啃馒头睡澡堂的场长

湖南省西洞庭农场垦殖前是一望无际的荒湖荒洲,芦苇丛生,淤泥有一两米深,血吸虫猖獗.1955年2月,曾给陈毅、陈国栋担任过警卫员的南下干部王月奎奉命带领小分队来到西洞庭勘测地形,那一年他28岁.王月奎先后担任过农场机务队队长、党总支书记、副场长、党委副书记、场长顾问,直到1990年2月离休.     

仁寿县血吸虫病现状和生态治理技术

本文在分析仁寿县血吸虫病防治历史、现状的增加上,依据山丘区钉螺分布的格局,提出了各类型抑螺防病林的构建模式.     

日本血吸虫SjELAV-like 1的克隆、表达及功能分析

【目的】克隆和表达日本血吸虫胚胎致死异常视觉基因1（SjELAV-like 1）,分析其在日本血吸虫体内的表达情况及定位,探究该基因对日本血吸虫形态和生殖发育的影响。【方法】利用RACE技术扩增5′/3′末端,获得SjELAV-like 1基因序列提交至NCBI,Gene Bank登录号：MG515727,构建该序列的重组表达质粒 pET28-SjELAV-like 1,并在大肠杆菌BL21中利用IPTG诱导表达,收集不同诱导时间的菌体,SDS-PAGE法进行蛋白电泳。利用His镍柱亲和层析法纯化大量表达所得重组蛋白,用纯化重组蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体,用于Western blotting 分析虫体内该天然蛋白的免疫原性,以及间接免疫荧光检测该蛋白在虫体内的分布情况。小鼠腹部贴片法感染日本血虫尾蚴,收集虫体不同发育阶段混合和合抱分开的雌、雄虫体,以单钉螺逸出的尾蚴感染小鼠获得25 d单性雌、雄虫体,通过实时定量 PCR分析该基因的表达情况。通过尾静脉注射小干扰RNA（siRNA）于感染小鼠体内,使该基因表达沉默,筛选最佳干扰效果的siRNA,用于长期RNA干扰（RNAi）试验,分析其对日本血吸虫雌虫产卵及卵胚孵化的影响。利用扫描电镜和透射电镜观察RNAi对虫体体被结构及雌、雄虫生殖器官的影响。【结果】获得的1 797 bp的SjELAV-like 1基因序列含有poly A尾,其中编码序列为1 533 bp,编码510个氨基酸。重组质粒pET28-SjELAV-like 1在诱导4 h时表达量最高,主要以包涵体的形式存在,利用纯化蛋白获得了优质多抗,获得的重组蛋白具有良好的免疫原性,经分析发现SjELAV-like 1蛋白主要分布在虫体体被。RT-qPCR 发现SjELAV-like 1在不同时期雌、雄虫体内均有表达,在雄虫体内表达稳定,但在雌虫体内随着发育成熟其表达水平呈下降趋势;在不同感染状态的雌、雄虫体内,与正常发育雌虫相比,该基因在发育阻遏雌虫体内高表达,而在雄虫体内无明显差异。RNAi试验中,与NC组相比,长期干扰组小鼠肝减卵率、雌虫对肝卵贡献减少率和卵胚减孵化率分别为58.27%（P＜0.05）、40.59%（P＜0.01）和74.58%（P＜0.01）;电镜观察发现,干扰组虫体体被结构改变,雄虫体表粘附的泡状物消失,立体的褶脊结构塌陷,整齐排列的条索状皮脊变的疏松,网状结构消失,雌虫体壁表面组织间隙增宽,分布于其上的体棘减少、变钝,雄虫精母细胞数目减少,其内的染色质减少,细胞肿大,细胞间质增宽,雌虫卵黄细胞中卵黄球减少,其中包含的卵黄滴也减少,内质网肿大,皮质颗粒排列散乱。【结论】成功克隆和表达了在日本血吸虫发育阻遏雌虫中高表达的部分SjELAV-like 1基因序列,且发现该基因主要在虫体体被表达。该基因沉默使肝脏荷卵数、雌虫对肝卵贡献率和卵胚孵化率均显著降低,并改变虫体体被结构,抑制生殖腺的正常发育,提示该基因对日本血吸虫的生殖发育有重要的作用。     

抗血吸虫Ⅱ号对绵羊自然感染东毕吸虫的驱杀效果观察

应用抗血吸虫Ⅱ号,对绵羊自然感染的东毕吸虫进行驱杀试验,结果表明：３０ｍｇ／ｋｇ体重剂量１交用药卵转阴率为８５％;虫卵减少率达９５．５５％,残余虫卵变形,孵化率很低,说明该药是驱杀东毕吸虫的理想药物。     

日本血吸虫22.6 ku膜相关蛋白基因的克隆及原核表达

为了得到重组的日本血吸虫22.6 ku膜相关蛋白,研究设计了1对引物,以日本血吸虫mRNA为模板,用RT-PCR方法克隆了576 bp的22.6 ku膜相关蛋白基因片段,测序结果表明,该片段与已公布的Sj22.6基因序列(U75510)同源性达到99%。将该基因片段插入原核表达载体pGEX-KG构建了原核表达质粒pGEX-Sj22.6,在大肠杆菌BL21 codn plus中表达获得了约48 ku的融合蛋白,经Western-blot检测,该重组蛋白具有良好的免疫原性。     

日本血吸虫含EF手性结构域分子序列的分析和初步鉴定

为分离鉴定日本血吸虫含EF手性结构域分子及分析其序列结构特征,首先找到含有EF—hand结构域的分子,按照序列一级结构进行分类,之后进行生物信息学分析。然后用PCR方法以虫卵和成虫cDNA文库为模板扩增分类后的分子,构建重组质粒,诱导蛋白表达并纯化,选取14个纯化蛋白用Western blot进行初步免疫原性鉴定。结果269个原始含EF-hand结构域分子按照序列一级结构分为70个;成功表达和纯化了49个含EF手性分子,进化树分析将其分为9类;Western blot显示,14个纯化蛋白均可被日本血吸虫感染小鼠阳性血清识别。本研究结果为下一步采用这类分子进行动物保护性效果评价以及保护性免疫机制的研究奠定了基础。     

茶皂素杀灭钉螺的初步研究

钉螺是日本血吸虫的中间宿主,消灭钉螺是防治人畜血吸虫病的重要环节。本试验采用茶籽中提取的茶皂素杀灭钉螺。试验分５组,每组钉螺３０只,各组分别以４×１０－６,６×１０－６,８×１０－６,１０×１０－６,１５×１０－６浓度的茶皂素醋酸溶液浸没钉螺,浸杀时间分２４ｈ和４８ｈ两组。结果２４ｈ组的钉螺死亡率分别为２３％、３０％、３０％、３７％和３３％;４８ｈ组死亡率分别为６１％、９６％、８５％、９３％和９６％。说明茶皂素对钉螺有一定的杀灭作用。     

三种抗原对家畜日本血吸虫病诊断价值的比较

以日本血吸虫基因重组抗原LHD-Sj23／pGEX、可溶性虫卵抗原（soluble egg antigen，SEA）及SEA经Sephadex G-200柱层析分离后得到的第一峰SEAl作为诊断抗原，应用ELISA检测人工感染日本血吸虫绵羊血清及自然感染日本血吸虫水牛血清。结果显示，三种抗原用于检测人工感染日本血吸虫绵羊血清的阳性符合率分剐为88．79％、98．15％、100％，阴性符合率均为100％；自然感染日本血吸虫水牛血清的阳性符合率分别为80％、80％、84％，阴性符合率分别为88．9％、93．3％、91．1％；三种抗原与伊氏锥虫病牛血清无交叉反应；检测感染日本血吸虫不同时间绵羊血清，发现感染6周后均被检出针对这三种抗原的特异性抗体，且SEA及SEAl在感染4周后即可检出特异性抗体。三种抗原的诊断效果差异不显著。     

湖北省荆州地区野鼠自然感染日本血吸虫的调查研究

为了解湖北省荆州地区野鼠自然感染日本血吸虫的情况,采用解剖学与粪便检查法进行检测。结果显示,野鼠总感染率为13.89%,其中野鼠自然感染率分别为黄胸鼠10.77%,褐家鼠19.18%,黄毛鼠9.76%及黑家鼠13.51%;4种野鼠在居民区、果园及农耕区的感染率为13.77%、10.00%和16.67%,三者无显著性差异,雌雄间感染率亦无显著性差异。各年龄组中,以成体组感染率较高,排卵量以黄毛鼠居高。感染鼠类的分布与阳性钉螺的存在及其感染率密切相关。