全文获取类型
收费全文 | 14916篇 |
免费 | 776篇 |
国内免费 | 1770篇 |
专业分类
林业 | 291篇 |
农学 | 1699篇 |
基础科学 | 65篇 |
927篇 | |
综合类 | 6392篇 |
农作物 | 936篇 |
水产渔业 | 767篇 |
畜牧兽医 | 5300篇 |
园艺 | 739篇 |
植物保护 | 346篇 |
出版年
2024年 | 237篇 |
2023年 | 760篇 |
2022年 | 886篇 |
2021年 | 915篇 |
2020年 | 709篇 |
2019年 | 889篇 |
2018年 | 449篇 |
2017年 | 696篇 |
2016年 | 818篇 |
2015年 | 805篇 |
2014年 | 875篇 |
2013年 | 852篇 |
2012年 | 1252篇 |
2011年 | 1161篇 |
2010年 | 1083篇 |
2009年 | 1037篇 |
2008年 | 1060篇 |
2007年 | 716篇 |
2006年 | 570篇 |
2005年 | 459篇 |
2004年 | 336篇 |
2003年 | 254篇 |
2002年 | 164篇 |
2001年 | 96篇 |
2000年 | 94篇 |
1999年 | 74篇 |
1998年 | 56篇 |
1997年 | 38篇 |
1996年 | 36篇 |
1995年 | 14篇 |
1994年 | 32篇 |
1993年 | 5篇 |
1992年 | 5篇 |
1991年 | 4篇 |
1990年 | 8篇 |
1989年 | 6篇 |
1988年 | 2篇 |
1987年 | 1篇 |
1985年 | 1篇 |
1983年 | 1篇 |
1981年 | 1篇 |
1980年 | 1篇 |
1963年 | 1篇 |
1955年 | 3篇 |
排序方式: 共有10000条查询结果,搜索用时 15 毫秒
991.
992.
新城疫病毒F、NP、M和HN基因在昆虫细胞内的共表达 总被引:3,自引:0,他引:3
为构建杆状病毒转移载体,通过PCR的方法将F48E9株新城疫病毒F基因上的StuⅠ位点和NP基因上的XbaⅠ位点进行突变,扩增出全长的F、NP以及F48E9株新城疫病毒M和HN基因片段,将其克隆到pMD18-T载体,再将F、NP、M和HN基因依次亚克隆到杆状病毒转移载体pAeAB4上,F基因和M基因均在p10启动子的操控之下,NP基因和HN基因构建到两个polyhedrin启动子下游,构建重组杆状病毒转移载体pAeAB4-F-NP-M-HN。pAeAB4-F-NP-M-HN与线性化的杆状病毒DNA共转染昆虫细胞Sf9,获得重组杆状病毒rBae-F-NP-M-HN。重组杆状病毒感染Sf9细胞,72h后收集细胞和培养上清。Western blot分析显示:M、NP、F和HN蛋白在培养上清中得到了共表达,大小与预期结果一致;感染细胞内只检测到了HN蛋白的表达。这表明M、NP、F和HN蛋白在昆虫细胞内共表达可以自我装配成病毒样颗粒,并且以出芽的方式释放到培养基中。该重组杆状病毒的获得为研究新城疫病毒各结构蛋白之间的相互作用和确定病毒粒子出芽的驱动力等方面奠定了基础。 相似文献
993.
将pGEX-3X中由血吸虫(Schistosomajaponicum)编码的26kD谷胱甘肽转移酶基因Sj26和凝血因子Xa凝血酶位点引入到BacPAK8构建了融合表达杆状病毒转移载体BacSj26;将28kD的谷胱甘肽转移酶基因通过PCR突变消除终止密码后,引入BacPAK8构建了融合表达转移载体BacGST28。将P(MFHT)中的6×His序列克隆进BacPAK8,从而构建了6×His融合表达转移载体BacHis。这些融合表达转移载体的构建,为表达产物的一步纯化奠定了基础。 相似文献
994.
995.
《果树学报》2017,(8)
【目的】研究香蕉MaGTL1a转录因子的特性及其基因表达规律,探讨MaGTL1a转录因子在香蕉果实成熟过程中的作用。【方法】以香蕉果肉c DNA为模板,采用RT-PCR获得MaGTL1a序列;利用烟草瞬时表达法和酵母系统分析MaGTL1a亚细胞定位和转录调控活性;通过实时荧光定量PCR分析MaGTL1a在香蕉果实成熟过程中的表达;运用烟草BY2悬浮细胞瞬时表达法研究MaGTL1a启动子活性。【结果】MaGTL1a c DNA序列含有1个2 283 bp的开放阅读框,编码761个氨基酸,属于trihelix转录因子的GT-2亚家族;亚细胞定位和转录活性分析显示,MaGTL1a定位于细胞核,并在酵母和植物体内具有转录激活活性;实时荧光定量PCR和启动子活性试验表明,MaGTL1a转录水平和启动子活性均受乙烯诱导,并且MaGTL1a转录水平随着香蕉果实的成熟进程而明显增强。【结论】MaGTL1a是一个受乙烯诱导和核定位的转录激活子,可能参与了香蕉果实成熟的调控。 相似文献
996.
QU Chun-feng LI Sheng LI Hui DU Feng-jiao LEI Wei WU Zhu-lian LI Xiang-ping SHI De-shun 《中国畜牧兽医》2015,42(7):1621-1629
Cloning buffalo AQP9 gene and analyzing its expression in buffalo tissues.A pair of primers was designed according to the released bovine AQP9 sequences in GenBank,which was used to clone buffalo AQP9 gene.The AQP9 gene was amplified by RT-PCR,whose nucleotide sequence and protein structure were analyzed by bioinformatics methods.The expression of AQP9 in buffalo tissues was assayed by Real-time quantitative PCR.The expression of AQP9 gene in buffalo ovary and testis tissue was detected by immunohistochemical staining method.The results showed that the cloned ORF length of buffalo AQP9 gene was 888 bp,which coded 295 amino acids.The results of multiple sequence comparison showed that the nucleotide sequence of buffalo AQP9 shared 99%,90%,97% and 88% homologeous compared with that of Bos taurus,Sus scrofa,Ovis ariessis and Homo sapiens,respectively,while shared 99%,86%,97%,83% homologeous for amino acids,respectively.Phylogenetic tree analysis indicated that AQP9 gene was highly conservative in the evolutionary process.Real-time quantitative PCR results showed that AQP9 gene expressed in buffalo liver,lung,brain,skin,testis and ovary tissues with different levels,had the most abundant expression in liver,followed by in skin and testis,less observed in lung and ovary.The results of immunohistochemical staining showed that the expression of AQP9 protein varied with the development of buffalo ovarian tissue,and gradually enhanced with follicle development.In testicular tissue,AQP9 protein expressed in spermatocyte and leydig cells of developmental stage testis.These results indicated that we had successfully cloned buffalo AQP9 gene sequences.The expression and its function of AQP9 in buffalo ovaries and testes might play an important role in follicle development and spermatogenesis. 相似文献
997.
《畜牧与兽医》2015,(9):1-5
对蓝舌病毒(BTV)8型群特异性抗原VP7蛋白进行了原核表达,制备了单克隆抗体(McA b),并分析其特性。将BTV 8型VP7蛋白基因分别克隆至p ET-28a-c(+)和p MAL-c5x载体中,在大肠杆菌中诱导表达分别带组氨酸标签(His)和麦芽糖结合蛋白(MBP)标签的的融合蛋白His-VP7和MBP-VP7。用纯化的His-VP7免疫BALB/c小鼠制备McA b,以MBP-VP7为包被抗原筛选分泌McA b的杂交瘤细胞。筛选出的1株抗BTV的McA b命名为3F4,亚类鉴定为IgG 1型;该单抗既能与重组BTV VP7蛋白发生反应,又能识别BTV,为BTV的血清学检测提供了工具。 相似文献
998.
999.
本研究针对迄今有关小麦小分子RNA(miRNA)家族成员介导植株氮素吸收和利用机理尚少见报道的现状,对TaMIR1129的表达特征和介导植株抵御低氮逆境功能进行了研究。结果表明,TaMIR1129呈低氮胁迫诱导表达,表现为随氮浓度降低(0.02~6mmol/L)和处理时间延长(0~48h)表达水平不断增高特征。此外,低氮诱导的高表达水平在恢复供氮后表达下调。表明该miRNA对介质中氮素应答呈典型的时间及浓度依赖特征。TaMIR1129作用2个靶基因,包括Molybdenum cofactor sulfurase(TaMCS)和Major facilitator family transporter(TaMFFT),上述基因应答低氮特征与TaMIR1129相反。遗传转化结果表明,超表达TaMIR1129具有显著增强植株抵御低氮逆境的能力。表现为与野生型对照相比,转基因系Sen 1和Sen 2低氮处理后植株形态增大,干质量增加,氮累积量增多。表明TaMIR1129与作用靶基因构建miRNA/target模块在介导植株抵御低氮逆境中发挥重要作用。 相似文献
1000.