Screening and Identification of Protease-producing Bacillus amyloliquefaciens from Pig's Intestines and the Preliminary Study of Its Enzymatic Properties

A Bacillus strains,MY-6 strain which secreted high amount of protease was isolated from healthy pig's intestines,and it was identified as Bacillus amyloliquefaciens by the methods of morphological observation, biochemical tests,16S rDNA sequence amplification and comparison, biolog identification. In order to get an initial understanding of the enzymatic properties of its protease, the dynamic relationship between protease activity and bacterial life cycle, effects of pH,temperature,metal ions and inhibitors on protease activity,and the protease hydrolysis of different substrates were investigated. The results showed that,the protease synthesis of MY-6 strain was synchronized with its spore formation which began in the early stage of the exponential growth phase. The optimum conditions for the protease was 40℃ and pH 7.0,Ca²⁺ and Mn²⁺ had a intensive effects on the protease activity, PMSF could completely inhibit the activity of protease, indicating that the protease was a serine protease.The content of TCA soluble peptides for protein hydrolyzate fish protein, soybean protein, corn protein and casein was 0.83,0.67,0.58 and 0.38 μmol/g,respectively. In conclusion,Bacillus amyloliquefaciens MY-6 strain could be used as an initial selection of probiotic Bacillus to improve protein digestion.     

大肠杆菌(O157)酶联免疫检测及注意事项

1材料与方法 1.1材料 抗原为Eae-Stx1/2B纯化蛋白;EHEC O157标准菌株(EDL933).抗体为单抗2H9纯化腹水,蛋白浓度为4.16毫克/毫升. 1.2方法 EHEC O157检测方法的建立.抗原包被浓度和抗体工作浓度的初步选择,用PBS调整Eae-Stx1/2B纯化蛋白浓度为8、4、3、2、1、0.5、0.25、0.125、0.06微克/毫升,纵向包被1小时,封闭,洗涤,单抗从1:1000开始进行倍比稀释,横向加入各孔内,37℃反应1小时,加酶标二抗,洗涤,加底物液显色后终止,测定OD值.以OD值接近1.0,且前后稀释度出现较大变化时,该孔的包被浓度初步确定为最佳包被浓度,该孔抗体的稀释倍数为单抗的初步工作浓度.抗原的最佳包被温度和包被时间的确定.取5块酶标板,用初步确定的Eae-Stx 1/2B纯化蛋白的最佳包被浓度包被酶标板,分别于37℃0.5小时、37℃1小时、37℃2小时、37℃3小时、37℃4小时温育和4℃过夜;以初步确定的单抗工作浓度进行间接ELISA检测,测定其OD值.OD值最大最稳定的为最佳包被温度和时间.     

家畜日本血吸虫病血清学诊断方法浅析

笔者多年从事家畜日本血吸虫病的实验室诊断工作，近十几年来，随着科技的进步，在家畜日本血吸虫病的诊断方面涌现出许多血清学诊断方法。这些血清学诊断方法有什么异同，如何选择适合本地使用的方法，笔者根据多年的实践，以及对部分诊断方法的选用，积累了一定的经验，在此作一浅析，谨供家畜血防工作者参考。     

IPMA检测猪生殖和呼吸综合征病毒抗体的研究

本研究在国内首次成功地建立了免疫过氧化物酶单层细胞试验（ＩＰＭＡ）检测猪生殖和呼吸综合征病毒（ＰＲＲＳＶ）抗体。应用ＩＰＭＡ检测了北京地区３个猪场９４份血清发现，英国株抗体阳性检出率为９．６％（９／９４），美国株Ｍ１的抗体阳性检出率为５１％（４８／９４）。同间接荧光抗体试验ＩＦＡ比较阳性检出率基本一致。利用ＩＦ和ＩＰＭＡ两种方法检测１８２份加拿大进口猪血清均有３头阳性，且编号相同，本试验证实了ＩＰＭＡ是一种检测ＰＲＲＳ抗体的有效方法，可应用于ＰＲＲＳ的血清学检测     

ELISA方法的改进及其在口蹄疫病毒诊断中的应用

对ELISA方法的类型及近年来在方法的改进方面作了简要的叙述,并列举了1974～1988年各国学者用ELISA诊断口蹄疫的进展情况。     

秸秆饲料酶解处理技术应用研究

用正交试验法探讨了以玉米和小麦秸秆为原料进行纤维素酶解处理的工艺条件,正交试验结果表明:影响纤维素降解的因素主次顺序为:处理时间→原料→粗酶→环境pH。纤维素酶降解秸秆的最佳工艺条件是:在玉米秸秆细粉中使用绿色木霉8 m l,无需调整环境pH,处理16 h即可得到最佳酸性洗涤纤维降解率。     

酵母酶解物在断奶仔猪上的应用研究

酵母是人类应用量最大的一种微生物,其活性酵母因作为益生菌在畜禽动物上的应用已很广泛。而酵母菌体本身又含有丰富的蛋白质、糖分和B族维生素等,以及酶、辅酶、核糖核酸、甾醇和一些新陈代谢的中间产物,作为常规蛋白饲料原料在畜禽水产动物饲料中也应用比较广泛。而作为蛋白原料的酵母没有酶解破壁,其营养物质受到外层细胞壁的限制而使其应用效果达不到酵母应有的功效。酵母酶解物是采用特殊的工艺技术,经过酶解破壁,将其营养物质充分释放,各种营养物质得到充分释放而使酵母的作用发挥到极致。酵母酶解物作为功能性添加剂在断奶仔猪上的应用效果试验表明,其具有提高断奶仔猪采食量、补充应激情况下核酸的合成不足、修复因应激反应导致的肠道粘膜损伤、提高仔猪免疫力和促进仔猪日增重等作用。     

夹心酶联免疫吸附试验检测包虫病循环抗原

建立了检测包虫病循环抗原的夹心酶联免疫吸附试验。对１３０份阳性血清（猪６５,羊６５）作了检测,总阳性率为７９．２％,抗原最小检出量为５０μｇ／Ｌ。