件的依赖,尝试基于Ⅱ型毒素–抗毒素系统(relBE2sca)构建无选择压力下稳定表达ε–聚赖氨酸的淀粉酶产色链霉菌表达系统:将抗毒素基因relB2sca与ε–聚赖氨酸合成酶基因pls克隆至表达载体,幵导入淀粉酶产色链霉菌pls缺失突变株,将毒素基因relE2sca整合至淀粉酶产色链霉菌的染色体(突变株YY3),获得包含ε–聚赖氨酸稳定表达的突变株YY1。经过多次传代,相比对照组,在不含抗生素压力条件下,突变株YY1依然能够稳定地合成ε–聚赖氨酸。毒素蛋白RelE2sca的表达会导致变铅青链霉菌、阿维链霉菌和链霉菌FR–008等常用链霉菌异源表达宿主的死亡,提示基于Ⅱ型毒素–抗毒素系统(relBE2sca)可作为一种通用的遗传标记。 相似文献
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为了解新疆马疱疹病毒1型(EHV-1)主要毒力基因遗传进化情况并构建TK基因缺失株,本研究以EHV-1 XJ2015株DNA为模板,对其主要毒力基因TK、gI和gE全长进行克隆、测序及生物信息学分析,并扩增TK基因左右重组臂TKL和TKR,构建质粒pUC-TKLR,将扩增后的增强绿色荧光蛋白(EGFP,含有CMV+polyA)插入pUC-TKLR质粒,构建TK基因缺失打靶质粒。TK、gI和gE基因同源性分析结果显示,XJ2015株与国外EHV-1分离株TK、gI和gE基因同源性均较高,分别为99.8%~100.0%、99.6%~100.0%和99.9%~100.0%;与EHV-3分离株同源性均最低,分别为72.9%、59.4%和62.1%;遗传进化分析显示,3个基因均与国外EHV-1同属于一个遗传进化分支,与EHV-9和EHV-4进化关系较近,但与EHV-3进化关系较远,表明XJ2015毒株与国外EHV-1毒株TK、gI、gE基因核苷酸上差异不明显,没有明显的地域性特征,功能基因保守且进化缓慢,同源基因功能相同或相近;经PCR扩增、酶切、测序及转染鉴定,本试验成功构建了用于TK基因缺失的打靶质粒pUC-TKLR-EGFP。通过对EHV-1主要毒力基因的分析及TK基因缺失打靶载体的构建,为新疆地区马鼻肺炎流行病学调查分析、TK基因缺失株的构建提供理论依据。 相似文献
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随着住房体制改革的深入与城乡一体化的不断发展,为满足“夹心层”群体住房需求,公租房作为新增的保障性住房应运而生。在城市土地日益紧张的情况下,我国逐渐开始探索利用农村集体建设用地建设公租房,但在试点城市落实这一举措的过程中遇到了多重障碍。本文以集体建设用地建设公租房的供应制度、融资制度与收益分配制度作为研究内容,讨论目前我国公租房制度存在的问题,并提出制度创新对策。 相似文献
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随着我国社会经济和城市化建设进程不断推进,我国生态问题愈加严重。在此背景下,近些年我国大力开展生态明文建设,提高林业建设水平。有害生物作为阻碍林业发展的重要因素,因此,有害生物防治在建设生态文明中有着不可替代的作用。基于此,文章分析了林业有害生物防治,并讨论了有害生物防治在生态明文建设中的作用。 相似文献
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随着职业技能大赛逐步推进和开展,越来越深入地对职业教育起到了带动和引领作用,本文主要通过对目前针对职业院校开展的几种形式大赛(教师带领学生共同参与的大赛例如巴哈大赛、教师指导学生参与的大赛、教师技能大赛、教师教学设计大赛)开展研究,分别从技能大赛对汽车专业实训项目开发、技能大赛对汽车专业青年教师培养、技能大赛对汽车专业实训环境、实训设备改善、技能大赛对实训教学评价标准建立等几个方面进行了分析、阐述。 相似文献